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       【摘要】 
       目的利用从鲎试剂生产废料中提取出的鲎素，了解鲎素对大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌的抑菌作用。方法用酸处理和Sephdex G-50 凝胶层析法从鲎试剂生产废料中提取分子量约为3KD的鲎素，然后把鲎素加入菌液培养，24 h后测定结果。结果鲎素能显著抑制大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌的生长，其24 h最小有效抗菌浓度分别为：0.23，0.23，1.88 μg/ml。结论鲎素具有抗菌作用，可作为新一代的抗菌药物进行开发研究。
       【关键词】  鲎素 抗菌作用
       Effect of Tachyplesin of Horseshoe Crab on Escherichia cdi, Shigella dysenteriae and Pseudomonas aeruginosa
       CHEN Xiaofang，  WANG Yajun，  DING Hang，     ZHANG Haitao  
       （Guangdong Medical College,Zhanjiang, Guangdong 524023 China）
       Abstract：ObjectiveTo detect the antibacterial activity of tachyplesin ,which extracted from the waste material of tachypleus amebocyte lysate(TAL). MethodsTachyplesin from the waste material of TAL was purified by acid treatment and SephdexG-50 gel chromatography.The Escherichia cdi ,Shigella dysenteriae and Pseudomonas aeruginosa were treated by tachyplesin for 24h. ResultsThe results showed that the tachyplesin inhibited the growth of Escherichia cdi ,Shigella dysenteriae and Pseudomonas aeruginosa.The minimum inhibition concentration on Escherichia cdi ,Shigella dysenteriae and Pseudomonas aeruginosa were 0.23μg/ml,0.23μg/ml and 1.88μg/ml in 24 hours,respectively.ConclusionTachyplesin can inhibit the growth of certain germs, and it might be a new antibacterial drug.
       Key words：Tachyplesin;    Antibacterial effect
       
       鲎，又称马蹄蟹horseshoe crab，是一种生活在海洋中的大型节肢动物。鲎为海洋无脊椎动物，缺乏可获得性免疫体系，在抵御外源病原菌侵袭的过程中形成了多种天然防御系统。在这些防御系统中，对抵制病原菌作用最大的是鲎抗菌肽（即鲎素），鲎素是抗菌、抑制内毒素反应的活性蛋白质（多肽），这些物质抗菌效果好，稳定性佳，存在很大的利用价值［1］。本实验对从鲎试剂生产废料中提取出的鲎素的抗菌活性进行了初步的研究，现报道如下。
       1   材料
       1.1   菌种由本学院微生物教研室保存。
       1.2  LB培养基 本实验室自制。
       1.3  鲎素的合成 本实验室采用酸提取法和sephdex G-50 凝胶层析从鲎中分离出鲎素。
       2  方法
          
       分别提取LB液体培养基1.5 ml，分别加入大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌各5 ml，37℃ 200 r/min培养过夜，然后各取10μl过夜菌液加入1 ml LB液体培养基，混匀，再各取50 μl稀释菌液，加入1 450 μl LB液体培养基，即为终稀释菌液。
       
       取浓度为800 μg/ml的鲎素，稀释如下浓度(μg/ml)：
       
       A1    A2    A3    A4    A5  A6    A7    A8
       
       0  2.344  4.688  9.375  18.75  37.5  75    150
       
       取96孔板每孔加入终稀释菌液90 μl和鲎素10 μl，则鲎素终浓度为（μg/ml）：
       
       A1    A2    A3    A4    A5    A6     A7    A8
       
       0    0.23    0.47  0.94   1.88   3.75   7.5    15
       
       用酶标仪测定。
       3  结果与讨论
          
       结果见表1。
       表1  鲎素对各种细菌的抗菌效果（略）
       n=3
       
       抗菌肽是动物体内诱导产生的，广泛存在于生物界中的一类生物活性肽，一般具有抗细菌或真菌的作用，有些还具有抗原虫、抗病毒或肿瘤细胞的功能［2～3］。长期以来，国际上对抗菌肽的研究主要集中在高等动物和一些低等昆虫方面，海洋抗菌肽研究是近10年来发展起来的又一个热点，而鲎是一类珍贵的海洋药用动物。目前人们已从鲎血中分离得到多种抗菌肽，鲎素抗菌肽是存在于鲎细胞的小颗粒中的一族小分子多肽，由17～18个氨基酸组成相对分子量约为2.3KD［4］。
       
       本实验室采用酸提取法和sephdex G-50 凝胶层析从鲎试剂生产丢弃的细胞膜中分离提纯出的鲎抗菌肽粗提物经电泳分析结果显示分子量为3KD左右，具有很好的抗菌作用，能明显抑制大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌，其24 h最低有效抗菌浓度分别约为0.23，0.23，1.88 μg/ml。在抗生素大量使用甚至滥用的今天，细菌对抗生素产生的广泛耐药性，因而寻找和开发新一代的抗菌药物是当今的热点。由于鲎抗菌肽作用的主要机制是破坏膜结构的完整性，造成细胞膜内容物的泄漏，最终导致细胞死亡，这就使细胞不易对鲎抗菌肽产生耐药，其还具有分子量小，热稳定，水溶性好，抗菌活性强，体内无残留等明显优点，因此，有可能成为替代抗生素的药物。
       
       本研究为大规模从鲎试剂生产废料中分离提纯鲎抗菌肽及其进一步开发成新的安全无毒副作用的抗生素提供了参考。
       【参考文献】
         　　［1］ 张海涛,梁景耀,翁 云,等.鲎血细胞有效分组生物活性的初步研究［J］.海洋科学2000，24（10）：48.
       
       ［2］ 李恩民,刘维全,殷 霞.抗菌肽的特性及应用前景［J］.中国药理学通报,1998,14（3）:209.
       
       ［3］ 赵庆红,戴祝英,周亚开.昆虫抗菌肽的功能作用机理与分子生物学研究进展［J］.生物工程进展,1999，19（5）：14.
       
       ［4］ 谢海伟,代建国,郭 勇.海洋远古生物鲎体内活性物质的研究［J］.安徽农业科学.2006，34（24）：6512.