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       【摘要】 
       目的建立毛冬青药材中Ilexgenin A的高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）的含量测定方法。 方法采用Lichrospher-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流动相为乙腈－0.1%醋酸溶液（60∶40），流速1 ml/min，蒸发光散射检测器：漂移管温度96℃，气体流速2.1 L/min。结果Ilexgenin A在0.7～14.5μg浓度范围内线性关系良好，r = 0.999 7（n = 6）。平均回收率为100.32 %，RSD = 1.38 % (n = 6)。结论本法操作快速、准确，可作为毛冬青药材中IlexgeninA的质量控制方法。
       【关键词】  毛冬青 Ilexgenin A 高效液相色谱-蒸发夹散射检测
       Determination of Content of Ilexgenin A in Ilex Pubescens by HPLC-ELSD
       CHENG Xinju， LI Jiaping， YUAN Haiming，  WU Di，ZENG Xianyi 
       Jiangxi Medicinal Research Institute, Nanchang  330029, China
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for the determination of content of Ilexgenin A in Ilex Pubescens .MethodsLichroshper-C18 (4.6 mm×250 mm，5μm) column was used in HPLC with mobile phase Acetonitrite-0.1%Acetic acid (60∶40). The flow rate was 1ml／min, an evaporative light-scattering detector was used and the parameters were set as follows: drift tube temperature was 96℃ and gas flow rate was 2.1 L/min .ResultsThe linear range of Ilexgenin A is from 0.7 ～ 14.5μg, r=0.9997（n=6）.The average recovery is 100.23%，RSD = 1.38% (n = 6).ConclusionThis method is rapid and accurate. It can be used for quality control on Ilexgenin A of Ilex Pubescens.
       Key words：Ilex Pubescens ;   Ilexgenin A ;   HPLC-ELSD ;   Determination of content
       
       毛冬青药材为冬青科冬青属植物毛冬青Ilex pubescens Hook et Arm 的干燥根。功能清热解毒，活血通脉，消肿止痛。用于治疗风热感冒、肺热咳喘、冠心病、血栓闭塞性脉管炎。其生长在南方地区，为江西省道地中药材的一种，含有大量皂苷活性成分物质［1，2］。在毛冬青药材的质量标准研究中，我们首次用高效液相色谱-蒸发光散射检测器的分析方法对其中的一个成分（Ilexgenin A）进行了含量测定［3，4］。
       1  仪器和试药
       岛津LC-10AD泵，Alltech 500 ELSD检测器，Sepu3000色谱工作站；Ilexgenin A对照品（批号：050804，含量100% HPLC法）自制；毛冬青药材：江西省各地采挖；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       　　
       2.1  色谱条件色谱柱为Lichrospher -C18 (4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（60∶40）；流速1ml／min；蒸发光散射检测器飘移管温度为96℃，气体流速为2.1 L/min。
       2.2 测定方法
       2.2.1 对照品溶液的制备 
       取Ilexgenin A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含65μg的溶液，即得。
       2.2.2 供试品溶液的制备 
       取毛冬青药材粉末（过4号筛），约1.5 g，精密称定，置250 ml回流瓶中，加100 ml的乙醇，回流1 h，取下，滤过，然后用乙醇洗涤数次，滤液蒸干，残渣用甲醇溶解到10 ml量瓶中，摇匀，即得。
       2.2.3 测定法 
       分别精密吸取对照品溶液5 μl和10 μl及供试品溶液5～10 μl注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
       2.3 专属性实验取对照品和供试品溶液按上述方法进行测定，结果在Ilexgenin A对照品相应的保留时间处有一相同的峰，周边无其它杂质峰干扰。保留时间在8 min左右，理论板数以Ilexgenin A峰计大于8 000。结果见图1～2。
       2.4  蒸发光散射检测器的条件考察
       2.4.1  漂移管温度的选择在上述色谱条件下，固定漂移管的气流量为2.1 L/min，改变漂移管温度，用Ilexgenin A对照品溶液进样，测定其峰面积及信噪比（S/N），选择峰面积和信噪比两者均为最大值时的温度，得到最优化的漂移管温度为96℃。
       2.4.2  漂移管中气流量的选择在上述色谱条件下，固定漂移管的温度为96℃，改变漂移管的气流量，用Ilexgenin A对照品溶液进样，测定其峰面积及信噪比（S/N），选择峰面积和信噪比两者均为最大值时的气流量，得到最优化的漂移管气流量为2.1 L/min。
       2.5 标准曲线的制备
       取Ilexgenin A 对照品约15 mg置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，从中吸取0.5，1，2.5，5，7.5 和10μl注入色谱仪中进行测定，结果在0.7 ～14.5 μg的范围内，浓度与峰面积的对数值成一直线，回归方程为lgA = 1.481 1 lgC+ 6.174 7 , 相关系数 r = 0.999 7（ n = 6 ）。
       2.6 溶液的稳定性实验取样品溶液一份，在不同的时间点测定，结果在24 h内稳定性好。  
       2.7 重复性实验取同一批毛冬青药材，分别制配6份相同浓度的供试品溶液进行测定，计算平均含量为0.217%，RSD为1.23%。2.8   回收率实验分别称取同一批已知含量的毛冬青药材（含量：0.217%）适量，加入一定量的Ilexgenin A对照品，共6份，制成供试品溶液，进行测定，计算平均回收率为100.32%，RSD为1.38%。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）
       2.9 药材的测定对从不同地方、不同时间采集的毛冬青药材，经干燥粉碎，过4号筛，分别取1.5 g，精密称定，按上述方法操作，测定。结果见表2。表2  毛冬青药材中Ilexgenin A 的测定结果（略）
       3 讨论
       毛冬青药材中的大部分皂苷类物质没有紫外吸收，我们采用蒸发光散射检测器对其中的皂苷类物质进行检测，得到满意的结果。
       
       本实验采用不同浓度的乙醇进行不同时间的超声和回流提取试验，结果表明，毛冬青药材采用95%乙醇100ml，回流1 h，其中的Ilexgenin A 提取比较完全，含量最高。
       在实验过程中，使用过甲醇-水，乙腈-水和乙腈-0.1%醋酸水溶液作流动相，乙腈-水作流动相较好，在水中加少许冰醋酸，对峰形能得到更好的改善，因此，本法选用了乙腈-0.1%醋酸溶液（60∶40）作为流动相。
       本法中浓度和峰面积的对数值曲线为一良好的直线，此直线未过原点，因此在本方法中应采用外标两点对数方程来进行计算。
       
       本方法经实验证明，准确性高，重复性好，简便快速，可对毛冬青药材的质量进行有效的控制。
       【参考文献】
         　　［1］宋立人，洪恂，丁绪亮，等.现代中药学大辞典，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2001：419.
       
       ［2］王本祥.现代中药药理学［M］.天津：天津科学技术出版社，1999：919.
       
       ［3］张爱华，余华，陈新菊，等. 高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定爱婴催乳液中黄芪甲苷的含量［J］.药物分析杂志，2000，20(6)：415.
       
       ［4］国家药典委员会.中国药典，I部［S］.北京：化学工业出版社，2005：212.