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       【摘要】 
       目的研究桃仁多糖提取工艺参数。方法通过单因素实验及正交实验研究固液比、温度、时间及提取次数对桃仁多糖提取率的影响，用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果桃仁多糖提取最佳工艺条件为提取温度80℃，提取时间4 h，固液比1∶30，提取2次。结论该方法简单、环保，提取效果好，桃仁中多糖含量为1.83%。
       【关键词】  桃仁； 多糖； 提取
       Optimization of the Technology for Polysaccharide Extraction from Semen Pruni Persicae
       WANG Liang,  JIANG Bo*,WANG Xichun, FAN Shengdi
       （College of Life Science, Dalian Nationalities University, Dalian 116600, China）
       Abstract：ObjectiveThe extraction for polysaccharides in Semen Pruni Persicae with water was studied and the content of polysaccharide was determined. MethodsThe effects of ratio of material to water, extracting temperature, extracting time and extracting times on the yield of the polysaccharides were studied through both single factor and orthogonal experiments. The method of phenol-sulfuric acid was employed to determine the content of the polysaccharides.ResultsThe optimum technological parameters were as follows: extracting temperature 80℃, extracting time 4 h, the ratio of material to water 1∶30, and extraction for 2 times.ConclusionThe extracting method studied in this paper is simple, environmental protective and efficient. The extracting yield of polysaccharides in Semen Pruni Persicae is 1.83%.
       Key words：Semen Pruni Persicae；  Polysaccharide；  Extraction
       
       桃属于李属Prunus、桃亚属Amygladus蔷薇科植物。中国是桃亚属植物的起源中心，有着丰富的资源［1～3］。桃仁为桃和山桃的种仁，味甘、苦，性平，具有活血化淤、润肠通便、改善血液循环、抗过敏、镇痛止咳、抗炎、保肝、抗衰老等功效［4～6］。桃仁虽有很好的医疗和保健作用，但目前其产品研发力度不够，对桃仁成分的研究甚少。植物多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤等功效，目前已成为国内外研究的热点［7～11］，但桃仁中多糖的研究未见报道。本研究利用水作溶剂对桃仁多糖的提取进行了研究，现报道如下。
       1    器材与方法
       1.1   仪器与试剂WFJ2100型分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），UV-9200紫外-可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司），恒温水浴锅（金北得工贸有限公司），TDL80-28台式离心机（上海安亭精密仪器厂）。所用试剂均为国产分析纯。
       1.2   材料桃购于大连开发区农贸市场，取仁用之。
       1.3   桃仁多糖提取工艺流程及方法桃仁→粉碎→称量→加水调配→水浴提取多糖→离心除去杂质→浓缩→乙醇沉淀→干燥→粗多糖
       
       准确称取粉碎后的已干燥桃仁2 g，放入三角瓶中,按各预设条件(温度、固液比、时间、提取次数)在水浴中进行水提，然后将其用离心机以4 000 r/min离心18 min，得上清液，经浓缩，再加入5倍体积的乙醇，摇匀后，在4℃冰箱中放置24 h，再以4 000 r/min离心20分。沉淀经干燥后得到粗多糖。
       1.4  单因素实验对固液比、提取温度、提取时间、提取次数进行单因素实验，多糖得率按如下公式计算。
       
       质量比多糖得率（%）=提取的多糖质量试样质量（2 g）×100%
       1.5   正交实验选L9（33）正交实验，以确定桃仁中水溶性多糖提取的最佳工艺参数。水平因素表见表1。
       表1  水平因素（略） 
       1.6   多糖含量的测定采用硫酸－苯酚法［12］测定所提取的桃仁多糖中多糖含量，然后根据所用桃仁的质量（2 g）计算出桃仁中多糖得率。
       2   结果
       2.1    影响多糖提取率的单因素研究
       2.1.1   提取温度对多糖得率的影响实验在70，75，80，85，90℃ 5 个温度下,用30倍的水提取3 h。结果见图1。
       图1  提取温度对桃仁多糖得率的影响（略） 
       
       由图1可知，温度对桃仁多糖提取率有显著的影响。在70～80℃桃仁多糖提取率随温度的上升而显著上升,但当继续升温时，多糖的得率逐渐下降。这是因为温度升高，加速植物细胞的破裂,同时增加了水对多糖的溶解度，从而使得多糖溶解量的增加。但温度高于80℃时，多糖得率有所下降，这可能是由于在较高温度下提取使大分子多糖的糖苷键断裂造成了多糖的部分损失［12］，所以可以确定80℃时为适宜的提取温度。
       2.1.2   固液比对多糖得率的影响实验固定提取温度为80℃，提取时间3 h，桃仁与水之比分别以1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50进行实验。结果见图2。
       图2  固液比对桃仁多糖得率的影响（略） 
       
       由图2可知，固液比从1∶10增加到1∶40时，桃仁多糖的得率逐渐提高，这是因为固液比越大，细胞内外的多糖浓度差就越大，有利于多糖的溶解，但多糖的含量是一定的，当多糖接近全部溶出后，多糖得率便不会随水的增加而增大。但当固液比大于1∶40时，增大固液比对桃仁多糖提取得率略有减少，这可能是由于固液比的加大，随多糖一起浸出的杂质也增多，但在醇沉时，这些杂质没有随多糖一起沉淀，同时可能还有一定量的多糖保留在乙醇溶液中而未沉淀［13］。适宜的固液比为1∶30。
       
       2.1.3   提取时间对多糖得率的影响实验固定提取温度80℃，固液比1∶30，提取时间设1，2，3，4 h。结果见图3。
       图3  提取时间对桃仁多糖得率的影响（略） 
       
       由图3可知，桃仁多糖的提取率随时间的延长有所增加，但将多糖大部分提取出来后，增加提取时间多糖提取率增长的幅度较缓慢，选择提取时间为4 h。
       2.1.4   提取次数对多糖得率的影响选用温度80℃，固液比1∶30，时间3 h，共提取3次。
       
       由图4可知，第1次与第2次多糖提取率相差比较大，说明第1次已经将多糖大部分提取出来了，第2次以后提取对桃仁多糖提取率较小。故提取次数两次为宜。
       2.2   最佳提取条件的确定根据以上单因素实验的结果可知，桃仁多糖的得率与提取温度、固也比、提取时间3个因素的关系最大，选择这3个因素进行正交实验，所得的多糖用硫酸－苯酚法测定其中的多糖含量，然后计算出桃仁中多糖的得率，正交实验结果见表2。
       图4  提取次数对桃仁多糖得率的影响（略） 
       表2  正交实验L9 （33）实验结果（略） 
       比较3个因素的极差R值，RB＞RA＞RC，可看出温度对提取多糖得率影响最大，其次为固液比，最后为浸提时间。
       
       通过正交实验可以看出实验5的多糖得率最高，它的水平组合是A2B2C3但此方案是否为最好还不能确定，因为我们只做了9次实验，其余18个方案未进行实验，但可以用实验结果来分析出最佳的水平组合。先计算出各个因素各水平上实验指标之和K，然后计算出平均得率k，从表中可看出因素A以A2（1∶30）最高，称为因素A的最优水平，同理可以得出因素B和C的最优水平为B2和C3，这与实验5得出的结论完全吻合，所以可以确定1∶30的固液比，提取温度80℃，提取4 h为最佳提取工艺条件。
       3  结论
       
       通过单因素实验和正交实验可以得出，在影响桃仁多糖得率3个主要因素中，温度的影响最显著，其次为固液比，最后为提取时间。桃仁多糖水浸提法提取的最佳工艺条件为:提取温度80℃，固液比1∶30，提取时间4 h，提取次数为2次。在此条件下进行实验，桃仁多糖得率为1.83%。本研究对桃仁资源的综合利用、新功能性食品的开发具有重要意义。
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