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       【摘要】 
       目的研究大黄甘草汤中甘草酸对大黄中游离与结合蒽醌类化合物提取率的影响，揭示甘草在中药方剂配伍中能缓和大黄泻下作用的原因。 方法按传统水煎法制备大黄甘草汤，分光光度法测定提取液中游离与结合蒽醌类化合物的含量。结果大黄与甘草在水煎过程中，甘草中的甘草酸可增加大黄中游离蒽醌的提取率，降低大黄中结合蒽醌的提取率。结论大黄与甘草在煎煮过程中，甘草中的甘草酸与产生泻下作用的结合蒽醌生成沉淀，降低了结合蒽醌的含量，甘草可缓和大黄的泻下作用。
       【关键词】  大黄 蒽醌 甘草 甘草酸 分光光度法
       大黄甘草汤出自张仲景的《金匮要略》，由大黄和甘草两味中药组成。用于治疗实热积滞，食入即吐，大便秘结，胃热上中所致的呕吐。大黄的主要成分为大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素，统称为蒽醌类化合物，以结合型与游离型两种形式存在［1］。大黄中产生泻下作用的主要成分为结合型蒽醌。甘草能补脾益气、清热解毒、缓急止痛、调和诸药，在药物配伍中起重要作用。甘草中主要成分甘草酸能抑制动物离体肠管活动,可减轻大黄泻下作用引起的剧烈腹痛［2］。最近有报道甘草中的甘草酸与小檗碱生成沉淀，使小檗碱在体内产生缓释作用［3］。本文采用分光光度法研究大黄甘草汤在煎煮过程中，甘草酸与大黄中的蒽醌类化合物的相互作用，探讨大黄甘草汤中甘草缓和大黄泻下作用的原因。
       1  仪器与材料
       
       8453E可见紫外分光光度计（美国Angilen公司）；AE-240电子天平（Mettler公司）；低速离心机（KDC-1042科大创新公司）；电热恒温水浴（上海医疗器器械五厂）；中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。1，8-二羟基蒽醌对照品（中国药品生物制品检定所，批号 0829-9908）；甘草酸（西安富捷药业有限公司,甘草酸含量 ≥98%）；大黄、甘草饮片购自唐山市药材站，以上药材经我系生药教研室鉴定为掌叶大黄Rheum Palmatum L.和乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralesis Fisch.。所用试剂均为分析纯。
       2  方法
       2.1  药材处理  分别取大黄、甘草饮片于烘箱中60℃干燥8 h，粉碎，过26目筛即为中药粉末，备用。
       2.2  供试品的制备 
       2.2.1  大黄单煎提取液  分别精密称取6份大黄粉末，每份大黄粉末约5 g，将80 ml去离子水加入到回流装置中，水浴加热至水沸腾，迅速加入大黄粉末回流20 min，提取液3 800 r·min-1离心8 min，上清液迅速用0.45 μm微孔滤膜过滤，得大黄单煎提取液，简称A组。
       2.2.2  大黄甘草汤提取液  精密称取样品6份，每份大黄5 g，甘草2.5 g，先将甘草粉末置于回流装置中，加入80 ml去离子水，水浴加热至水沸腾，迅速加入大黄粉末回流20 min，同“2.2.1”项下操作，得大黄甘草汤提取液，简称B组。
       2.2.3  大黄与甘草酸共煎提取液  精密称取样品6份，每份大黄5 g，甘草酸0.35 g（按甘草中甘草酸的含量约为14%计算相当于大黄甘草汤中加入甘草的量）。回流装置中加入80 ml去离子水，水浴加热至水沸腾，迅速加入称定的大黄及甘草酸回流20 min，同“2.2.1”项下操作，得大黄与甘草酸共煎提取液，简称C组。
       2.2.4  甘草酸与大黄提取液共煎液 准确量取6份大黄单煎上清液，每份80 ml，分别加入甘草酸0.35 g按“2.2.1”项下操作，得甘草酸与大黄提取液共煎液，简称D组。
       2.3  测定方法及其验证
       2.3.1  标准曲线  精密称取105℃干燥后的1，8-二羟基蒽醌约2.5 mg于25 ml量瓶中，以0.5%醋酸镁甲醇溶液为显色剂定容，分别量取该溶液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 ml于10 ml量瓶中0.5%醋酸镁甲醇溶液定容，于510 nm测定吸光度值［4］，计算标准曲线为：A=0.044 7C-0.019 6，r=0.999 3。线性范围为：5～25 μg·ml-1。
       2.3.2   精密度实验  精密称取样品6份，每份大黄5 g，甘草酸0.35 g，按“2.2.2”项下方法提取，测定蒽醌类化合物的含量，计算总蒽醌、游离蒽醌、结合蒽醌提取率的RSD值分别为2.86%，2.18%，3.12%。
       2.3.3  方法的回收率实验  精密称取样品6份，每份大黄5 g，甘草酸0.35 g，精密加入1，8-二羟基蒽醌对照品约8 mg，按“2.2.2”项下方法提取，测定总蒽醌、游离蒽醌、结合蒽醌的含量，平均回收率分别为101.8%，102.6%，98.22%。
       2.3.4  总蒽醌提取率的测定 精密量取供试品溶液1 ml于25 ml烧杯中，加入去离子水4 ml，40%三氯化铁溶液2.5 ml，沸水浴加热20 min，冷却后再加入1 ml 2 mol·L-1稀盐酸，沸水浴加热10 min，以40 ml乙醚分4次萃取，合并乙醚萃取液于50 ml量瓶中，水浴挥去乙醚，以0.5%醋酸镁甲醇溶液定容，摇匀，放置10 min，在510 nm处测定，计算总蒽醌提取率，提取率（%）=蒽醌质量/药材质量×100%（mg·g-1）。
       2.3.5  游离蒽醌提取率测定 精密量取供试品溶液1 ml，加去离子水4 ml，乙醚40 ml分4次萃取，合并乙醚萃取液于50 ml量瓶中，水浴挥去乙醚，以0.5%醋酸镁甲醇溶液定容，放置10 min，在510 nm测定，计算游离蒽醌提取率。
       2.3.6  结合蒽醌提取率  结合蒽醌提取率（%）=总蒽醌提取率－游离蒽醌提取率。
       3  结果与讨论
       
       结合蒽醌长时间加热会转变成游离蒽醌，实验中必须严格控制加热时间，否则影响实验结果。结果显示大黄单独提取时，结合蒽醌的提取率高于游离蒽醌。
       
       大黄与甘草混合提取与大黄单独提取比较，甘草使大黄中结合蒽醌的提取率降低（P﹤0.05），游离蒽醌的提取率升高（P﹤0.05）；大黄与甘草酸混合提取与大黄单独提取比较，甘草酸使大黄中结合蒽醌的提取率降低（P﹤0.05），游离蒽醌的提取率升高（P﹤0.05）。甘草酸为天然表面活性剂，对游离蒽醌产生增溶作用，使游离蒽醌提取率升高［5］。
       
       大黄单煎上清液中加入甘草酸回流，总蒽醌提取率降低（P﹤0.05），结合蒽醌提取率降低（P﹤0.01），游离蒽醌提取率基本不变（P﹥0.05），实验结果表明甘草酸可与泻下作用较强的结合蒽醌生成沉淀，降低了溶液中结合蒽醌的含量。
       表1  甘草、甘草酸对大黄蒽醌类化合物提取率的影响（略）
       表2  甘草酸对大黄结合蒽醌类化合物提取率的影响（略）
       中医理论认为大黄通便，清胃降逆，性味苦寒，作用峻猛，甘草甘平，和补中焦，调和药性，二药合用可壮其功杜其弊。实验结果显示大黄甘草汤在水煎过程中，甘草中的甘草酸与大黄中泻下作用强烈的结合蒽醌类化合物生成沉淀，降低了大黄甘草汤中结合蒽醌的含量，使大黄泻下作用平缓。大黄甘草汤中甘草酸与结合蒽醌生成的沉淀随汤剂服入体内，能否缓慢释放出结合蒽醌，有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］ 季宇彬.中药复方化学与药理［M］.北京：人民卫生出版社，2003：150.
       
       ［2］ 寻庆英，王翠芬，魏义全，等.甘草对大鼠胃动力学功能影响的实验研究［J］.东南大学学报（医学版），2005，24（4）：226.
       
       ［3］ 戴开金，罗佳波，吴昭辉，等.配伍对葛根芩连汤中甘草酸含量的影响［J］.中草药，2003，34（12）：1084.
       
       ［4］ 韩 刚，史国有，孙海燕，等.表面活性剂对大黄蒽醌类化合物提取率的影响［J］.中草药，2005，36（9）：29.
       
       ［5］ 韩 刚，潘海宇，金光灿，等.十二烷基硫酸钠提取大黄总蒽醌工艺优化［J］.中药材，2006，29（11）：1258.