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       【摘要】 
       目的考察影响天麻降血压有效成分的提取因素。 方法采用单因素比较法和正交设计法对天麻降压有效成分的提取工艺进行优选。 结果确定天麻的提取工艺为：用12，10，6倍量70%乙醇为提取溶剂，提取3次，前2次提取时间为1 h，后1次为30 min。结论该实验确定的天麻提取工艺方法合理，稳定可行。
       【关键词】  天麻素 多糖 正交实验
       
       天麻为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎，传统上作为止痛、镇静剂用于治疗癫痫、眩晕、风湿、高血压病等疾病［1］。现代研究表明，天麻含有天麻素、香草醛、香草醇、琥珀酸、维生素、生物碱、多糖等物质，其中天麻素为主要活性成分，有明显降血压作用；另外，天麻多糖能增加心肌营养和脑血流量，提高细胞的免疫功能，有助于高血压病的治疗［2］。现以浸膏收率、天麻多糖含量和天麻素含量为主要指标，考察提取条件，筛选出适合制备天麻复方降压胶囊的天麻提取条件。
       1  材料与仪器
        天麻药材购于四川峨眉仙山中药科技发展有限公司；无水葡萄糖对照品由中国药品生物制品检验所提供，批号110833-200302；天麻素对照品由中国药品生物制品检验所提供，批号110807-200205；岛津UV300紫外分光光度计；岛津LC-20AT高效液相色谱仪；乙腈为色谱纯，浓硫酸、苯酚、乙醇为分析纯。
       2  方法与结果
        2.1  天麻提取方式的考察称取天麻粗颗粒25 g 3份，分别加入70%乙醇200 ml，采用超声、冷凝回流和70℃浸渍的方式提取1h，提取液纱布过滤后定容至1 000 ml，按照“2.3”项下方法测定浸膏收得率、天麻素含量和天麻多糖含量。结果见表1。结果表明，冷凝回流对天麻的提取效率最高，实验采用此方式。
        2.2  提取工艺的正交实验研究
        2.2.1  因素水平的选择以对提取效果影响最显著的因素：醇浓度（A）、溶剂量（B）、提取次数（C）、提取时间（D）4个因素进行考察，各取3个水平，进行L9（34）正交实验，以浸膏收率、多糖含量、天麻素含量为指标进行综合评分，并结合生产成本、生产周期等因素综合评价，优化天麻提取工艺。实验以25 g为研究量，因素水平设计见表2。表1  提取方式考察表2  因素水平
        2.2.2  正交实验方法与结果取天麻粗粉按表2设定的正交实验方案冷凝回流提取。各组提取液纱布过滤后，均浓缩至100 ml，再加水定容至1 000 ml，作为供试品。按照“2.3”项下方法测定浸膏收得率、天麻多糖含量和天麻素含量。结果见表3。
        由正交实验结果可知，影响提取效果的因素顺序为：C（提取次数）＞A（醇浓度）＞B（溶剂量）＞D（提取时间）。极差结果为A1＞A2＞A3,B1＞B2＞B3,C1＞C2＞C3,D1＞D3＞D2,直观分析确定最佳提取工艺为：A1B1C1D1。鉴于D1和D3对实验影响程度相近，考虑实际生产成本，可将提取时间（D）由2 h调整为1 h；同时药物第3次提取时药物有效成分已大量渗出，可缩短提取时间，减少溶剂用量。综合考虑，将工艺优化为：用12，10，6倍量70%乙醇为提取溶剂，提取3次，前2次提取时间为1 h，后1次为30 min。
        2.2.3  验证实验按照“2.2.2”项确定的最佳工艺和优化工艺进行验证实验。结果见表4。表3  正交实验结果综合加权评分由公式:Y=Y1`+ Y2`+ Y3`=20×Y1/9.97+ 60×Y2/0.457+ 20×Y3/4.04计算而得。浸膏收率以平均值9.97%计为20分，高于9.97%仍计20分，天麻素含量以最高0.457%计为60分，多糖含量以最高4.04%计为20分 表4  验证实验结果
        验证实验结果表明，优化工艺与最佳工艺结果相近，且优化工艺的实验结果重现性良好。
        2.3   相关指标的测定
        2.3.1  浸膏收率的测定 从已定容至1 000 ml的提取液中量取200 ml（相当于生药5g），移入已干燥至恒重的蒸发皿中，70℃水浴浓缩至干，放入105℃烘箱干燥6 h，取出，置干燥器中冷却30 min后，取出，精密称重，计算浸膏收率。
        2.3.2  苯酚-硫酸法测定天麻多糖含量［3］对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品1.070 g，置1 000 ml容量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（1.07 mg/ml）。
        标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0,6.0 ml，分别置50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各1 ml，置锥形瓶中，分别加入蒸馏水2 ml，6.25%苯酚溶液1 ml，混匀，迅速加入硫酸5 ml，摇匀，倒入具塞试管中，置沸水浴加热15 min，取出，冷却至室温，以第1份为空白，在492 nm的波长处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，葡萄糖对照品浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线方程为A=0.006 2C+0.003 9，相关系数为r=0.999 3,线性范围为21.4～128.4 μg/ml。
        样品的测定：精密量取天麻提取液样品10 ml，置100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，取1 ml，置锥形瓶中，分别加入蒸馏水2 ml,6.25%苯酚溶液1 ml，混匀，迅速加入硫酸5 ml，摇匀，倒入具塞试管中，置沸水浴加热15 min，取出，冷却至室温，在492 nm处测定吸光度，计算天麻多糖含量。
        2.3.3   HPLC法测定天麻素的含量色谱条件：色谱柱为Hypersil BDS C18柱（200 mm×4.0 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）；流速0.8 ml/min；检测波长220 nm；柱温30℃；进样量6 μl。
        对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品1.8 mg，置25 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得天麻素对照品溶液（72 μg/ml）。
        标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以天麻素进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得标准曲线方程为Y=2 347 977.4X-7 867.2，r=0.999 9, 进样量在0.144～0.720 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
        样品的测定：取提取液样品用0.45 μm的微孔滤膜过滤，弃初滤液，取续滤液作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，计算天麻素含量。
       3  讨论
        天麻复方降压胶囊制剂处方由天麻、枸杞、菊花组成，本研究主要为“天麻复方降压胶囊的开发”进一步制剂研究提供实验依据。课题前期通过动物实验和临床观察对天麻复方降压胶囊粗提取物进行了药效学研究。结果表明，天麻作为主药有较好的降压作用和保健效果。
        实验主要从保留天麻中降血压有效成分的出发点进行研究。工艺条件的确定可以从定量分析、TLC检查、药效实验等方面考虑，其中药效实验尚存在药效指标的选择问题，同时成本较高，所以有必要针对中药复方制剂的特点寻求一些新的制剂学工艺评价方法。
        另外，考虑到胶囊剂的服用量不宜过大，而天麻的出膏率较高，因而后期实验对提取液进行了精制。采用水沉后高速离心的方法，可以把出膏率控制在6%左右，而天麻素和多糖的转移率均能达到70%以上。
        
       【参考文献】
         ［1］ Eun-Kyoung Ahn, HYe-Jin Jeon, Eun-Ju Lim, et al. Anti-inflammatory and anti-angiogenic activities of Gastrodia elata Blume［J］. Journal of Ethnopharmacology,2007,110: 476.
       
       ［2］ 胡一冰,崔 佳,韩 笑，等. 中药天麻研究进展［J］. 贵阳中医学院学报,2001,23(4):48.
       
       ［3］ 朱晓霞,罗学刚. 天麻多糖提取工艺优化［J］. 时珍国医国药,2007,18(4):906.