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       【摘要】 
       目的测定雀儿舌头中多糖的含量。方法根据蒽酮硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、戊糖及其糖醛和糠醛酸起显色反应，采用紫外分光光度法测定雀儿舌头中多糖的含量。结果该法的线性范围为40～320 μg, r=0.997 7,平均回收率为101.2％，RSD为1.35％。结论该法简便、快速、准确、重复性好，可作为雀儿舌头中多糖含量的测定方法。
       【关键词】  雀儿舌头 紫外分光光度 多糖
       通常所用经典的比色法［1］测定多糖时,要用有毒的易挥发的有机溶剂苯酚，反应速度慢, 步骤繁琐。 笔者采用蒽酮-硫酸吸光光度法测定多糖所用的试剂无毒，线性好，准确度高，仪器简单、测定速度快，具有较好的选择性。现报道如下。
       1  器材
       
       7230G分光光度计(上海精密科学仪器有限公司),电热真空干燥箱(上海市实验仪器总厂),SH2D(Il1)循环水式真空泵(巩义市英峡予华仪厂) ，旋转蒸发仪（德国BüCHI Rotavapor R200）,SartoriusBS210S电子天平(北京塞多利斯天平有限公司)，SK250H超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，HH4型数显恒温水浴锅,CS1012型真空干燥箱；无水碳酸钠,蒽酮,体积分数95％的乙醇,硫酸、氢氧化钠、盐酸均为分析纯；标准品为药用纯葡萄糖。
       2  方法与结果
       2.1  雀儿舌头中多糖含量的测定采用蒽酮硫酸法。精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
       2.2  标准曲线的绘制精密吸取浓度为200 g/L的葡萄糖标准溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，分别置于10  ml试管中，加2 ml蒸馏水，摇匀，另取2 ml蒸馏水作空白对照。各管再迅速加入5.0 ml蒽酮-硫酸溶液，混匀，迅速加入浓硫酸5  ml，摇匀后放置30 min，取出，置冷水中冷却，于620 nm处测定吸光度。
       
       以葡萄糖的体积为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图得到标准曲线，其回归方程为：Y= 1.041X + 0.030 7,r = 0.997 7，表明葡萄糖在40～320 μg 范围内呈良好线性关系。
       2.3  加样回收率实验精密吸取0.1 ml样品溶液，加入葡萄糖标准液0.1 ml，置于10 ml带塞试管中，加2 ml蒸馏水，摇匀，各管再迅速加入5.0 ml蒽酮-硫酸溶液，混匀，摇匀后放置30 min，取出，置冷水中冷却，于620 nm处测定吸光度，代入回归方程计算加样回收率,得出平均回收率为101.2％，RSD=1.35％。
       2.4  样品中总糖［2］及还原糖含量测定称取雀儿舌头多糖10.00 mg，溶解后移至100 ml容量瓶中定容备用。精密吸取0.4 ml苯酚，加水1.6 ml，按“2.2”项方法测定吸光度，依回归方程求出多糖中葡萄糖浓度，按公式f=W/CD计算，式中W为多糖质量，C为多糖中测量出的葡萄糖浓度，D为多糖的稀释因素，得出f=1.229。
       
       精密称取雀儿舌头样品粉末6.0 g，置于烧瓶中。采用热水浸提法：不经乙醇脱脂，直接于90 ℃水中提取2 h，趁热过滤，滤饼用热水洗涤(30 ml×3)，洗液并入滤液，合并滤液，减压浓缩后定容备用。按“2.2”中方法测定吸光度，依回归方程计算待测样品溶液中葡萄糖的浓度，按下式计算样品中总糖的含量：总糖含量(%)= (C×D×f/W) ×100%。经5次平行实验测得雀儿舌头中总糖的平均含量为1.512％。
       
       精密称取雀儿舌头样品粉末6.0 g，置于烧瓶中，不经乙醇脱脂，直接于90 ℃水中提取2 h，趁热过滤，滤饼用热水洗涤(30 ml×3)，洗液并入滤液，合并滤液，减压浓缩至10 ml，加入无水乙醇使乙醇含量达80%，静置过夜，多糖沉淀，过滤除去沉淀，将乙醇除去后，加水溶解至100 ml，摇匀。精密量取1.0 ml，按“2.2”中方法测定吸光度，依回归方程计算待测样品溶液中葡萄糖的浓度，按下式计算样品中还原糖的含量：还原糖含量(%)=(C×D×f/W)×100%。经5次平行实验测得雀儿舌头中还原糖含量为0.532%，计算得出多糖含量为0.980%。
       3  讨论
       
       经典的比色法测定多糖含量实际为总糖的测定，而且需要使用沸腾的水浴反应10～15 min后才能进行测定，步骤繁琐、速度慢。对此作者进行了一些改进，即沉淀并分离多糖再以同法测定溶液中的还原糖。由于硫酸和水发生水合作用释放出大量的热量，使反应系统自行升温，达到充分显色，故可免去水浴加热步骤，在室温下直接显色。实验证明该法可行。蒽酮-硫酸法进行多糖的测定时，多糖本身不直接与蒽酮反应，而主要是由多糖的水解产物-果糖和葡萄糖的脱水产物5-甲基糠醛与蒽酮发生显色反应。硫酸在其中主要起到催化剂、脱水剂和溶剂作用。多糖水解时，浓硫酸是催化剂，同时也为多糖的水解反应提供了大量的热能；然后在果糖、葡萄糖的脱水反应中作脱水剂；在蒽酮与5-甲基糠醛反应时作溶剂，生成物-蓝绿色物质是一种溶解度小的有机物，它可溶于浓度较高的硫酸溶液中。
       【参考文献】
         　　［1］ 高丽娟. 黑木耳中多糖的测定［J］.中国医药工业杂志，2003，34（3）：144.
       
       ［2］ 刘 敏，高 岚. 紫外分光光度法测定灵芝孢子粉胶囊中灵芝多糖含量［J］.现代中药研究与实践，2005，19（4）：34.
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