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       【摘要】 
       目的探讨手法治疗对异常应力环境下兔颈椎间盘（intervertebral disc，IVD）组织中蛋白多糖（proctologycan，PG）的影响，寻找预防和延缓椎间盘退变的方法。方法将24只日本大耳兔随机分为正常组、模型治疗组和模型组。按要求处理两个月后，测出颈椎间盘C５/６椎间盘组织蛋白多糖主要组成糖氨多糖（glycosaminoglycan，GAG）的量。结果正常组、模型治疗组中GAG含量明显高于模型组（P<0.05）；而正常组与模型治疗组之间无显著性差异（P>0.05）。结论在椎间盘组织退变的早期，手法治疗可以抑制颈椎间盘组织GAG的含量降低，从而起到延缓椎间盘退变的作用。
       【关键词】  椎间盘 退变 手法 蛋白多糖
       Effect on the Content of Proctologycan (PG) of IVD in the Abnormal Stress State by Intervention of Manipulation
       XIA Shushu, DING Mingqiao, XIONG Yong, YANG Yong, XU Jinrong4, ZOU Ji
       1.Hubei University, Wuhan 430062, China; 2. Fifth Hospital of Wuhan, Wuhan 430050, China; 3. Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Wuhan 430061, China; 4. Wuchang Hospital, Wuhan 430063, China
       Abstract：ObjectiveTo investigate the effect on the content of PG of IVD in the abnormal stress state by invention of manipulation and to study the method of preventing and retarding the degeneration of IVD.MethodsTwenty-four Japanese white rabbits were randomly divided into three groups: control group, model therapy group and model group. The rabbits were handled according to the requirement. Eight weeks later, the weight of wet IVD was calculated, the content of GAG was detected. ResultsThe results showed that the content of GAG of IVD in either control group or model therapy group was higher than that of the model group (P<0.05) and there was no difference between control group and model therapy group (P>0.05). ConclusionAbnormal stress may decrease the content of GAG in IVD and induce the degeneration of IVD. Meanwhile, manipulation may increase the content of GAG of IVD in the abnormal stress state. We infer that manipulation may prevent and retard the degeneration of IVD in the early stage.
       Key words：Intervertebral disc;  Degeneration;  Manipulation;  Proteoglycan
       颈椎病是临床上一种常见的病症，颈椎间盘退变是颈椎病的主要病理基础。研究发现椎间盘组织中蛋白多糖（PG）的含量减少是椎间盘退变的早期表现之一。本实验对处在造模过程中兔颈部进行手法治疗以抑制PG的减少，从而起到延缓椎间盘退变的作用。
       1  材料与仪器
       1.1 试剂
       0.1 mol/L NaOH，6 mol/L HCl，胰蛋白酶，60%三氯醋酸，1mg/ml氨基半乳糖，乙酰丙酮，乙醇，对二氨基苯甲醛。
       1.2 仪器水槽、匀浆器、试管、离心机、医用恒温箱、分光光度计、电子天平。
       2 方法
       2.1 动物及分组
       将24只日本大耳兔，雌雄不限，随机分为3组：正常组、模型组和模型治疗组，每组8只。
       2.2 动物模型的复制
       采用应氏［1］造模方法，将模型组、模型治疗组动物分别固定在特制的笼子里，使兔子处于低头屈曲45°，1次/d，5 h/次，其余时间放在笼子中自由饲养；正常组的兔子不做低头屈曲颈部固定，颈部可以自由活动，其他处理跟上述二组兔子处理一样。
       2.3 手法干预
       模型治疗组的兔子每次在固定松解后施加手法干预，具体方法：运用三指拿法、按揉法循足太阳膀胱经和督脉对兔颈椎两旁的肌肉操作，使肌肉放松，约5 min。然后，用中度力量按压风池、天柱、肩井、百会等穴，约3～4 min。重复上述操作两次，最后用揉法、捋法结束手法，约1 min。
       2.4 取材及处理
       造模8周后，从兔耳静脉注射10 ml空气将其处死,迅速从颈椎后正中线切开皮肤，逐层分离颈椎两旁的肌肉韧带，直达椎体。从枕骨大孔下将头和寰椎分离，从第7颈椎下将颈椎和胸椎进行分离，取下整个颈段脊椎。将取下的新鲜颈段椎体迅速放在冰面上，用眼科剪刀、镊剥离椎间小关节和椎体前方的软组织，分别从C５椎体下缘和C６椎体上缘分离上、下软骨终板，取出C５/６椎间盘组织，液氮速冻，-70℃下保存。
       2.5 蛋白多糖的测定  
       称取椎间盘组织，提取GAG，测定GAG的量［2］。
       2.6 统计学处理
       将检测的数据PEMS3.1软件系统，计算出各组兔C５/６椎间盘组织中GAG的测定值的±s，并作t检验。
       3 结果
              
       模型治疗组、正常组之间比较，兔颈椎间盘组织GAG的含量无显著性差异(P＞0.05)；模型治疗组、正常组兔颈椎间盘GAG的含量比模型组高，存在显著性差异(P<0.05)。结果见表1。表1  兔C５/６椎间盘组织中GAG含量的测定值比较（略）
       4 讨论
       颈椎病在祖国医学属痹症、眩晕、萎症等范畴。中医认为椎间盘局部缺少精、气、血的濡养，导致椎间盘的“虚”，椎间盘的亏虚为其内因。各种损伤以及外邪的反复侵袭造成气血损伤，导致气滞血瘀，伤精耗气，致使椎间盘组织进一步失去濡养，从而加快椎间盘的退变，引发颈椎病，出现肩颈疼痛、颈项活动受限、头晕、手指麻木等症状。
       蛋白多糖含量和成分的改变被认为是椎间盘退变早期出现的生化改变之一。蛋白多糖是构成椎间盘组织的主要成分之一，维持椎间盘正常结构、代谢和生物力学功能的生化基础，在维持椎间盘结构和功能方面起着重要作用。蛋白多糖是一种由多肽为主链，以许多氨基多糖为侧链组成的大分子体，在体内有多方面的作用，具有粘合、润滑及缓冲外界压力的作用，同时具有较强的水化作用，使椎间盘具有正常的渗透压和离子浓度，从而保证椎间盘不断得到营养和维持正常功能。研究发现［3，4］在退变的椎间盘中，PG和II型胶原蛋白明显减少。因GAG是PG的最主要成分，故通过测量GAG的量可以反映出PG的量。
       异常应力不仅可以直接损伤椎间盘结构，而且异常应力可以改变椎间盘内细胞生物学性能及细胞代谢。Kuga等［5］进行脊柱功能单位疲劳应力实验发现纤维环容易产生裂隙，有时还可产生软骨终板的破裂，纤维环的破裂可以改变椎间盘内的压力，从而影响椎间盘的承受压力和缓冲压力的能力。异常压力还能够加快椎间盘细胞的凋亡，造成椎间盘细胞的数量减少，细胞活性降低，盘内的主要成分蛋白多糖和胶原的合成减少，分解增强，加快椎间盘退变。Liu等［6］研究发现处于异常应力环境下的椎间盘细胞产生MMPs和NO等，抑制了PG的合成，并加快其降解反应。张振兴等［7］发现失衡动静力下退变兔腰椎间盘组织细胞凋亡增加、细胞活性降低，蛋白多糖的合成减少。从本实验结果来看，模型组颈椎间盘中PG的含量低于正常组(P<0.05)，说明异常应力可以使颈椎间盘的PG减少，说明椎间盘发生了退变。
       手法干预可以改善肢体的力学关系，还可以调节人体新陈代谢，能扩张毛细血管，使患肢及局部的血流明显增加,血液循环明显改善。最近研究［8，9］发现手法干预可以不同程度地抑制退变兔颈椎间盘模型骨骼肌损害，也能不同程度的部分延缓软骨终板中软骨细胞及胶原的退变，维持椎间盘的正常力学性能和生理特性，从而起到延缓椎间盘退变的作用。本实验采用按揉弹拨等手法理顺筋骨，疏通经脉，促进气血的运行，使颈椎局部的血液循环加快，椎间盘组织细胞得到充足的营养，增强了椎间盘组织细胞的活性，其代谢增强，蛋白多糖合成增强、降解减弱，有利于延缓椎间盘的退变。本实验在手法干预8周后，模型治疗组颈椎间盘中PG的含量与正常组无显著性差异(P＞0.05)，且高于模型组(P<0.05)。这表明在椎间盘退变的早期阶段，手法能够抑制PG的减少，延缓椎间盘的退变进程。 
       【参考文献】
         　　［1］应航,陈立,詹红生,等.实验性无创兔颈椎间盘退变模型的建立［J］.中国骨伤，2004，17 (8):466.
       
       ［2］张佐轮,谭炳毅,袁泽农,等.颈椎间盘纤维环及髓核生化成分的分析［J］.中国脊柱脊髓杂志,2000,10(2):125.
       
       ［3］Masuda K, Oegema TR JR, An HS.Growth Factors and Treatment of Intervertebral Disc Degeneration J［J］. Spine, 2004,29(23):2757.
       
       ［4］Takae R, Matsunaga S, Origuchi N, et al.Immunolocalization of bone morphogenetic protein and its receptors in degeneration of intervertebral disc J［J］. Spine,1999,24(14):1397.
       
       ［5］Kuga N,Kawabuchi M. Histology of intervertebral disc protrusion; an experimental study using an aged rat model［J］. Spine,2001,26: E379.
       
       ［6］Liu GZ, Ishihara H, Osada R, et al. Nitric oxide mediates the change of proteoglycan synthesis in the human lumbar intervertebral disc in response to hydrostatic pressure［J］.Spine,2001, 26:134.
       
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       ［9］井夫然,詹红生,张静.手法对实验性退变兔颈软骨终板超微结构的影响［J］.中医正骨,2006,18(5):7.