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       【摘要】 
       目的观察冰片对大鼠不同脑区5-羟色胺（5-HT）合成及转运的影响。方法采用5-HT合成抑制剂对氯苯基丙氨酸(p-chlorophenylalanine, p-CPA)及5-HT再摄取抑制剂氟西汀(fluoxetine)作为工具药，以观察在合用冰片后对大鼠不同脑区5-HT含量的影响。结果单用冰片组可升高大鼠下丘脑、脑干5-HT含量，单用p-CPA或与冰片合用均可明显降低大鼠各脑区5-HT含量，单用氟西汀可明显升高大鼠脑内5-HT含量，除下丘脑外均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）；氟西汀合用冰片亦可升高大鼠脑内5-HT含量，除海马外均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。结论冰片可升高大鼠下丘脑、脑干5-HT含量，与p-CPA、氟西汀合用后，不能改变此二者降低或升高脑内5-HT含量的作用趋势。
       【关键词】  冰片　对氯苯基丙氨酸　 氟西汀　5-羟色胺
       Effect of Borneol on Synthesis and Transmission of 5-HT in Rat Different Brain Region
       LI Weirong, WANG Ningsheng, MI Suiqing
       Institute of Clinical Pharmacology, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405，China
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of borneol on synthesis and transmission of 5-HT in rat different brain regions.Methodsp-chlorophenylalanine (p-CPA) ,a synthesis inhibitor of 5-HT and fluoxetine,a reabsorbing blocker of 5-HT were adopted as tool drugs, to observe the effect of borneol on the content of 5-HT in different rat brain regions.ResultsBorneol could increase the contents of 5-HT in rat hypothalamus and brain stem. CPA or borneol could decrease the content of 5-HT in rat different brain regions. Fluoxetine could increase the content of 5-HT in rat different brain regions except hypothalamus. Fluoxetine coudined with borneol could increase the content of 5-HT in rat different brain regions except hippocampus. Conclusion Borneol can increase the content of 5-HT in rat hypothalamus and brain stem but can’t change the function trends of them after combination with p-CPA and fluoxetine.
       Key words：Borneol;   p-Chlorophenylalanine(p-CPA);   Fluoxetine;   5-Hydroxytryptamime（5-HT）
        冰片为龙脑香科常绿乔木植物龙脑香Dryobalanops aromatica Gaertn. f.树脂的加工品，或龙脑香的树干经蒸馏冷却而得的结晶，称“龙脑冰片”，亦称“梅片”；由菊科多年生草本植物艾纳香（大艾）Blumea balsamifera DC.叶的升华物经加工劈削而成，称“艾片”；现多用松节油、樟脑等，经化学方法合成，称“机制冰片”。冰片味辛苦，性微寒，归心、脾、肺经，具有开窍醒神、清热止痛的功效［1］。常用于脑血管疾病所致的中风以及冠心病心绞痛等疾病。冰片为一味常用开窍药，开窍药能使神志昏迷病人苏醒，其药理作用机制与中枢神经系统有着密切的关系。近年来国内外学者致力于冰片对中枢神系统的作用研究，发现冰片可以对抗苦味毒兴奋中枢神经的作用，延长惊厥潜伏期，起镇静抗惊厥作用［2］；能延长常压耐缺氧实验小鼠耐缺氧存活时间［3］；可明显改善长时连续作业大鼠的觉醒水平，这种作用与其增加前额叶皮层去甲肾上腺素（Norepinephrine, NE）和5-羟色胺（5-hydroxytryptamime,5-HT）水平有关［4］。冰片不仅对中枢神经系统有一定的药理作用，而且对中枢神经递质的含量及活性有明显影响，如冰片可非竞争性抑制乙酰胆碱烟碱型受体介导的效应［5］、对γ-氨基丁酸A受体（GABAA）活性有正向调节作用［6］。我们前期研究也发现冰片对大鼠下丘脑5-HT含量有一定影响［7］。为进一步探讨冰片对5-HT的作用部位与作用环节，本研究采用5-HT合成抑制剂对氯苯基丙氨酸(p-chlorophenylalanine, p-CPA)及5-HT再摄取抑制剂氟西汀(fluoxetine)作为工具药，观察在合用冰片后对大鼠不同脑区5-HT含量的影响，探索冰片治疗神经系统疾病的药理学机制。
       1   材料
       1.1  仪器DIONEX Summit高效液相色谱仪（美国DIONEX公司），Chromeleon色谱工作站（美国DIONEX公司），HP1049A电化学检测器（美国安捷伦公司），RC5C低温高速离心机（美国杜邦公司），PHS-2C精密酸度计（上海理达仪器厂）。
       1.2  药品与试剂冰片购自广州采芝林药店，经本校中药鉴定室鉴定为机制冰片。盐酸氟西汀胶囊，氟西汀含量为20 mg/粒，产品批号：A174561，分装批号：060511，生产厂：Eli Lilly and Company Limited（美国礼来公司英国分部），分装厂：礼来苏州制药有限公司。p-CPA（美国Sigma公司，批号105K3734）；5-HT（美国Sigma公司，批号121K7059），乙腈（美国TEDIA公司），辛烷磺酸钠（广州市越秀区铱能色谱材料贸易部），其余试剂均为市售分析纯，实验用水为三蒸水。
       1.3  动物与试剂 
       雌性SD大鼠，SPF级，体重（220±20）g，广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号2006A014。
       2  方法
       2.1  分组及给药SD雌性大鼠60只，随机分为6组，每组10只。第1组为生理盐水组，采样前30 min灌胃生理盐水(5 ml/kg)；第2组为冰片组，采样前30 min灌胃10%冰片粟米油混悬液(0.15 g/kg)；第3组为p-CPA组，于采样前60 min按280 mg/kg腹腔注射p-CPA；第4组为p-CPA加冰片组，于采样前60 min按280mg/kg腹腔注射p-CPA，30 min后灌胃10%冰片粟米油混悬液(0.15 g/kg)；第5组为氟西汀组，采样前60 min按7 mg/kg腹腔注射氟西汀；第6组为氟西汀加冰片组，采样前60 min按7 mg/kg腹腔注射氟西汀，30 min后灌胃10%冰片粟米油混悬液(0.15 g/kg)。
       2.2  色谱条件色谱柱为Develosil C30-UG-5（150 mm×4.6 mm, 5 μm，日本Nomura Chemical Co., Ltd）；流动相为磷酸二氢钾溶液（25 mmol/L，内含乙二胺四乙酸二钠0.5 mmol/l，辛烷磺酸钠0.5 mmol/l，用磷酸调pH 3.6） ∶乙腈 = 90∶10（体积比），用前经0.45 μm滤膜真空抽滤，流速1.0 ml/min；玻璃碳工作电极，Ag/AgCl参比电极，检测电位0.6 V；柱温30 ℃，自动进样器温度10 ℃。
       2.3  样品采集与处理SD大鼠，♀，断头，于冰浴下迅速分离出下丘脑、脑干、皮质、海马、纹状体，称重，置玻璃匀浆器中，按一定比例（0.5 ml/100 mg）加入2 %三氯醋酸溶液（预冷至4 ℃），温和匀浆，匀浆液用吸管小心转移入离心管中，用一定比例（0.2 ml/100 mg）的NaH2PO4溶液(0.33 mol/L, pH 6.0，内含0.5 mmol/L Na2EDTA)荡洗匀浆器，洗液并入离心管，混旋均匀，低温高速离心（4 ℃，15 000 r/min，15 min），取上清液50 μl进样测定。
       2.4  含量计算方法
        大鼠不同脑区5-HT含量（μg/g湿组织） = C×VW
        式中C为大鼠下丘脑样品测定浓度（μg/ml）；V为样品预处理过程中加入液体体积总量（ml）；W为脑组织湿重（g）。
       2.5  统计方法
       各组数据以±s表示，组间比较采用SPSS13.0软件包进行单因素方差分析（ANOVA）。
       3  结果
        由表1可见，单用冰片组可升高大鼠下丘脑、脑干5-HT含量，与对照组比较有显著差异（P<0.05），对皮质、海马及纹状体的5-HT含量无影响；单用p-CPA或与冰片合用均可明显降低大鼠各脑区5-HT含量，与对照组比较均有显著差异（P<0.05或P<0.01）；单用氟西汀可明显升高大鼠脑内5-HT含量，除下丘脑外均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）；氟西汀合用冰片亦可升高大鼠脑内5-HT含量，除海马外均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。表1  冰片对大鼠不同脑区5-HT含量的影响（略）
       4  讨论
        中枢神经递质分为经典递质、神经肽以及一些有待确定的可能递质,经典递质分为胆碱类、单胺类和氨基酸类。中枢神经系统疾病多数与体内神经递质功能失调有关，如经典“单胺假说”认为，抑郁症的发生与脑内5-HT和/或NE水平低下有关,许多抗抑郁药作用于5-HT或NE的转运蛋白从而阻断这些递质的摄取。5-HT的生物合成是以色氨酸为前体，首先在色氨酸羟化酶作用下羟基化生成5-羟色氨酸，由5-羟色氨酸脱羧酶脱羧基而生成5-HT。p-CPA是一种5-HT合成阻断剂，可使脑内5-HT耗竭，明显降低脑内5-HT的含量。氟西汀是目前抗抑郁药的一线药物，属单胺重摄取抑制剂，可选择性地抑制5-HT的重摄取，服用氟西汀后会使脑内5-HT含量升高，如郭云珍等［8］通过测定大鼠脑透析液中的5-HT含量发现，给药后80 min内，渗析液中5-HT浓度增加到基础水平的2倍以上，160～240 min内，5-HT浓度达到最大，为基础水平的3.2倍，且持续至400 min,给药后12 h时，5-HT浓度仍保持高水平。本实验结果显示，单用p-CPA可明显降低大鼠各脑区5-HT的含量，单用氟西汀可明显升高大鼠大部分脑区5-HT的含量。冰片可升高大鼠下丘脑、脑干5-HT含量，与p-CPA、氟西汀合用后，不能改变此二者降低或升高脑内5-HT含量的作用趋势，表明作为中医传统理论使用的佐使药冰片，其自身药理作用不强。
       【参考文献】
         　　［1］雷载权.中药学［M］.上海：上海科学技术出版社，1995：271.
       
       ［2］方永奇，邹衍衍，李 羚，等．芳香开窍药和祛痰药对中枢神经兴奋性的影响［J］．中医药研究，2002，18(3)：40.
       
       ［3］江光池，冯旭军，黄 岚，等．龙脑和异龙脑对小鼠和家兔的药理作用［J］.华西药学杂志，1989，4(1)：23.
       
       ［4］薛丽，谌小维，樊宏孝,等.冰片对长时连续作业大鼠前额叶皮层单胺类递质水平的影响［J］.第三军医大学学报，2006，28（18）：1867.
       
       ［5］Tae-Ju Park, Yong-Soo Park, Tae-Jyun Lee, et al. Inhibition of acetylcholine-mediated effects by borneol［J］. Biochemical Pharmacology, 2003(65):83.
       
       ［6］Renee E. Granger, Erica L. Campbell, Graham A.R. Johnston. (+)- And (-)-borneol: efficacious positive modulators of GABA action at human recombinant α1β2γ2L GABAA receptors［J］. Biochemical Pharmacology, 2005 (69):1101.
       
       ［7］李伟荣,姚丽梅,宓穗卿,等. 冰片对大鼠下丘脑组胺、5-羟色胺含量的影响［J］. 中药材,2004,27(12):937.
       
       ［8］郭云珍，于莉，马郑，等. 高效液相色谱法测定大鼠给药盐酸氟西汀后脑渗析液中的5-羟色胺［J］. 色谱，2007，25（2）：211.