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       【摘要】 
       目的建立玉屏风汤剂中黄芪甲苷的含量测定方法，探讨不同配伍对玉屏风汤剂中黄芪甲苷含量的影响。方法采用高效液相色谱蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法测定。采用Phenomen色谱柱；流动相为乙腈-水（32∶68）；流速1 ml/min；柱温35℃；ELSD漂移温度103℃，载气（氮气）流量2.5 L/min。 结果黄芪单煎相比，不同配伍的合煎对黄芪甲苷的含量均呈现不同程度的下降趋势。结论玉屏风不同配伍汤剂中黄芪甲苷的含量在煎煮过程中存在动态变化，为玉屏风汤剂的配伍规律及物质基础的研究提供了一定的参考。
       【关键词】  玉屏风汤剂 配伍 黄芪甲苷 高效液相色谱法
       玉屏风源于元代《丹溪心法》，由黄芪、白术（炒）、防风3味药组成，功能益气固表，止汗，用于表虚不固，自汗恶风，面色白，或体虚易感风邪者。黄芪主要含异黄酮、皂苷、氨基酸及多糖类等有效成分；防风主要含色原酮、挥发油、氨基酸及多糖类等有效成分；白术主要含内酯类、挥发油及多糖类等有效成分。对玉屏风方中药味的主要成分含量与指纹图谱研究已有相关文献报道［1～4］，但玉屏风汤剂的化学成分研究报道较少。为探讨玉屏风汤剂的配伍规律及物质基础，本项目采用HPLC指纹图谱与主成分含量测定相结合的方法进行研究。本文报道不同配伍对黄芪甲苷含量的影响。
       1   仪器与试药
          
       高效液相色谱仪（日本岛津LC10A）；蒸发光散射检测器（ELSD）；黄芪甲苷对照品，购自中国药品生物制品检定所；3批黄芪、防风、白术（炒）饮片，分别购于广东多家药材公司，黄芪为豆科蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge. var mongholicus(Bge.)Hsiao的根，防风为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.的根，白术为伞形科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的根的麸炒品；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件［5，6]色谱柱为Phenomen（250 nm×4.6 nm，5 μm）；流动相为乙腈-水（32∶68）；流速1 ml/min；柱温35℃；ELSD漂移温度103℃，载气（氮气）流量2.5 L/min。结果表明在此条件下此成分能达到较好的分离效果，理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4 000，缺黄芪阴性对照无干扰。结果见图1～3。
       图1  黄芪甲苷对照品HPLC图（略）
       图2  玉屏风汤剂HPLC图（略）
       图3  缺黄芪甲阴性对照HPLC图（略）
        
       2.2  对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，用甲醇溶解配制成每毫升含0.5 mg的对照品溶液。
       2.3  不同配伍汤剂的制备 按《中国药典》的处方配比〔黄芪18 g，防风6 g，白术（炒）6 g〕，取黄芪饮片45 g，防风饮片15 g，白术（炒）饮片15 g，加水500 ml，浸泡30 min，加热煮沸后文火慢煎40 min，取出，趁热用四层纱布滤过，药渣再加水300 ml加热煮沸后文火慢煎30 min，取出，趁热滤过，合并2次煎液，放冷，置500 ml量瓶中，加水至刻度，得全方汤剂。分别取黄芪、黄芪加白术、黄芪加防风等不同配伍药材饮片，同法制得各配伍汤剂。
       2.4  供试品溶液的制备［5］ 精密吸取各配伍汤液50   ml，分别用水饱和正丁醇提取5次，30 ml/次，合并正丁醇液；用氨试液洗涤3次，20 ml/次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容至5 ml，即得不同配伍汤剂供试品溶液。
       2.5  线性关系考察  取黄芪甲苷对照品，精密称定，用甲醇溶解并配制成每毫升含1.01 mg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液1，2，5，10，20 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（μg）的对数值为横坐标，以峰面积（A）的对数值为纵坐标，求得线性回归方程为Y=5.000 6+1.564 1X，线性范围为1.01～20.2 μg，r=0.999 9。
       2.6  精密度实验精密吸取同一对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定峰面积，结果黄芪甲苷峰面积的RSD为1.85%，表示仪器精密度良好。
        
       2.7  稳定性实验精密吸取同一玉屏风汤剂供试品溶液各20μl，分别在0，2，4，8，16，24 h进样，按上述色谱条件测定峰面积，结果黄芪甲苷峰面积的RSD为0.94%，表明在24 h内较稳定。
       2.8   重复性实验取同一批玉屏风饮片5份，按汤剂的制备及其供试品溶液的制备方法制备并测定，结果玉屏风汤剂中黄芪甲苷含量的RSD为8.52%，表明汤剂煎煮的重复性好。
       2.9   加样回收率实验精密量取5份已知含量的玉屏风汤剂25   ml，精密加入一定量的黄芪甲苷对照品溶液，按汤剂供试品溶液的制备及样品的测定同法操作。结果见表1。
       表1   玉屏风汤剂回收率测定结果（略）
       2.10   样品的测定分别精密吸取对照品溶液10 μl，20 μl及各配伍供试品溶液20 μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积，按外标两点法对数方程计算各供试品溶液的含量。3批不同配伍汤剂中黄芪甲苷的含量见表2。以黄芪单煎的含量为100%计，计算不同配伍汤剂的含量变化率。结果见表2。
       表2   不同配伍玉屏风汤剂中黄芪甲苷含量测定结果及变化率（略）
       3  讨论
       
       　　黄芪甲苷的紫外吸收在近末端处，受试剂影响很大，采用蒸发光散射检测器，能克服黄芪甲苷在紫外检测器上易受干扰的缺陷。本研究参照《中国药典》［5］及文献［6］中“玉屏风口服液”的供试品溶液制备方法及色谱条件测定玉屏风汤剂中黄芪甲苷的含量，结果峰形对称，保留时间适中，空白样品无干扰。
        
       3批不同配伍汤剂中黄芪甲苷含量结果表明，与黄芪单煎相比，黄芪配伍防风、黄芪配伍白术、黄芪配伍白术与防风，黄芪甲苷的含量均呈不同程度的下降趋势。结果提示玉屏风不同配伍汤剂中黄芪甲苷的含量在煎煮过程中存在动态变化，为玉屏风汤剂的配伍规律及物质基础研究提供了一定的参考。不同配伍对毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、5O甲基维斯阿米醇苷的影响另文发表。
        
       由于汤剂重复性相对较差，因此，每批汤剂至少应煎煮3份，以减少误差。通过测定3批不同配伍的含量，表明不同批次间的配伍结果有一定的差异，提示测定3批结果进行评价配伍规律更为合理。
       【参考文献】
         　　［1］ 王晓辉，刘 涛，李 清，等.高效液相色谱法同时测定黄芪中的五种异黄酮类成分［J］.色谱，2006，24（5）:486.
       
       ［2］ 胡芳弟，赵建雄，封士兰，等.黄芪的高效液相指纹图谱及主成分含量测定［J］.中药材，2004，27（11）:831.
       
       ［3］ 姜艳艳，刘 斌，石任兵.高效液相色谱法测定防风色原酮部位中4种成分含量［J］.北京中医药大学学报，2006，29（2）:128.
       
       ［4］ 于永明，宋长义，贾天柱.白术炮制品的质量标准研究［J］.中成药，2005，27（6）:669.
       
       ［5］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社.2005:410.
       
       ［6］ 毛秀红，季坤玉.玉屏风口服液质量标准研究［J］.中成药，2005，27（6）:659.