文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的研究黄芪、丹参注射液及复方芪参注射液抗CCl4致小鼠肝损伤作用。方法采用四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型，从整体水平上观察复方芪参注射液抗CCl4致小鼠肝损伤作用。结果复方芪参注射液及阳性药组(市售丹参注射液、黄芪注射液及两者配伍)对CCl4致小鼠急性肝损伤无显著保护作用。结论黄芪、丹参注射液对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用，值得商榷。
       【关键词】  丹参　黄芪　急性肝损伤
       Discussion about the Protective Effect of Huangqi and Danshen Injection on CCl4 -induced Liver Injury in Mice
       WANG Yufeng, SHAO Shengnan, YUAN Jing, HUANG Xuewu
       1.Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Hefei 230038, China; 2.Hefei University of Technology, Hefei 230009, China
       Abstract：Objective To investigate the protective effect of compound Huangqi and Danshen injection on CCl4 -induced  liver injury in mice. MethodsOverall observation on the protective effect of compound Huangqi and Danshen injection on liver injury was made by establishing CCl4-induced acute liver injury model in mice. ResultsCompound Huangqi and Danshen injection and positive control group had no significant protective effect against CCl4-induced acute liver injury.ConclusionIt is still questionable to use Huangqi and Danshen injection as anti-hepatic injury agent in the CCl4-induced acute liver injury model in mice.
       Key words：Astragalus membranaceus;  Salvia miltiorrhiza;  Acute liver injury
       
       黄芪与丹参是肝病治疗中较常使用的中药。临床上多用丹参和黄芪注射液联用治疗慢性肝病，取得良好疗效［1］。据文献报道黄芪注射液和丹参水溶性成分(丹参总酚酸)对CCl4致小鼠急性肝损伤均有保护作用［2～4］，黄芪总苷对四氯化碳致小鼠肝损伤也有明显的保护作用［5］。张树剑等［6］报道穴位注射丹参注射液配伍黄芪注射液对四氯化碳致小鼠肝损伤具有清除自由基、对抗脂质过氧化的作用。但笔者在采用CCl4致小鼠急性肝损伤模型，以市售丹参注射液、黄芪注射液及两者配伍作为阳性对照药，研究复方芪参注射液抗CCl4致小鼠肝损伤作用的过程中发现，黄芪和丹参注射液对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用，值得商榷。现将实验结果报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  动物18～22 g成年昆明种小鼠，雌雄兼用，安徽医科大学实验动物中心提供(动物合格证号: 皖医实动字第001号)。
       1.2  药品与仪器丹参注射液（正大青春宝药业有限公司生产；规格：1.5 g原药材/ml；批号：0505051）；黄芪注射液（成都地奥九泓制药厂生产；规格：2 g原药材/ml；批号：0601026）。UV757CRT紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。黄芪总皂苷(自制；总苷含量为69.9%，黄芪甲苷含量为13.1%)；丹参总酚酸(自制；总酚酸含量为77.7%，丹酚酸B含量为38.4%)；复方芪参注射液(由黄芪总皂苷和丹参总酚酸组成，剂量见“2.1”项下)。
       2  方法
       2.1  分组与给药小鼠120只，雌雄各半，随机分为8组，每组15只。①高剂量组黄芪：总皂苷32 mg·kg-1·d-1＋丹参总酚酸80 mg·kg-1·d-1(给药剂量相当于总药材量：黄芪16 g·kg-1·d-1＋丹参8 g·kg-1·d-1)；②中剂量组：黄芪总皂苷16 mg·kg-1·d-1＋丹参总酚酸40 mg·kg-1·d-1；③低剂量组：黄芪总皂苷8 mg·kg-1·d-1＋丹参总酚酸20 mg·kg-1·d-1；④阳性药对照组：市售丹参注射液组（简称丹参组；给药剂量相当于丹参总药材量：15 g·kg-1·d-1）、市售黄芪注射液组（简称黄芪组；给药剂量相当于黄芪总药材量：20g·kg-1·d-1）和市售丹参注射液与市售黄芪注射液按1∶1比例混合(给药剂量相当于总药材量：黄芪10 g·kg-1·d-1＋丹参7.5 g·kg-1·d-1)组（简称复方组）；（5）正常组和CCl4模型组：等体积生理盐水。按10 ml·kg-1腹腔注射（ip）给药或生理盐水。给药1次，连续7 d。给药第7天称每只小鼠体质量，除正常组外，每只小鼠ip 含0.15%CCl4的花生油溶液10 ml·kg-1，正常组ip等量的花生油，禁食不禁水过夜。16～24 h后称每只小鼠体重，摘眼球取血，离心分离血清。检测下列指标：①血清谷丙转氨酶（ALT）；②取肝、脾脏称重，计算肝指数和脾指数；③取小鼠肝大叶相同部位，10%甲醛溶液固定，做病理切片（病理组织学检查）。
       2.2  统计分析各组实验数据用±s表示。量反应资料间比较用t检验，等级资料间比较采用Ridit分析法。
       3  结果
       3.1  各组注射液对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT的影响见表1，与正常组比较，CCl4显著升高小鼠血清ALT的水平（P＜0.01），而与CCl4模型组相比，复方芪参注射液3个剂量组及各组阳性药仅略降低血清ALT水平，但无显著性差异(P＞0.05)。
       3.2  各组注射液对CCl4致急性肝损伤小鼠肝指数和脾指数的影响见表2。与正常组比较，CCl4显著升高模型组小鼠的肝指数；与模型组比较，复方芪参注射液3个剂量组及各组阳性药的小鼠肝指数和脾指数未见显著降低。表1  对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT的影响(略)表2  各组注射液对CCl4致急性肝损伤小鼠肝指数和脾指数的影响(略)
       3.3  各组注射液对CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏病理组织学的影响肝脏病理切片染色后观察结果(HE染色图略)表明，正常组肝组织中细胞正常，其余各组均有不同程度的肝细胞损伤和肝细胞再生，其中模型组最严重，高剂量组较轻。除正常组外，各组的间质内均可见不同程度的炎细胞浸润，模型组最严重。病理组织学统计结果(见表3)显示，CCl4可诱导小鼠出现明显的肝细胞损伤、肝细胞再生及间质炎细胞浸润等病理组织学变化。复方芪参注射液的不同剂量组及各组阳性药均略减轻肝细胞损伤和间质炎细胞浸润以及促进肝细胞再生，但无统计学意义。表3  各组注射液对CCl4致小鼠急性肝损伤评分的影响(略)
       4  讨论
          
       丹参注射液主要有效成分是水溶性的丹参总酚酸，黄芪注射液主要有效成分是水溶性的黄芪总皂苷，而复方芪参注射液由水溶性有效部位黄芪总皂苷和丹参总酚酸组成，不含脂溶性有效部位总丹参酮。文献报道黄芪和丹参注射液及其水溶性有效部位（黄芪总皂苷和丹参总酚酸）对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。本实验研究结果表明，复方芪参注射液不同剂量组和各组阳性药未能使CCl4升高的血清ALT水平、小鼠肝指数和脾指数显著降低；病理切片观察结果和病理组织学统计结果表明，除了正常对照组外，模型组，复方参芪不同剂量组及各组阳性药均有一定的肝损伤，且各组的间质内均可见不同程度的炎细胞浸润，其中以模型组最为严重，复方参芪不同剂量组及各组阳性药的症状稍轻，但与模型组相比，并无统计学意义。表明针对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤动物模型而言，黄芪注射液、丹参注射液及复方芪参注射液对急性肝损伤的保护作用并不显著。黄芪注射液和丹参注射液对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用，是否值得商榷? 愿意和大家共同探讨。
       
       笔者认为，出现黄芪和丹参水溶性成分对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤无显著性保护作用这一现象的主要原因可能与肝损伤动物模型及其诱导药物的选择有关。急性CCl4肝损伤动物模型是一种经典的实验性肝损伤模型。CCl4通过其代谢产物三氯甲基自由基(·CC13)的作用，引起肝细胞膜的功能和结构完整性破坏，使膜通透性增加，细胞内容物溢出，最终导致肝细胞变性、死亡。在形态学上主要表现为肝小叶中央坏死和脂肪变性，血清学检查可见转氨酶ALT和AST升高，并能灵敏地反映肝损伤的程度［7］。由于中药及其复方作用广泛、温和，器官或组织的选择性及活性不明显，需长期给药方显药效。尽管黄芪总皂苷和丹参总酚酸具有抗脂质过氧化的作用，但对于CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型而言，在短期内黄芪总皂苷和丹参总酚酸未必能有效地发挥其抗脂质过氧化的作用，因而不能凸显黄芪总苷和丹参总酚酸直接保护肝细胞免受·CCl3损害的作用。因此，有必要采用其它化学药（如对乙酰氨基酚、D-半乳糖胺、甲基亚硝胺、乙醇）诱导小鼠急性肝损伤动物模型，研究黄芪和/或丹参有效部位对急性肝损伤的保护作用［8～10］。或根据中药治疗慢性肝病用药周期长，起效慢，器官选择性差等特点，采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型，研究黄芪和/或丹参有效部位防治CCl4致大鼠肝纤维化的药效学作用［11，12］。
       【参考文献】
         　　［1］周发洋，彭 艳. 黄芪丹参注射液治疗早中期肝纤维化100例［J］.中华实用中西医杂志，2006，19(8):887.
       
       ［2］欧阳雁玲，张明升.黄芪注射液对四氯化碳损伤小鼠肝的保护作用［J］.太原科技，2002，(3):26.
       
       ［3］许艳丽，宋广群，王丽萍.黄芪注射液主要药效学研究［J］.中国实验方剂学杂志，2000，6(6):24.
       
       ［4］吴百灵.丹参对CCl4所致急性肝损伤保护作用的研究［J］.中医药学刊，2002,20(3):363.
       
       ［5］明 亮，张 艳，李卫平，等.黄芪皂苷对小鼠急性肝损伤的保护作用［J］.安徽医科大学学报,1996,31(4):267.
       
       ［6］张树剑，仇裕丰，董自波.足三里穴位注射对小鼠化学性肝损伤模型血清T-SOD及LPO的影响［J］.四川中医,1999,17(8):8.
       
       ［7］徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1346.
       
       ［8］赵丽娟, 李 红, 杨世杰. 黄芪注射液对D-半乳糖胺所致小鼠急性肝损伤的保护作用［J］. 吉林大学学报(医学版), 2003, 29(3):280.
       
       ［9］孙沛毅，张洪泉，孙 云，等. 复方丹参注射液对实验性肝损伤小鼠的保护作用［J］. 南京铁道医学院学报，1997,16(2):93.
       
       ［10］陈 利，孙沛毅. 复方丹参注射液对实验性肝损伤小鼠抗自由基损伤作用［J］.江苏医药，2005,31(12):962.
       
       ［11］黄贤樟，余世锋，汪帼斌. 不同剂量丹参注射液抗肝纤维化的实验研究［J］. 中西医结台肝病杂志，2001,11(4):213.
       
       ［12］周 贤，戴立里，贾丽萍,等. 黄芪注射液对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的防治［J］. 重庆医科大学学报，2005,30(1):50.