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       【摘要】 
       目的确定多序岩黄芪中总黄酮的优选超声提取工艺。方法采用正交实验法，考察溶剂量、提取次数、超声时间、溶剂浓度对提取率的影响，以芦丁为标准品，用紫外分光光度标准曲线法测定含量。结果所考察的因素中，多序岩黄芪总黄酮的提取影响程度为：溶剂浓度>提取次数>溶剂量>超声时间，即乙醇浓度70%，提取时间20 min，体积20 ml，提取次数为3次。结论超声乙醇提取法最佳工艺组合A3B2C1D3，可为利用多序岩黄芪工业生产黄酮类药用成分提供科学依据。
       【关键词】  多序岩黄芪； 总黄酮； 正交实验法
       Study on Ultrasonic Extraction Technics of Total Flavonoids in Hedysarum polybotrys
       HailiqianTaoerdahong，PAlida, HAN  Jia, HE Jian
       (School of  Pharmaceutical Sciences, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054,China)
       Abstract：ObjectiveTo optimize the ultrasonic extraction condition for flavonoids from Hedysarum polybotrys. MethodsThe optimal conditions,such as ethanol concentration,ultrasonic time, solvent quanity and extraction times were determined by orthogonal design. ResultsThe order of factors to affect the flavonoid extraction was ethanol concentration>extraction times>solvent quanity>ultrasonice time. ConclusionThe optimum ultrasonic extraction is：A3B3C3D3.
       Key words：Hedysarum polybotrys；  Total flavons;   Orthogonal test
        
       多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.为豆科Leguminosae 岩黄芪属 Hedysarum植物，《中国药典》2005年版收载的常用中药红芪为多序岩黄芪的根，与黄芪药效相似，有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能。药理研究证明其有强心、利尿降压、护肝、抗肾炎和提高免疫等作用［1］。多序岩黄芪分布地区较广，在新疆、甘肃、青海和内蒙古等地资源丰富。其中具有生物活性的黄酮类化合物具有显著的预防和治疗心血管疾病，具有抗氧化、抗衰老及增强机体免疫等功能。本文首次采用正交实验法考察超声提取多序岩黄芪根中总黄酮的优选提取条件。
       1  材料与仪器
       
       多序岩黄芪采自甘肃后洗净，晒干，60℃烘干粉碎后过60目筛备用，由北京大学药学院天然药物学系杨虎彪教授鉴定。TU-1800型紫外可见分光光度计，SK8210HP型超声清洗机，芦丁对照品（中国药品生物品检定所），分析天平。所用试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备 精密称取在105℃干燥恒重的芦丁对照品20 mg于100 ml容量瓶中，用60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.200 mg/ml标准贮备液备用。
       2.2  供试品溶液的制备 精密称取多序岩黄芪根粉1 g，加70%乙醇20 ml，提取2次，超声提取30 min，过滤，摇匀。再精密吸取2 ml置25 ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。
       2.3  测定波长的选择分别取对照品溶液及供试品溶液各1 ml按“2.4”项下依法操作，用紫外可见分光光度计将对照品溶液及供试品溶液在200～700 nm进行扫描，结果发现对照品溶液及供试品溶液在357 nm附近有最大吸收峰，实验中选择测定波长为357 nm。
       2.4  线性关系考察精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8 ml至于5 ml容量瓶中加乙醇稀释至刻度，摇匀，制成含芦丁4～32 μg/ml的系列标准溶液。以乙醇为空白，在357 nm波长处测定其吸光度，结果表明芦丁在4～32 μg/ml范围内符合Beer定律，吸光度与浓度呈良好的线性关系，其回归方程为：A = 17.63C + 0.046 9，r=0.999 6。
       2.5  提取物中总黄酮含量的测定 精密吸取供试品约10 ml于离心试管中，离心4 000 r/min，10 min，取上清液5.0 ml按“2.4”项下方法处理，测定吸光值，代入回归方程，计算总黄酮含量。
       2.6  提取工艺的单因素［2］考察
       2.6.1  乙醇浓度对提取效果的影响分别以30%，50%，70%，90%乙醇溶液15 ml对1 g多序岩黄芪根提取两次，20 min/次，结果所得总黄酮的浓度为0.036 9%，0.063 4%，0.071 6%，0.053 9%，表明多序岩黄芪根在70%溶液提取效果较好。
       2.6.2  不同时间对提取效果的影响溶剂量为15 ml，乙醇浓度为70%，提取两次，分别用10，20，30，40 min，结果所得总黄酮的浓度为0.077 7%，0.083 4%，0.087 7%，0.079 5%，表明多序岩黄芪在提取时间30 min效果好。
       2.6.3  不同体积的乙醇对提取效果的影响分别用20，30，40，50 ml浓度为70%乙醇溶剂来提取多序岩黄芪，20 min/次，提取两次，结果所得总黄酮的浓度为0.057 5%，0.064 6%，0.071 8%，0.078 2%，表明多序岩在提取溶剂50 ml的时候效果较好。
       2. 6.4  不同提取次数对提取效果的影响乙醇浓度为70%，20 min/次，溶剂量为15 ml来提取，提取次数分别为1，2，3，4次，结果所得总黄酮的浓度为0.049 2%，0.069 1%，0.084 3%，0.070 3%，表明多序岩黄芪在提取次数3次时效果较好。
       2.7  正交实验优化由于各因素之间相互交叉影响，因此为全面考察乙醇提取法的工艺参数，根据单因素实验的结果及在单因素试验的基础上选取乙醇浓度、提取时间、乙醇的体积、提取次数等4个因素对提取多序岩黄芪根中的总黄酮含量效果影响的主要因素（表1），选用L9（34）进行正交实验（表2）设计实验，并对结果进行直观、方差分析。见表3。
       表1  因素水平（略）
       表2  L9（34）正交实验乙醇提取的设计实验及结果（略）
       从表2中R分析可知，乙醇浓度、提取时间、乙醇的体积、提取次数对黄酮的提取量影响的主次顺序为提取时间→溶剂体积→提取次数→乙醇浓度，并且最佳的提取工艺条件为浓度70%，提取时间20 min，溶剂体积20 ml，提取次数3次，即A3B2C1D3。
       表3  正交实验结果的方差分析（略）
       3  讨论
       
       根据以上的结果讨论可知，多序岩黄芪根中含有丰富的黄酮类化合物，本文详细地探讨了多序岩根中黄酮类物质总黄酮的提取工艺，为开发利用该资源提供有益的参考。
       
       通过实验研究得到的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度70%，提取时间20 min，溶剂体积20 ml，提取次数3次，即A3B2C1D3，在最佳提取工艺条件下测得多序岩根中总黄酮为0.07418%。本研究为进一步开发利用多序岩黄芪黄酮类化合物奠定了坚实基础。
       【参考文献】
         　　［1］ HAI Li-qian , Zhang Qing-ying , LIANG hong ,et al. Studies on chemical constituents of Hedysarum Polybotrys［J］.Acta pharmaceutica sinica，2003, 38(8):592.
       
       ［2］ YIN Hong，HU Yong-zhou，YANG Xin-ji ，et al. Study on ultrasonic extraction technics of flavonoids in Chrysanthemum morifolium［J］.China Journal of chinese materia medica，2004，29（5）424.