狐尾葛的化学成分研究
作者：张桢 刘光明 肖怀 罗建蓉 何红平 郝小江
作者单位：大理学院药学院，云南 大理 671000；中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，云南 昆明 650204
《时珍国医国药》 2009年 第3期
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【摘要】
目的研究狐尾葛的化学成分，寻找活性成分。 方法运用多种柱色谱方法进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定了化合物的化学结构。结果从中分离鉴定了8个化合物：①3β ［(O-β-D-glucopyranosyl ) oxy］-olean-12-ene-2β-tetraol；②androseptoside A;③La (-) 3R,4R hydroxy-4 (cis) melleine 3；④3, 4-二羟基苯甲醛 (3, 4-dihydro-amandol);⑤4-羟基苯甲酸 (p-Hydroxybenzoic acid)；⑥二十八酸(octacosanoic)；⑦胡萝卜苷(daucosterol);⑧β-谷甾醇(β-sitosterol)。结论以上化合物是从该植物中首次分离得到。
【关键词】 狐尾葛 化学成分 三萜苷
葛属Pueraria，蝶形花科Papilionaceae［1］，约20种以上，分布于亚洲热带地区至日本，我国有12种，广布于各省。蝶形花科葛属狐尾葛P. alopecuroides，俗名：毛花葛藤，葛根藤（元江），葛藤（允景洪），分布于云南、贵州。生于河边疏林下和盆地。根、花：味微甘、辛、性平，有升阳解肌、透疹止泻、除烦止渴的功能。用于伤寒、烦热消渴、 痢疾、高血压病、心绞痛、耳聋，滇南的傣族用狐尾葛的茎皮作药用部位［2］。
笔者对采集于云南西双版纳地区的狐尾葛Pueraria alopecuroides进行了化学成分研究，从中分离鉴定了8个化合物，通过理化常数的测定，各种光谱数据的分析，确定它们分别为：①3β［(O-β-D-glucopyranosyl ) oxy］-olean-12-ene-2β-tetraol;②androseptoside A;③La (-) 3R;4R hydroxy-4 (cis) melleine 3;④3, 4-二羟基苯甲醛;⑤4-羟基苯甲酸;⑥二十八酸;⑦胡萝卜苷;⑧β-谷甾醇。
1 仪器与材料
ESI-MS和FAB-MS用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定。NMR用Bruker AM-400和Bruker DRX-500超导核磁共振仪测定，TMS为内标。薄层层析板和各种规格的柱层析硅胶均来自于青岛海洋化工厂，C18反相硅胶(60μm)来自于德国的Merk Darmstadt公司，sephadex LH-20 来自于瑞士的Amershan Biosciences公司。
植物采自云南西双版纳，植物标本由中科院昆明植物研究所陶德定研究员鉴定。
2 方法与结果
2.1 提取与分离狐尾葛的干燥藤茎11 kg，粉碎后经95%乙醇回流提取3次，合并提取液减压回收溶剂得浸膏，将浓缩后的提取物加适量的水悬浮，用醋酸乙酯萃取，得到醋酸乙酯萃取物（210 g），醋酸乙酯萃取物用硅胶柱层析分离，用氯仿-甲醇梯度洗脱（9∶1, 8∶2, 7∶3, 每一梯度5 L），最后用甲醇洗脱 ，再经硅胶柱层析和sephadex LH-20柱层析共分离得8个化合物。
2.2 结构鉴定
2.2.1 化合物1 无色粉末，易溶于甲醇。FAB-MS m/z: 633 ［M -H］+; C36H58O9；1H-NMR (CD3OD, 400 MHz) δ：5.29 (1H, brs, H-12), 1.05 (3H, s, H-23), 0.96 (3H, s, H-24), 0.87 (3H, s, H-25), 0.84 (3H, s, H-26), 1.24 (3H, s, H-27), 0.90 (3H, s, H-29), 0.95 (3H, s, H-30), 4.31 (1H, d, J=7.8 Hz, H-1′); 13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δ: 39.7 (t, C-1), 75.3 (d, C-2), 90.8 (d, C-3), 42.0(s, C-4), 57.5 (d, C-5), 19.3 (t, C-6), 34.0 (t, C-7), 39.0 (s, C-8), 48.5 (d, C-9), 37.9 (s, C-10), 24.5 (t, C-11), 123.4 (d, C-12), 145.1 (s, C-13), 40.5 (s, C-14), 27.2 (t, C-15), 25.0 (t, C-16), 49.0 (s, C-17), 42.5 (d, C-18), 47.5 (t, C-19), 32.0 (s, C-20), 32.5 (t, C-21), 33.0 (t, C-22), 28.7 (q, C-23), 16.1 (q, C-24), 17.8 (q, C-25), 17.0 (q, C-26), 27.3(q, C-27), 181.9 (s, C-28), 34.0 (q, C-29), 24.5 (q, C-30), 106.8 (d, C-1′), 75.7 (d, C-2′), 78.3 (d, C-3′), 71.7 (d, C-4′), 77.7 (d, C-5′), 62.8 (t, C-1′)。以上数据与文献［3，4］对照一致，故鉴定为3β ［(O-β-D-glucopyranosyl ) oxy］-olean-12-ene-2β-tetraol。
2.2.2 化合物2 无色粉末，易溶于甲醇。ESI-MS m/z: 657［M+Na］+ ; C36H58O9；1H-NMR (CD3OD, 400 MHz)δ: 5.61 (1H, brs, H-12), 3.66 (3H, m, H-23), 0.76 (3H, s, H-24), 0.84 (3H, s, H-25), 0.93 (3H, s, H-26), 1.18 (3H, s, H-27), 0.90 (3H, s, H-29), 0.98 (3H, s, H-30), 4.46 (1H, d, J=7.8 Hz, H-1′), 3.47 (1H, t, J=7.7 Hz, H-4′) ;13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δ: 38.0 (t, C-1), 27.5 (t, C-2), 90.8 (d, C-3), 42.7 (s, C-4), 56.8 (d, C-5), 19.3 (t, C-6), 34.0 (t, C-7), 40.2 (s, C-8), 49.0 (d, C-9), 39.7 (s, C-10), 24.1 (t, C-11), 129.0 (d, C-12), 139.8 (s, C-13), 40.6 (s, C-14), 24.5 (t, C-15), 24.0 (t, C-16), 47.6 (s, C-17), 42.4 (d, C-18), 46.0 (t, C-19), 31.6 (s, C-20), 33.8 (t, C-21), 34.9 (t, C-22), 64.9 (t, C-23), 28.4 (q, C-24), 17.0 (q, C-25), 16.3 (q, C-26), 24.0(q, C-27), 181.8 (s, C-28), 31.6 (q, C-29), 21 (q, C-30) , 106.7 (d, C-1′), 75.7 (d, C-2′), 78.2 (d, C-3′), 71.6 (d, C-4′), 78.2 (d, C-5′), 62.8 (t, C-1′) , 106.7 (d, C-1′), 75.7 (d, C-2′), 78.2 (d, C-3′), 71.6 (d, C-4′), 78.2 (d, C-5′), 62.8 (t, C-1′)。以上数据与文献［3～5］对照一致，故鉴定为Hederagenin -3-O -β-D-glucopyranoside (androseptoside A).
2.2.3 化合物3 白色针状结晶。C10H10O4; ESI-MS m/z: 233 ［M + K］+ ; 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ: 4.56-4.80 (1H, m, H-3), 5.21 (1H, J= 6.5 Hz, H-4), 7.10 (1H, d, J= 7.5 Hz, H-5), 7.57 (1H, dd, J= 7.5, 7.5 Hz, H-6), 6.93 (1H, d, J= 7.5 Hz, H-7), 1.49 (3H, d, J= 6.5 Hz, H-3′) ;13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 169.6 (s, C-1), 81.0 (d, C-3), 69.1(d, C-4), 117.9 (d, C-5), 137.2(d, C-6), 117.9 (d, C-7), 162.5 (s, C-8), 107.9 (s, C-9), 144.3 (s, C-10), 18.2 (d, C-3′)。以上数据与文献［6］对照一致，故鉴定为La (-) 3R,4R hydroxy-4 (cis) melleine 3 (3R,4R methyl-3 dihydroxy-4,8 dihydro-3,4 isocoumarine ) 。
2.2.4 化合物4 白色固体，C7H6O3; ESI-MS m/z: 139［M + H］+ ; 1H-NMR (CD3COCD3，400 MHz) δ：7.35 (1H, d, J=1.7 Hz, H-2 ), 6.99 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-5), 7.33 (1H, dd, J= 1.7, 8.0 Hz, H-6) ; 13C-NMR (CD3COCD3, 100 MHz) δ：130.9 (s, C-1), 146.4 (d, C-2), 146.4 (s, C-3), 152.3 (s, C-4), 115.0 (d, C-5), 125.5 (d, C-6), 191.2 (d, -CHO). 以上数据与文献［7］对照一致，故鉴定为3，4-二羟基苯甲醛。
2.2.5 化合物5 白色固体，分子式为C7H6O3；ESI-MS m/z: 139［M + H］+ ;1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ:7.90 (2H, d, J=7.9 Hz, H-2, 6), 7.18 (2H, d, J=7.9 Hz, H-3, 5) ; 13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δ: 122(s, C-1), 132.7 (d, C-2, 6), 115.8 (d, C-3, 5), 162.0 (d, C-4). 167.0 (s, COOH). 以上数据与文献［7］对照一致，故鉴定为4-羟基苯甲酸。
2.2.6 化合物6 白色晶体，易溶于氯仿，碘显色。分子式C28H56O2。ESI-MS m/z:425 ［M +H］+；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 0.78 (3H, s, CH3-)，2.38 (3H, s, CH3-)。TLC鉴定与对照品二十八酸的Rf值一致，波谱数据与文献对照［8］，故鉴定为二十八酸。
2.2.7 化合物7 白色无定形粉末，L-B反应阳性，Molish反应阳性。TLC鉴定与对照品胡萝卜苷在相同Rf值处呈现相同颜色斑点，鉴定化合物为胡萝卜苷。
2.2.8 化合物8 白色针状结晶，mp. 136～138 ℃。L-B反应呈阳性，H2SO4显紫红色斑点，TLC鉴定与β-谷甾醇对照品在相同Rf值处呈现相同颜色斑点，故鉴定该化合物为β-谷甾醇。
3 讨论
根据美国化学文摘数据库Science Finder查阅结果显示，本论文首次对该植物化学成分进行研究和报道，故所分离得到化合物是首次从该植物中分离得到。
【参考文献】
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