文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的研究大蒜素对隐孢子虫感染小鼠的治疗效果，进一步观察大蒜素抗隐孢子虫的免疫机制。 方法建立免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠模型,随后用大蒜素治疗,并设生理盐水对照组。按时计数小鼠粪便中卵囊数量，第11天测定小鼠外周血T 细胞亚群、血清可溶性白细胞介素- 2受体( sIL-2R ) 和肠液分泌型免疫球蛋白A ( sIgA) 的水平。结果与对照组相比较,治疗组小鼠粪便卵囊排出数量明显减少( P < 0. 01) ，并且大蒜素可以提高免疫抑制小鼠的CD4+ T 细胞水平，促进肠道粘膜sIgA 的产生，降低外周血sIL-2R水平。结论大蒜素对免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠的治疗作用是通过提高机体免疫功能来发挥的。
       【关键词】  大蒜素 免疫抑制 隐孢子虫 免疫功能
       隐孢子虫( Cry ptos pori di um ,CPS) 是一种人畜共患肠道寄生原虫,呈全球分布，产生重要的公共卫生问题，尤其在免疫功能低下或缺陷者更易致严重腹泻感染。近年来发现的病例日趋增多，国内试用大蒜素治疗该病效果较好［1］，但因观察病例较少，并且具体药物作用机制不是很清楚。本实验通过建立隐孢子虫感染小鼠模型，用大蒜素治疗后检测小鼠粪便中排出卵囊数量的变化，以及检测小鼠外周血T 细胞亚群、血清可溶性白细胞介素- 2 受体( sIL-2R) 和肠液分泌型免疫球蛋白A ( sIgA) 的水平来观察小鼠的免疫功能，为探讨该疾病的发病、治疗机制提供一定的依据。
       1  材料与方法
       1.1   材料人源隐孢子虫卵囊(CSO) 引于南京医科大学病原生物学教研室。大蒜素胶囊，湖北金龙福药业有限公司生产,国药准字：H42022592 ，用生理盐水配制成1 mg / ml液体供实验用。地塞米松磷酸钠注射液（DEXp，5 mg/ml）：山东鲁抗辰欣药业有限公司，临用前用自来水配成15 μg/ml的浓度。可溶性白介素2受体 ( sIL-2R) 、分泌型免疫球蛋白IgA ( sIgA) 的EL ISA 试剂盒购自北京尚柏生物医学技术有限公司。检测CD4和CD8 T细胞的试剂为美国BD PMG公司产品，检测CD4的单抗为FITC标记的小鼠IgG2a,测CD8的单抗为PE标记的IgG2a，两者配以同型对照，用BECKMANCOULTER，FC500型流式细胞仪。
       1.2  方法
       1.2.1  动物模型的建立与分组   昆明种小鼠36只， 雌雄各半(体重18～22 g，5 周龄) ，由本校实验动物中心提供。连查3 d其粪便无隐孢子虫卵囊排出。随机取出12只作为正常对照组，正常组采用普通喂养，对其它24只小鼠在饮水中添加15 μg/ml地塞米松DEX免疫抑制，5 d后经口接种1×106 个隐孢子虫卵囊一次，3 d后检查其粪便检测到CSO，获取隐孢子虫感染阳性小鼠模型［2］，随机分为模型对照组和大蒜素治疗组各12只，治疗组立即采用大蒜素胶囊液灌胃，取大蒜素胶囊用生理盐水配成液体，浓度为1mg / ml，1 ml/次，2次/d灌胃，共给药11 d；模型对照组同法给予等量生理盐水灌胃。
       1.2.2   粪便中卵囊的测定治疗后每天分别收集模型组、治疗组小鼠粪便，24 h 之内检查和计数。用蔗糖密度梯度离心法提取卵囊，用改良抗酸法镜检，按如下公式计算卵囊数量：每克粪便中卵囊个数(OPG) =〔(A / 4) ×2 ×5 ×104 〕/ M ，其中A为卵囊总数，M为粪便重量(g) 。
       1.2.3  外周血T 细胞亚群及血清中sIL-2R 的测定在灌服大蒜素胶囊第11天摘除眼球取血，一部分置含枸橼酸钠的抗凝剂中保存，24 h 内用流式细胞仪检测T 细胞亚群。另一部分析出血清-20 ℃保存待测。血清sIL-2R的检测采用ELISA ，具体操作按试剂盒说明进行。
       1.2.4  肠液sIgA 的检测　用药11 d后，无菌取十二指肠和空肠3 cm，纵行剪开，置于PBS 中反复漂洗，收集冲洗液,过滤后以2 000 r/ min 离心10 min ，取上清- 20 ℃保存待测。肠液sIgA 含量的测定采用ELISA ，具体操作按sIgA 试剂盒说明书进行。
       2   结果
       2.1  粪便中卵囊数量　两组小鼠经免疫抑制服用隐孢子虫卵囊后均在粪便中查到卵囊。由表1 可见，与模型对照组比较，治疗组从用药第5天开始排出的卵囊明显减少(P<0.01) ，有统计学意义。
       表1  大蒜素对实验小鼠粪便排卵囊的影响（略）
       2．2   大蒜素对免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠T 淋巴细胞亚群的作用　大蒜素治疗组的CD4+ T 细胞数显著提高，与模型对照组比较有显著性差异( P < 0. 01) ，而与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05) 。各组间CD8+T 细胞数的比较均无统计学意义(P>0.05) 。大蒜素治疗组的CD4+ /CD8+ 与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05) ，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结果见表2 。
       2.3  大蒜素对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的sIL-2R、sIgA 的影响模型对照组小鼠血清中sIL-2R水平较高, 与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01) 。大蒜素治疗组sIL-2R水平明显低于模型对照组(P<0.01) ，与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05) 。结果见表3。
       表2  大蒜素对实验小鼠T 淋巴细胞亚群的影响（略）
       与模型对照组比较，*P <0. 01
       表3  大蒜素对实验小鼠的sIL-2R及sIgA 的影响（略）
       与正常对照组比较，*P <0.01；与模型对照组比较，△P <0.01
       
       模型对照组小鼠肠液中sIgA 的含量明显下降，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)，大蒜素治疗组小鼠肠液中的sIgA 含量明显提高,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01) ,与正常对照组比较差异不显著(P>0.05)。
       3   讨论
       
       大蒜素是从大蒜中提取的主要有效成分,对多种细菌、霉菌和肿瘤细胞具有杀灭或抑制作用，近年发现对隐孢子虫病具有较好的治疗作用［3］。
       
       我们的研究结果表明，大蒜素能减少免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠粪便排出卵囊的数量， 进一步的研究表明， 大蒜素可以提高DEX 致免疫功能低下小鼠的CD4+ T 细胞水平， 提高机体CD4+ /CD8+ 比值， 促进肠道粘膜sIgA 的产生， 降低外周血sIL-2R水平。因T 淋巴细胞不仅是细胞免疫的效应细胞， 而且还是重要的免疫调节细胞，免疫功能低下人群CD4+ T 细胞数量的减少， CD4+ /CD8+ 比值的下降， 就会使T 细胞活化受阻， 机体不能有效地清除隐孢子虫感染， 而且隐孢子虫寄生在细胞内， 所以CD4+ T 细胞在宿主控制和清除隐孢子虫感染中至关重要。sIgA 主要是由粘膜相关淋巴组织产生， 是机体局部粘膜抗感染的重要因素。sIgA 通过与隐孢子虫结合阻止其通过粘膜进入机体， 或借助于ADCC抑制并清除隐孢子虫感染， 保护或减轻小肠粘膜的病理损伤，有助于隐孢子虫病患者的恢复。另外，大蒜素也通过降低DEX 所致免疫功能低下合并隐孢子虫感染小鼠外周血清sIL-2R水平， 使其与IL-2 竞争性结合的能力减弱，  T 细胞被活化， 并通过其分泌的IL-2 、IFN-γ等细胞因子， 使机体的细胞免疫功能增强， 促进隐孢子虫感染的恢复。
       
       因此我们认为大蒜素作为一种较好的免疫激发型中草药［3］，可明显提高免疫抑制小鼠的免疫功能， 在人类的防病治病中也将发挥更大的作用。
       【参考文献】
         　［1］ 黄民生，李登清，关 岚，等. 151例隐孢子虫感染者治疗效果分析［J］.中国人兽共患病杂志，2004，20（10）：封2.
       
       ［2］ 郑姣妹,薛飞群,王 权,等. 隐孢子虫感染小鼠动物模型［J］.国际医学寄生虫病杂志,2006,33(3):113.
       
       ［3］ 叶海英,张忠义,徐 峰.大蒜免疫调节作用的研究进展［J］.中医药学报,2003 ,31( 3 ):54.