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       【摘要】 
       目的观察川芎嗪对血管再狭窄大鼠血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）、内皮素（ET）与血小板源生长因子（PDGF-B）的影响。方法制备大鼠血管再狭窄模型，观察颈总动脉形态学变化，放射免疫法测定血浆Ang Ⅱ与ET含量，免疫组化法观察颈总动脉PDGF-B表达。结果颈总动脉损伤后14 d，平滑肌细胞大量增殖，AngⅡ、ET含量显著升高（均P<0.01），平滑肌PDGF-B表达显著增强（P<0.01）。川芎嗪抑制平滑肌细胞增殖，显著降低AngⅡ、ET含量及PDGF-B的表达。结论川芎嗪通过降低AngⅡ、ET含量及抑制PDGF-B表达实现抗血管再狭窄作用。
       【关键词】  川芎嗪； 再狭窄； 内皮素； 血管紧张素Ⅱ； 血小板源生长因子
       Effects of Ligustrazine on Endothelin, Angiotensin II and Expression of PDGF in Carotid Artery Restenosis  Rats
       SUN Yinping, WANG Xing, ZHANG  Dawei,GUO Yong,WANG Yuxia
       （Xinxiang Medical College, Xinxiang，Henan 453003, China）
       Abstract：ObjectiveTo observe the effects of ligustrazine on endothelin and angiotensin II levels and expression of PDGF-B in carotid artery restenosis rats.MethodsRestenosis model was established and the rats were treated with ligustrazine from three days before operation. The morphologic change and levels of AngⅡ and ET were measured.The expression of PDGF-B was detected by immunohistochemical technology.ResultsCompared with sham, the sections of injured carotid artery showed large numbers of proliferating VSMCs throughout intima and media, the levels of AngII and ET were obviously increased（P<0.01, respectively）, the expression of PDGF-B was significantly increased（P<0.01）in operation group. VSMC proliferation was inhibited and the ET and AngII levels, expression of PDGF-B were decreased obviously by ligustrazine.ConclusionLigustrazine can prevent restenosis through reducing the Ang Ⅱ, ET levels and inhibits the PDGF-B expression.
       Key words：Ligustrazine;   Restenosis;   Endothelin;   Angiotensin Ⅱ;   Platelet-derived growth factor
       
       经皮穿刺冠状动脉腔内成形术（PTCA）是治疗冠心病的重要措施之一。但术后3～6个月仍有25%～35%的患者发生再狭窄，这是影响PTCA术后远期疗效的重要因素。中药川芎的主要活性成分川芎嗪(ligustrazine)对多种心血管疾病具有保护作用［1］。本实验以颈总动脉损伤术大鼠为模型，观察川芎嗪对颈总动脉的病理学改变，血浆血管紧张素II(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)、内皮素（endothelin，ET）含量与血管平滑肌血小板源生长因子（platelet-derived growth factor B，PDGF-B）的影响，以探讨川芎嗪对血管再狭窄的防治作用。
       1  材料与方法
       1.1   动物模型    健康雄性SD大鼠30只 （河南省实验动物中心），体重280～300 g，随机分为3组（n=10）。①手术组：参照文献制备颈动脉狭窄模型［2］。全身麻醉后，两片已消毒的有机玻璃夹板夹闭颈总动脉25 min后松开，移去夹板。缝合伤口，回笼饲养。②川芎嗪组：于血管损伤术前3 d开始腹腔注射川芎嗪溶液（60 mg/kg·d，无锡市第七制药有限公司，批号05111711），其余操作同手术组。③假手术组：左侧颈总动脉不上夹板，余操作同手术组。
       1.2  放射免疫法测定AngII与ET含量   取血2 ml，加入10%EDTA混匀离心，取上清液测ET；取血2 ml，加入抗凝管中混匀，4℃放置2h后离心，取上清液测AngⅡ。SN-695B型放射免疫γ计数器测定（上海核所日环光电仪器公司）。严格按照放射免疫分析药盒说明书（北京北方生物技术研究所），批内变异系数<10%，批间变异系数<15%。
       1.3  组织学研究全身麻醉状态下处死大鼠，取左侧颈总动脉，常规固定、包埋、切片、苏木素-伊红染色后，在光镜下观察。
       1.4  免疫组化法测定动脉平滑肌PDGF-B的表达  切片脱蜡至水、灭活内源性酶，正常山羊血清封闭，加PDGF-B抗体（武汉博士德 ）4℃过夜，复温, PBS 冲洗后，加入生物素化二抗孵育37℃ 30min，PBS冲洗，滴加 SABC，PBS冲洗。最后DAB显色，脱水、透明，中性树胶封片。整个染色过程在湿盒内进行。
       1.5  计算机图像分析系统测定平均光密度  每张切片随机选5个视野，得其平均光密度总数，然后取平均值表示蛋白表达量，平均光密度值大说明表达程度低。
       1.6  统计学处理   所有数值均以±s表示，采用SPSS11.0计算机统计软件One-Way ANOVA 程序分析。
       2  结果
       2.1  病理学观察 与假手术组比较，损伤14 d血管内腔面变得粗糙，中层VSMC大量增殖，并且向内膜下迁移，突向管腔并造成管腔狭窄。应用川芎嗪后VSMC增殖程度明显降低。
       2.2  血浆AngⅡ和ET含量变化与假手术组相比，颈总动脉损伤术大鼠血浆Ang Ⅱ与ET含量明显升高；颈总动脉损伤术大鼠应用川芎嗪后AngⅡ与ET 含量明显降低。见表1  。
       表1  颈总动脉损伤术后血浆AngⅡ、ET含量的变化（略） 
       与假手术组比较，*P<0.01 ；与川芎嗪组比较，#P <0.05
       2.3  颈总动脉PDGF-B的表达与假手术组（87.23±15.95）相比，手术组大鼠颈总动脉PDGF-B表达（63.77±13.27）显著增强（P<0.01）；与手术组相比，川芎嗪组大鼠颈总动脉PDGF-B表达（66.12±11.54）显著降低（P<0.05）。
       3    讨论
       
       PTCA后再狭窄主要病理特征为VSMC增殖和内膜增厚，其发生可能与多种神经体液和局部因子的调节紊乱有关。AngⅡ、ET具有强烈促VSMC增殖的作用。AngⅡ与VSMC的AT1结合，主要通过G蛋白激活下游的信号分子磷脂酶C，进一步激活下游的信号分子，最终导致VSMC增殖［3］。ET亦通过其受体与G蛋白偶联，最终促进VSMC增殖［4］。本实验结果显示，颈总动脉损伤术大鼠在术后14 d　VSMC大量增殖，血浆AngⅡ与ET水平均显著升高，提示AngⅡ与ET参与颈总动脉再狭窄的形成。
       
       PDGF是由多种细胞分泌的促细胞生长因子，是VSMC最有力的促有丝分裂原之一。PDGF与其膜表面受体结合，激活受体的内源性酪氨酸激酶活性，通过磷酸化胞浆中的信号分子，最终将信息传递到核内，导致VSMC增殖［5］。本实验结果显示，颈总动脉损伤术大鼠在术后第14天颈总动脉中层VSMC大量增殖，血管平滑肌PDGF-B表达显著增强，提示PDGF介导的细胞信号转导途径在血管再狭窄形成中亦发挥了重要作用。
       
       川芎嗪是从伞形科植物川芎根茎中提取的有效成分，其基本化学结构为四甲基吡嗪，具有清除扩血管、抗血小板聚集与钙拮抗等多种作用［1］。另外，中药川芎嗪价格低廉，临床应用安全性高，值得更加深入地研究其作用机制。实验结果显示，应用川芎嗪后，颈总动脉VSMC增殖程度降低，AngⅡ与ET含量显著降低并且PDGF-B的表达显著减弱。体外细胞培养发现［6］，川芎嗪可以有效地抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞的增殖。此外有文献报道［7］在培养的VSMC液中加入川芎嗪，可显著地抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖，使细胞生长停滞于G0／G1期。结合本实验结果提示，川芎嗪还可以在整体水平上通过降低AngⅡ、ET含量以及PDGF-B的表达抑制动脉再狭窄的发生。详细药理作用尚待进一步研究。
       
       综上所述，川芎嗪可以通过降低Ang Ⅱ及ET含量抑制PDGF-B表达实现抗血管再狭窄的作用。
       【参考文献】
         　　［1］ 梁爱群.川芎嗪的药理及机理研究［J］.时珍国医国药,2005,16（6）:532.
       
       ［2］ 徐红岩,周序斌,胡茂稳,等. 血管内膜增生模型的建立：颈总动脉挤压法［J］.中国药理学通报, 2001,17(6):708.
       
       ［3］ Parmentier JH, Zhang C, Estes A,et al. Essential role of PKC-zeta in normal and angiotensin II-accelerated neointimal growth after vascular injury［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2006,291(4): 1602.
       
       ［4］ Watanabe T, Pakala R, Katagiri T, et al. Angiotensin II and serotonin potentiate endothelin-1-induced vascular smooth muscle cell proliferation［J］. J Hypertens, 2001,19(4):731.
       
       ［5］ Kim TJ, Yun YP. Antiproliferative activity of NQ304, a synthetic 1,4-naphthoquinone, is mediated via the pressions of the PI3K/Akt and ERK1/2 signaling pathways in PDGF-BB-stimulated vascular smooth muscle cells［J］. Vascul pharmacol. 2007,46(1):43.
       
       ［6］ 罗德生,郑红花,李映红,等.川芎嗪抗血管紧张素Ⅱ诱导的离体培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究［J］. 时珍国医国药,2006,17（3）:321.
       
       ［7］ 张 健,蔡生业,姚成芳,等.川芎嗪对PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和骨桥蛋白mRNA表达的影响［J］.山东中医药大学学报，2005，29（3）:230.