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       【摘要】 
       目的测定青海地区几种锦鸡儿属植物中总黄酮的含量。方法采用分光光度法，以芦丁为对照品，并利用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色方法，对青海地区几种锦鸡儿属植物中的总黄酮含量进行测定。结果在最大吸收波长510 nm处芦丁测定的线性方程是A=12.737C－0.003 5，相关系数r=0.999 6 (n=7) , 测得方法的平均回收率为99.2 %（n=6），RSD=1.05% 。结论该方法的测定结果准确可靠、快速、重复性好。
       【关键词】  锦鸡儿属 总黄酮 分光光度法
       Determination  of the Total Flavonoid Content in  the plant of Caragana Fabr. from Different Areas in Qinghai Province
       SONG Ping, ZHAO Mingde, YIN Haiqing
       Department of Chemistry, Qinghai Institute of Nationalities，Xining 810007, China
       Abstract：ObjectiveTo determine the total flavonoid content of Caragana Fabr. plant from different areas in Qinghai province. MethodsWith rutin as standard samples, spectrophotometry  method and the colour method of sodium nitrite—aluminium nitrate—sodium hydroxide were used to determine the total flavonoid content in the plant of Caragana Fabr. from different areas in Qinghai province.ResultsThe calibration curve of rutin at 510nm was  A=12.737C－0.003 5, r=0.999 6 (n=7) , and the average recovery was 99.2 % (n=6) with RSD of 1.05% .ConclusionThis  method  is  reliable, accurate,quick and  reproducible.
       Key words：Caragana Fabr.；  Total flavonoids；  Spectrophotometry
       豆科（Legu minosae）锦鸡儿属Caragana Fabr.植物，为落叶灌木，全世界约有一百多种，主要分布于亚洲和欧洲的干旱和半干旱地区，是温带亚洲的代表属之一。我国锦鸡儿属植物有62种，9变种12变型，主要产于西北、华北、东北、西南等干旱地区和荒漠地带；青海产20种，3变种和1变型［1,2］。该属植物药用部位为其根、根皮和花，根和花的药用作用主要是祛风止痛、活血散瘀、补气益肾、滋阴健脾等，治疗头晕腰酸、妇女气虚白带、耳鸣眼花、肺虚久咳、小儿疳积、风湿性关节炎等疾病。近年来临床研究报道，该属植物对抗炎、治疗高血压病也有明显效果，而且还具有较强的抗癌及抗病毒的活性［3～8］。由于该属植物资源丰富、分布广泛，而且具有较强的药理活性，但目前研究的品种还是较少，因此，为全面利用该属植物资源并且充分开发其药用价值，给合理选取该属植物用药品种提供可靠的参考依据，本文建立了锦鸡儿属植物中总黄酮含量的分析方法，并首次对青海省几种锦鸡儿属植物中的总黄酮含量进行了测定。
       1  器材
       1.1  仪器与试剂
       722型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）； 恒温水浴锅（金坛恒丰仪器有限公司）；分析天平(上海良平精密仪器仪表有限公司)；常用玻璃仪器等。对照品芦丁 (中国药品生物品检定所) ，实验中试剂均为分析纯。
       1.2 样品采集
       2007-08在青海省境内采集锦鸡儿属植物，由青海省藏药研究所多杰研究员鉴定。将采集药材的根茎部分去除杂质、切断，阴干，粉碎后过80目筛作为试验药材。
       2 方法
       2.1 芦丁对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品0.025 0 g，75%乙醇溶解并定容至100 ml容量瓶中稀释至刻度，即得芦丁对照品储备液，使用时稀释成所需浓度即可。
       2.2 锦鸡儿属植物中总黄酮提取方法的确定准确称取粉碎过筛后的锦鸡儿属植物样品10 g于烧瓶中，加入100 ml石油醚回流40 min进行脱脂，弃去滤液，再加入100 ml 75%的乙醇，回流提取30 min共3次，弃去滤渣，合并滤液后进行减压浓缩，用75%乙醇定容至250 ml量瓶中，即得药材中总黄酮的提取物［9～11］。
       3 结果
       3.1 最大吸收波长的确定取芦丁对照品溶液4 ml采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色方法，在470～560 nm波长范围内测定溶液的吸光度，结果得出该溶液在510 nm处有最大吸光度值，由此可以选择510 nm作为实验的检测波长。
       3.2 实验测定条件的选择
       3.2.1 氢氧化钠溶液用量的选择精密吸取芦丁对照品溶液2 ml各4份, 分别置于25 ml容量瓶中, 各加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml，再加10%硝酸铝1.0 ml，然后分别加入10% 氢氧化钠5,10，15，20 ml，再用75%乙醇溶液稀释至刻度, 摇匀，分别在510 nm处测定其吸光度（见表1）。由此选择氢氧化钠溶液的用量为10% NaOH 10 ml。表1  不同氢氧化钠用量时芦丁标准溶液的吸光度（略）
       3.2.2 硝酸铝溶液用量的选择在装有芦丁对照品溶液的4个25 ml容量瓶中, 各加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml，再分别加入10%硝酸铝溶液0.5，1.0，1.5，2.0 ml，然后分别加入10%氢氧化钠10 ml，定容, 分别在510 nm处测定其吸光度，结果见表2。由此选择硝酸铝溶液加入量为1.5 ml最佳。表2  不同硝酸铝用量时芦丁标准溶液的吸光度（略）
       3.2.3 反应温度的选择精密吸取芦丁对照品溶液2 ml，加1.0 ml 5%亚硝酸钠溶液, 1.5 ml 10%硝酸铝溶液, 10%氢氧化钠10 ml，分别在室温、20,30,40℃时测定溶液吸光度值。实验结果见表3。由此可知, 温度对实验测定没有太大的影响, 所以可选择室温下对样品进行测定。表3  不同温度下芦丁标准溶液的吸光度（略）
       3.3 标准曲线的绘制
       精密吸取芦丁对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 ml分别置于50 ml容量瓶中，各加1.0 ml 5%亚硝酸钠溶液，摇匀放置5 min，加1.5 ml 10%硝酸铝溶液，摇匀放置5 min，再加10%的氢氧化钠溶液10 ml，然后用75%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀放置10 min后，以试剂空白为参比，分别在510 nm处测定其吸光度。以芦丁浓度C (g/ml) 为横坐标，吸光度A为纵坐标，其线性方程为：A=12.737C－0.003 5，相关系数r=0.999 6 (n=7)。
       3.4 精密度实验取浓度为0.025 0 mg/ml的芦丁对照品溶液, 在“3.2”项选定的实验条件下连续6次测定其吸光度A值, 计算得吸光度值的相对标准偏差RSD=0.99% (n=6) ，表明仪器精密度良好。
       3.5 重复性实验精密称取鬼箭锦鸡儿样品10 g，共6份，按“2.2”项下方法操作制备供试品溶液，然后在“3.2”项选定的实验条件下测定其吸光度A值, 计算得吸光度值的相对标准偏差RSD=1.03%(n=6), 实验结果表明本方法的重复性满足要求。
       3.6 稳定性实验精密称取鬼箭锦鸡儿样品10 g，按“2.2”、“3.2”项下方法操作，然后分别在2，4，6，8，10 h时测定其吸光度A值, 结果表明样品溶液在10 h内稳定。
       3.7 回收率实验精密称取6份已知含量的鬼箭锦鸡儿样品10 g , 依次加入一定量芦丁对照品溶液，按“2.2”、“3.2”项下方法操作，测得其平均回收率为99.2 %（n=6），RSD=1.05 %。
       3.8 药材中总黄酮含量的测定称取各种锦鸡儿属样品按“2.2”项下方法制备供试品溶液，取试样离心，除去悬浮杂质，准确吸取上层清液1 ml 4份, 分别置于50 ml容量瓶中, 其中1份用75%的乙醇定容至刻度, 作为参比溶液。 其余3份按“3.2”项下实验条件分别在波长510 nm处测定其吸光度A值。结果见表4。经计算后可得出青海地区几种锦鸡儿植物中总黄酮的含量。表4  青海几种锦鸡属植物中总黄酮含量的测定结果（略）
       4 讨论
       实验表明，经过优化选择在波长510 nm处锦鸡儿属植物中总黄酮的测定条件是在5%的亚硝酸钠溶液1.0 ml, 10%的硝酸铝溶液1.5 ml, 10%的氢氧化钠溶液10 ml下为最佳。另外由于本实验利用分光光度法测定的是锦鸡儿属植物中所有黄酮苷和苷元的总含量，加之采用的是碱性介质中加铝盐显色的方法, 从而也使得样品中总黄酮的测定含量比较高和准确可靠。
        通过分析检测发现青海省锦鸡儿属样品中总黄酮含量各不相同，其原因可能是由于品种不同、采集时间、地点的不同而引起的；另外不同海拔地区以及不同气候特点等原因也可能对实验结果产生一定的影响。
       
       锦鸡儿属植物在我国的许多地区都有广泛分布，资源丰富，适应能力强，由于其有根瘤，能提高土壤肥力，绿化荒山，保持水土，防风固沙。因此，根据本文的分析测定结果，不仅可为选择好的锦鸡儿属品种进行种植、保护生态环境提供一定的参考依据，而且还可为有针对性的充分发挥该属植物的药用价值起到积极的促进作用。
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