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       【摘要】 
       目的对比分析胆木叶和茎中的挥发性成分和抗菌活性。方法采用水蒸气蒸馏法提取胆木叶和茎中的挥发性成分，用GC-MS技术进行成分对比分析，用滤纸片琼脂扩散法检测挥发性成分的抗菌活性。结果鉴定了胆木叶中的14个化学成分和茎中的10个化学成分；挥发性成分具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRS）、大肠杆菌、 普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌的活性。结论胆木叶和茎中的挥发性成分主要分别为烷酸46.30%和烯酸48.94%；在抗菌活性中，抗MRS的活性最强。
       【关键词】  胆木　挥发性成分　抑菌　气相色谱-质谱联用分析　金黄色葡萄球菌
       Study on the Comparative Analysis and Anti-MRS Activity of Volatile Components from Leaves and Stems of Nauclea officinalis
       SU Kui，GONG Min，DENG Shiming， ZHOU Jing
       1. Hainan University，Haikou，Hainan 
       570228,China;2.Food College of Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832000,China
       Abstract：ObjectiveTo compare and analyze the volatile components and its anti-bacterial activity of Nauclea officinalis" leaves and stems.MethodsThe volatile components were extacted by steam distillation from leaves and stems of Nauclea officinalis ,then the volatile components were compared and analyzed by GC-MS,and anti-bacterial bioassay of the volatile compounds was carried out by paper disk difusion method.ResultsThe results showed that 14 compounds of leaves and 10 compounds of stems were identified,and the volatile components possessed inhibitory activity against Methicillin resanalysestaphylococcus(MRS),E.coli,Staphylococcus aureus,P.vulgaris,Bacil subtilits.ConclusionThe main volatile components from leaves of Nauclea officinalis  is 46.30% of alkane acid and stems is 48.94% of olefine acid.Anti-MRS is the strongest in anti-bacterial activity.
       Key words：Nauclea officinalis;  Volatile components;  Anti-bacterial activity;  GC-MS;  MRS
        胆木Nauclea officinalis Pierre ex Pitard别名乌檀、熊胆树、树黄柏，为茜草科乌檀属乔木，在全国分布于海南、广东、广西、云南等省区。药用枝条、树干和根。全年可采，性味苦，寒，具有清热泻火之功效，用于外感发热、急性扁桃体炎、咽喉炎、支气管炎、肺炎、急性黄疸、胃痛等［1］。胆木在海南有大面积种植，目前市场上出售的有“胆木注射液”和“胆木浸膏片”中药产品，临床用于治疗急性扁桃腺炎，急性咽喉炎，急性结膜炎及上呼吸道感染，疗效显著，药用部位是胆木的茎皮。为进一步开发利用胆木其他药用部位，本文采取了水蒸气蒸馏法提取胆木叶和胆木茎的挥发性成分并进行了抑菌活性的研究，用GC-MS技术测定了胆木叶和胆木茎中的挥发性成分，为胆木叶的开发应用提供科学依据。
       1  材料与仪器
       1.1  材料  
       胆木叶、胆木茎,均由海南金光药业提供。
       1.2  仪器与设备美国安捷伦公司HP6890/HP5973MS联用仪。采用NITS98标准质谱图库进行检索。
       2  方法
       2.1  GC-MS条件
       2.1.1  色谱条件HP-FFAP 30 m×0.25 mm i.d×0.25 μm弹性毛细管柱；柱温采用程序升温：从60℃开始，以4℃/min升到120℃，再以6℃/min升温到250℃，保持5 min；气化室温度250℃；柱前压为63 kPa；载气为高纯氦气（99.999%）， 流量为1.0 ml/min；进样量为0.4 μl；分流比为50∶1。
       2.1.2  质谱条件离子源为电子轰击源（EI）；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；电子能量70 eV；电子倍增器电压1 382V；接口温度270℃；溶剂延迟时间3 min；扫描范围40～550 u。
       2.2  胆木叶和茎挥发性成分制备各称取100 g自然干燥粉碎的胆木叶和茎分别置于1 000 ml长颈圆底烧瓶中,加适量水浸泡,采用水蒸气蒸馏法将挥发性成分蒸馏出来,再用乙醚萃取，乙醚萃取液用无水硫酸钠脱水，自然挥干乙醚，分别得到挥发性成分48 mg和96 mg,做GC-MS分析。
       2.3  菌株与培养基耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin siltant staphylococcus, MRS)由中国热带农业科学院热带生物技术研究所提供，大肠杆菌、普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌由海南大学公共实验中心微生物实验室提供。均采用牛肉膏蛋白胨培养基［2］：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂20 g，定容至1L，pH 7.0～7.2，1×105Pa灭菌20min。
       2.4  抑菌活性的测定［3］将胆木叶和茎挥发性成分配成浓度为100 mg/ml的样品溶液，选用直径为5.5 mm的灭菌滤纸片，滤纸片分别加样品溶液20 μl，每个梯度重复3次，待溶剂挥干后，将已加样的滤纸片贴于已涂供试菌悬液0.1 ml (菌液浓度105～107cfu/ml)的琼脂培养基上，放置15 min后，再放入培养箱37℃无光照培养, 24 h后测其抑菌圈大小。MRS以硫酸卡那霉素作为阳性对照,其它菌株以硫酸庆大霉素为对照。
       3  结果
       3.1  GC-MS分析结果 
       胆木叶挥发性成分共分离出18个峰，其中鉴定了14种化学成分，占胆木叶挥发性成分总量的95.75%；胆木茎挥发性成分共分离出14个峰，其中鉴定了10种化学成分，占胆木茎挥发性成分总量的88.31% ，采用不做校正的峰面积归一化法得出各组分的相对含量，各色谱峰相应的质谱图检索采用NITS98标准质谱图库进行检索。结果见表1。
        从表1可看出，胆木叶挥发性主要成分为烷烃、烷酸、烯烃、烯酸、酮和酯类,含量最高的为烷酸46.30%：十六烷酸41.02%和十八烷酸5.28%；胆木茎挥发性主要成分为烷酸、烯酸、烷烃、酸酐、酯和酮类，含量最高的为烯酸48.94%：(9E)-9-十六烯酸45.12%和9,12-十八烷二烯酸(Z,Z)3.82%。表1  胆木叶和茎挥发性成分GC-MS分析结果（略）
       胆木叶和茎中共有5种相同的成分：5,6,7,7a-四氢-4,4,7a-三甲基-2(4H)苯并呋喃酮、十六烷酸、十八烷酸、(9E)-9-十六烯酸、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯，其中胆木叶中十六烷酸含量最高，胆木茎中十六烯酸含量最高。在胆木茎中无烯酸成分，胆木叶中无酸酐成分。据文献报道，单不饱和脂肪酸具有降血糖、调节血脂、降低胆固醇等作用，并对心脏具有保护作用［4］。
       3.2  活性测定结果
       以滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗菌活性,结果表明胆木叶和茎挥发性成分对MRS有很强的抑制作用，对大肠杆菌有较强的抑菌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌有一定的抑菌活性。结果见表2。表2  胆木叶和茎挥发性成分的抑菌圈直径（略）
       4  讨论
        长期以来，由于抗生素的广泛使用甚至滥用,导致耐甲氧西林金黄色葡萄球(MRS) 等耐药菌株的出现。MRS对临床上广泛应用的多种抗生素产生耐药性,致感染治疗困难,病死率高,已成为全世界范围内抗感染中的难题［5］。胆木叶和茎挥发性成分具有很好的抑制MRS的作用，为胆木的开发利用提供了新的科学依据。
       【参考文献】
         　　［1］邓世明.海南常用中草药名录［M］.北京：中国科学技术出版社，2006：149.
       
       ［2］沈 萍，范秀容，李广武.微生物学实验，第3版［M］.北京：高等教育出版社, 1999：214.
       
       ［3］徐叔云,卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社, 2003：651.
       
       ［4］张伟敏，钟 耕，王 炜.单不饱和脂肪酸营养及其生理功能研究概况［J］. 粮食与油脂，2005，3：13.
       
       ［5］Georgopapadakou N. Infectious disease 2001：drug resistance，new drugs［J］.Drug Resistance Updates，2002，5 (5)：181.