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       【关键词】  蜂蜜；,,幽门螺旋杆菌；,,体外抗菌作用
       摘要：目的研究不同蜂蜜对幽门螺旋杆菌的体外抗菌作用。方法取龙眼蜜、荔枝蜜、八叶五加蜜、桂花蜜、野菊花蜜、桉树蜜、红树林蜜等7种蜂蜜，按两倍稀释法进行药敏试验，观察最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果桉树蜜抑菌作用最强（MIC 1∶8），红树林蜜抑菌作用最弱（MIC 1∶2），其它蜜抑菌作用相当（MIC 1∶4）；桉树蜜还具有一定的杀菌作用（MBC 1∶2），其他蜂蜜则无此作用。结论7种蜂蜜在体外均可抑制幽门螺旋杆菌，尤以桉树蜜最佳，为开发和利用蜂蜜辅助治疗疾病提供了一定依据。
       关键词：蜂蜜；  幽门螺旋杆菌；  体外抗菌作用
       The Antibacterial Effects in Vitro of Different Kind of Honey on Helicobacter pylori
       HUANG Dong-ping, JIANG Gui-fa ,  ZHOU Wen-yu,Bi Yu, HUANG Wen-jing
       (College of Public Health ,Guangxi Medical University, Nanning 530021,China;College of Pharmacy, Guangxi Medical University, Nanning 530021,China )
       Abstract：ObjectiveTo study the antibacterial effects in vitro of different kinds of honey on Helicobacter pylori (Hp).MethodsSeven kinds of honey including Longan honey, Lichee honey, Acanthopanax gracilistylus honey, Sweet osmanthus honey, Wild chrysanthemum honey, Eucalyptus honey, Mangrove honey were tested. The method of doubling dilution in tubes was used in susceptibility test, the minimal inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration were determined. ResultsEucalyptus honey had the strongest inhibitory effects on Hp which MIC was 1∶8; Mangrove Honey had the weakest effects which MIC was 1∶2; the inhibition effects of the other kinds of honey were the same which MIC was 1∶4. Eucalyptus honey also had the bactericidal effect which MBC was 1:2, the other kind didn"t have such effects. ConclusionSeven kinds of honey have the inhibitory effect on Hp in vitro, and Eucalyptus honey is the best. This test provides a reference for exploiting and making use of honey to cure diseases.
       Key words：Honey;   Helicobacter pylori;   Antibacterial test in vitro
   
　　国内外的研究证明，幽门螺旋杆菌（Hp）与慢性胃炎、消化性溃疡、MALT淋巴瘤、胃癌有密切关系［1］，所以不少学者对多种西药、中药抗 Hp的效果做过研究，以求获得具有疗效的药物。蜂蜜是人类传统而古老的天然食品和医疗药品，明代医学家李时珍在《本草纲目》中论述道：“蜂蜜，其入药之功有五：清热也，补中也，解毒也，润燥也，止痛也。”在现代医学中，国内外的学者也证实蜂蜜对多种细菌有抑制及杀灭作用［2］，并且在治疗皮肤溃疡、烧创伤等方面具有显著效果［3，4］，但其对 Hp的抗菌作用尚未见报道。本文旨在研究不同蜂蜜对 Hp的抗菌作用。
       　1  仪器与材料
       WP-1微型多功能微生物培养箱（浙江新安江医疗仪器厂），HF safe 1200安全柜（香港热力发展有限公司），NCTC11637质控菌株（中国流行病防治控制中心流行病学研究所惠赠），蜂蜜（购自市场），氧化酶试剂（杭州天和微生物试剂有限公司），幽门螺旋杆菌快速检测卡（珠海丽拓发展有限公司），布氏肉汤、改良 Skirrow培养基（北京陆桥技术有限责任公司），小牛血清（上海生工生物工程技术服务有限公司），实验所用其他试剂均为分析纯。
       　　2  方法
       2.1   选择性培养基的配制
       2.1.1   布氏肉汤取培养基28.1 g加水配成100 ml培养基溶液，灭菌。临用前加入1 ml TMP抗菌混合液（TMP5 mg・L-1，万古霉素10 mg・L-1，多粘菌素2 500 U・L-1）。
       2.1.2   改良Skirrow培养基取培养基4.25 g加水配成100 ml培养基，灭菌。临用前加入1 ml TMP抗菌混合液，和7 ml小牛血清。
       2.2   菌种复苏、培养、鉴定、增菌分别取菌种1滴加入布氏肉汤及改良 Skirrow培养基中，摇匀，置多功能微生物培养箱中， 37℃微氧环境（5%O2，10%CO2，85%N2）培养48 h后观察菌落形态、特征、染色镜检，同时做触酶、尿素酶及氧化酶实验。经鉴定的幽门螺旋杆菌用布氏肉汤增菌48 h后用布氏肉汤稀释至108（每毫升约含1.5亿个菌）。
       2.3    药敏实验采用两倍稀释法［5］：将7种蜂蜜分为7个组，每组取无菌试管11支，每支加布氏肉汤1.0 ml，第1管加入蜂蜜1.0 ml，混合后吸取1.0 ml加入第2管，同法稀释至第10管，从第10管中吸取1.0 ml置1灭菌空试管中作阴性对照，各管加入菌液0.1 ml（约含107个菌）。另取1灭菌空试管加1.0 ml布氏肉汤和0.1 ml菌液作阳性对照。混匀，置培养箱中37℃微氧环境培养48 h后观察结果。液体浑浊表明有菌生长，液体澄明且摇匀后仍澄明者，无菌生长。无菌生长的药物最低浓度称为最低抑菌浓度（MIC）。阴性对照：加蜜不加菌液，应澄明。阳性对照：不加蜜加菌液，应浑浊。依次将未见细菌生长的管各取0.1 ml，加入双碟后注入改良 Skirrow培养基，摇匀，置培养箱中37℃微氧环境培养72 h后观察结果，平板上的菌落数小于5个的最小稀释度的药物浓度为最低杀菌浓度（MBC）。
       　　3  结果
       结果见表1。
       表1  不同蜂蜜对幽门螺旋杆菌的抑制效果（略）
       +：有菌生长；-：无菌生长；+*菌落数≥5；-*菌落数＜5
       4  讨论
       4.1  由于有报道称［2］：蜂蜜主要抑菌作用与其含有不耐热的抗菌成分有关，制成熟蜂蜜后抗菌作用消失，故本实验采用生蜂蜜为研究对象。
       4.2   实验表明在体外，桉树蜜对幽门螺杆菌的抑杀效果较好（MIC为1∶8，MBC为1∶2），而其他蜂蜜只有抑菌作用，没有杀菌作用。龙眼蜜、荔枝蜜、八叶五加蜜、桂花蜜、野菊花蜜的体外抑制 Hp效果也比较相近，MIC均为1∶4，红树林蜜的抑制作用最弱，MIC仅为1∶2。
       4.3   蜂蜜的抗菌机理可能与其含有的抗菌物质如过氧化氢、苯酚类化合物、黄酮类化合物等以及蜂蜜本身的物理性质有关。桉树蜜效果较佳可能与其抗菌成分黄酮含量较高（笔者另文报道），而且酸性较强有关，其 pH约为4左右，而幽门螺旋杆菌一般只在 pH 6.6～8.4条件下生长，因此可抑制幽门螺旋杆菌生长；荔枝蜜及桂花蜜糖分含量高，产生的高渗作用与抗菌作用有关。
       4.4   由于在根治幽门螺旋杆菌时广泛使用抗生素，导致现在的幽门螺旋杆菌耐药性增高［6］，而本实验表明蜂蜜可抑制其生长，为 Hp的临床治疗及日常保健提供新思路，同时也为开发蜂蜜的新用途提供了一定依据。
       　　参考文献：
       ［1］  高  文，胡伏莲.幽门螺旋杆菌与胃肠外疾病［J］.中华医学杂志，2001，81（23）：1470.
       ［2］  王尔义，王贵奇，王华杰.蜂蜜抗菌作用实验报告［J］.吉林医学，1995，16（1）：14.
       ［3］  Jeffrey A E, Echazarreta C M. Medical uses of honey［J］. Revista Biomedica,1996，7(1):43.
       ［4］  Bang LM, Buntting C, Molan P. The effect of dilution on the rate of hydrogen peroxide production in honey and its implications for wound healing［J］. J Altern Complement Med. 2003，9(2):267.
       ［5］  马绪荣，苏德模.药品微生物学检验手册［M］. 北京：科学出版社，2001：211.
       ［6］  Van der Wounden EJ, Thijs JC, Van Zwet AA,et al. The influence of in vitro nitroimidazole resistance on the efficacy of nitroimidazole-containing anti-Helicobacter pylori regimens: a meta-analysis［J］. Am J Gastroenterol, 1999，94(7): 1756.

　　(广西医科大学公共卫生学院，广西 南宁   530021；  广西医科大学药学院，广西 南宁   530021)