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       【摘要】 
       目的建立树脂吸附法生产茶多酚中大孔树脂残留物的检测方法。方法采用顶空气相色谱法对树脂残留物正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、苯乙烯及二乙烯苯进行检测。结果各组分在线性范围内呈良好线性关系，相关系数r为0.999 9～0.996 3，平均回收率符合要求。各组分检出量均符合规定。结论该方法简便可行，重现性好，结果可靠，适用于茶多酚中树脂残留物的检测。
       【关键词】  大孔树脂残留物　顶空气相色谱法　茶多酚
       Analysis of the Organic Residues in Tea Polyphenols by Headspace-GC
       HUANG Lifeng, LIU Youping*, CHEN Hongping, LI Daiyu
       Chengdu University of T.C.M,Chengdu,    611137,China
       Abstract:ObjectiveTo establish a detective method of organic residues of the resin in tea polyphenols.MethodsHeadspace-GC was used to determine the residue levels of N-hexane，benzene，methylbenzene，dimethylbenzene，benzene vinyl，divinyl-benzene in tea polyphenols.ResultsAll constituents have great linearity in each range of concentration，the coefficient correlation r were in the range of 0.999 9～0.996 3 and the average recovery rate was accorded with prescribe.ConclusionThe method is simple and accurate for the detection of residues in tea polyphenols.
       Key words:Macroreticular resin residues;  Headspace-GC;  Tea polyphenols
       茶多酚是一类存在于茶叶中的多羟基酚性化合物的混合物，具有良好的抗氧化性能及抗癌、抗病毒、抗菌、抗辐射、降脂、降压、防龋齿、消臭等功能。传统的茶多酚提取纯化工艺大多采用溶剂萃取法和离子沉淀法，由于离子沉淀法易带来重金属离子的残留，而溶剂萃取法往往采用氯仿等有毒溶剂，限制了茶多酚作为天然抗氧剂在食品、医药等领域的应用，是产品出口的一大障碍。树脂吸附法生产茶多酚工艺，污染环境少，符合化工“清洁生产”的发展趋势，已向工业化生产发展。为了对使用大孔吸附树脂提取纯化进行安全性考察，控制茶多酚的质量，本文依据有关国家食品药品监督管理局的要求，对顶空气相色谱法测定茶多酚产品树脂残留物含量进行了方法学研究。
       1  仪器与试药
        Agilent 6820气相色谱仪，7694E顶空进样器，Imowax (30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛细管色谱柱。正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、N,N-二甲基甲酰胺，以上试剂均为分析纯。茶多酚提取物（采用HPD600大孔吸附树脂分离纯化）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：Imowax (30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛细管色谱柱，氮气为载气，流速为2.5 ml/min，分流比为2.5∶25，FID检测器。进样条件：顶空瓶温度85℃，进样环温度110℃，传输线温度130℃，平衡时间10 min，进样体积1 ml。升温程序：初始温度60℃，保持2 min，以2℃/min升温到66℃，保持1 min，以7℃/min升温到80℃，保持1 min，以20℃/min升温到200℃，保持1 min。
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  对照品溶液的制备精密吸取正己烷121 μl，苯9 μl，甲苯92 μl，对二甲苯92 μl，邻二甲苯90 μl，苯乙烯88 μl，二乙烯苯88 μl置100 ml量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。再精密量取1ml置l00ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得每毫升含正己烷9.41 μg，苯0.79 μg，甲苯7.96 μg，对二甲苯7.92 μg，邻二甲苯7.92 μg，苯乙烯7.99 μg，二乙烯苯8.01 μg的溶液，再精密量取2.0 ml置顶空进样瓶中加盖密封，85℃平衡10 min，顶空进样1.0 ml。
       2.2.2  供试品溶液的制备精密称定茶多酚提取物0.8～1.0 g置顶空进样瓶中，精密加入水2.0 ml，作为供试品液，加盖密封，85℃平衡10 min，顶空进样1.0 ml。
       2.3  方法学考察
       2.3.1  阴性干扰取空白溶液(DMF-水)、对照品溶液和供试品溶液按上述色谱条件进样，由色谱图可知阴性无干扰。见图1～3。
       2.3.2  标准曲线的线性精密量取上述7种对照品储备液0.4，0.8，1.0，1.2，1.6 ml于100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，再精密量取2 ml置顶空进样瓶中，分别进样1.0 ml，以各溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归。见表1。表1  标准曲线的回归方程
       溶剂回归方程r线性范围（略）
       2.3.3  检测限以2～3倍噪音峰高所对应的含量为方法的最低检测量，将7种溶剂的混合对照品溶液逐步稀释，直到检测峰高为基线噪声的2～3倍为止，测得各有机溶剂的最低检测限为(ng/m1)：正己烷319.12，苯31.64，甲苯25.47，对二甲苯25.35，邻二甲苯25.34，间二甲苯25.35，苯乙烯25.57，二乙烯苯160.16。
       2.3.4  精密度将对照品溶液重复进样5次，计算各对照品溶液峰面积的RSD。见表2。表2  精密度实验各对照品峰面积的RSD%（略）
       2.3.5  回收率实验精密称定茶多酚提取物0.8～1.0 g置顶空进样瓶中，分别精密加入对照品溶液2.0 ml，依法进行测定，计算各有机溶剂的平均回收率。见表3。表3  各有机溶剂的平均回收率（略）
       2.4  样品的测定精密吸量取2.0 ml对照品溶液置顶空进样瓶中加盖密封，作为对照品瓶。精密称取茶多酚提取物0.8～1.0 g置顶空进样瓶中，精密加入水2.0 ml，加盖密封，作为样品瓶。置85℃下平衡10 min，顶空进样1.0 ml，分别测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品中残留物的含量。测定结果表明，样品中均未检出正己烷、苯、甲苯 、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯。
       3  讨论
        结果表明，茶多酚样品中均未检测出正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯、苯乙烯及二乙烯苯。ICH(药品注册的国际技术要求)规定溶剂残留限度苯为不得过0.0002％ ，甲苯0.089％，二甲苯0.217％ ，正己烷0.029％，甲基环己烷0.118％，对苯乙烯、二乙烯苯未明确［1］。因此本研究参照国家食品药品监督管理局《大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技术要求(暂行)》及补充说明，将残留物的限度定为苯小于2 ppm，其他小于20 ppm。
        在本文色谱条件下，可以排除样品中其他挥发性成分对苯残留物的干扰。本文建立的方法便于操作，分离度高，重现性好，结果准确可靠，适用于茶多酚树脂残留物的检测。
        由于大孔吸附树脂残留溶剂允许限度较低，所用对照品溶液浓度较低，而样品中大孔吸附树脂残留物浓度极低，故在加样回收率、精密度等试验中各有机溶剂的RSD偏高，但均符合《中国药典》2005年版Ⅱ部有机溶剂残留测定法项下RSD不大于10％的要求［2］。
        二乙烯苯是复杂的混合物，在色谱图中出现4个色谱峰。由于无法得到其单一成分的对照品，因此，二乙烯苯的峰面积以4个峰的面积之和来计算，并以其中含量最大组分的检测限作为二乙烯苯的检测限。
       【参考文献】
         　　［1］ICH指导委员会.药品注册的国际技术要求(质量部分)［S］.北京:人民卫生出版社,2000:87.
       
       ［2］中国药典委员会.中国药典,Ⅱ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:附录ⅧP,64.