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       【摘要】 
       目的研究秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽水煎液对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护机制。方法40只昆明种小鼠完全随机分成4组：空白组、模型组、大叶秦艽水煎液组、麻花秦艽水煎液组。空白组及模型组给予生理盐水灌胃(4 g/kg)，药物组给予相应药物水煎液灌胃(4 g/kg)，连续灌胃7 d后药物组与模型组采用10%四氯化碳花生油溶液(10 ml/kg)腹腔注射造成急性肝损伤模型24 h后采集全部血样，测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量。结果药物组与模型组相比较，ALT与TNF-α水平降低(P<0.05)，而IL-10表达的水平则升高(P<0.05)，而药物组之间比较则没有显著性差异(P>0.05)。结论 秦艽可增强四氯化碳损伤的肝组织中IL-10的表达, IL-10是介导秦艽保肝效应的重要细胞因子。而秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽在这一过程中产生的作用是没有差异的。
       【关键词】  急性肝损伤; 大叶秦艽; 麻花秦艽; 肿瘤坏死因子-α; 白细胞介素-10
       秦艽为龙胆科龙胆属多年生草本植物秦艽(亦称大叶秦艽)Gentiana macrophylla Pal1.、麻花秦艽G. straminea Maxim.、粗茎秦艽G.crassicaulis Duthie ex Burk.和小秦艽G. dahurica Fisch.的干燥根[1]，始载于《神农本草经》,列为中品，味苦、平，具有祛风湿、清湿热、止痹痛之功效。《本草纲目》用单味秦艽来治疗黄疸。药理研究表明，秦艽提取物龙胆苦苷具有抗肝损伤作用[2，3]，近年来许多研究结果提示，肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF-α)和白细胞介素-10(Interleukin，IL-10)的升高可反映出局部和全身感染的存在，TNF-α水平的高低与疾病严重程度呈正相关，而IL-10 则产生抗感染作用[4，5]，因此实验通过观察秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽的水煎液对四氯化碳(CCl4)腹腔注射诱导的小鼠急性肝损伤血清中TNF-α、IL-10表达水平的影响，来探讨秦艽抗肝损伤作用的机制。
       1 材料与方法
       1.1 药物的制备　精密称取干燥的大叶秦艽和麻花秦艽各100 g，分别加水1 000 ml浸泡30 min，然后在电热套上煮沸，文火煎煮30 min，把煎煮液过滤，在药渣里加水1 000 ml，再用同样的方法煎煮2遍，把3次的滤液混合，于旋转蒸发器中蒸发浓缩至1 g生药/ml，4℃冰箱保存。药物经青海大学医学院中医教研室魏全嘉教授鉴定。
       1.2 动物40只普通级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(22.60±1.73)g，由青海省实验动物中心提供。
       1.3 观测指标及试剂盒观测指标为丙氨酸氨基转移酶(ALT)，TNF-α，IL-10。试剂盒由上海沪尚生物有限公司提供，编号分别为E0207m，E0133m，E0056m。
       1.4 仪器MH-2000型电子调温电热套、RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)、TGL-16G型台式离心机、美国宝特ELX-800酶标仪。
       1.5 方法40只昆明种小鼠完全随机分成4组：空白组(10只)、模型组(10只)、大叶秦艽水煎液组(DY组，10只)、麻花秦艽水煎液组(MH组，10只)。空白组及模型组连续给小鼠灌生理盐水7 d(4g/kg)，两个药物组连续给小鼠灌胃7 d(4 g/kg)，灌胃7 d后药物组及模型组采用10% CCl4花生油溶液(10ml/kg)腹腔注射造成急性肝损伤模型24 h后采集血样，在室温放置2 h后以3 000 r/min 离心10 min分离血清，于4℃冰箱保存(模型组造模后死亡1只)。按照试剂盒说明测定小鼠血清TNF-α、IL-10、ALT的含量。
       1.6 统计方法采用统计软件SPSS 17.0进行数据处理。结果用±s表示，显著性检验用单因素方差分析，两组间比较采用LSD-t检验。检验水准α=0.05。
       2 结果
       2.1 秦艽水煎液对CCl4所致小鼠肝损伤血清ALT的影响结果见表1。从表1可见模型组小鼠血清ALT明显升高(与空白组比较P<0.05)。DY组和MH组均能使血清ALT表达水平下降。DY组与MH组与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，DY组、MH组比较没有显著性差异(P>0.05)。表1 秦艽水煎液对CCl4所致小鼠肝损伤血清ALT的影响与空白组比较，△P<0.05;与模型组比较，▲P<0.05
       2.2 秦艽水煎液对CCl4所致小鼠肝损伤血清TNF-α，IL-10的影响结果见表2。 从表2可见模型组小鼠血清TNF-α升高明显，DY组及MH组血清TNF-α表达水平下降,而血清IL-10表达水平在模型组有所上调，在DY组及MH组中表达水平上调明显。DY组、MH组与模型组比较TNF-α，IL-10均具有显著性差异(P<0.05)，DY组与MH组比较则没有显著性差异(P>0.05)。表2 秦艽水煎液对CCl4所致小鼠肝损伤血清TNF-α、IL-10的影响与空白组比较，△P<0.05;与模型组比较，▲P<0.05
       3 讨论
       CCl4进入动物体内后，可直接进入肝细胞，破坏线粒体功能和结构，造成酶的破坏及释出障碍，最终使肝细胞发生变性、坏死，造成炎症细胞因子释放增加[6]，在炎症过程中某些炎症细胞因子，如TNF-α，IL-6等在炎症过程中产生和发挥关键作用，它们是重要的信号分子，对入侵的病原体进行发动和调节一定范围的免疫反应，这些炎症细胞因子中，TNF-α在炎症性疾病发病机制中被强调为主要介导者，在安慰剂对照临床试验中，TNF-α拮抗剂被证明在治疗某些炎症性疾病非常有效[7]。IL-10是由包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞以及包括肝脏在内的许多器官产生的细胞因子合成抑制因子，其主要作用为抑制炎症反应和抑制多种基因转录，是一个关键的肝脏保护性细胞因子[8]。
       中医认为秦艽具有祛风湿、清湿热、止痹痛、退黄疸的功效，秦艽提取物龙胆苦苷保肝作用机制可能与通过抑制免疫细胞产生TNF-α和IL-6等炎症细胞因子有关[7]，而IL-10具有抑制巨噬细胞等产生TNF-α、IL-6等炎症因子的作用[9]，基于上述情况，我们观察了秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽水煎液对CCl4造成的小鼠急性肝损伤血清中TNF-α。IL-10表达水平的影响，结果表明秦艽可增强CCl4损伤的肝组织中IL-10的表达, IL-10是介导秦艽保肝效应的重要细胞因子，而秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽在这一过程中产生的作用是没有差异的。
       【参考文献】
         　　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005：190.
       
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       [4] Stoycheva M,Murdjeva M.Serum levels of interferon-gamma, interleukin-12,tumour necrosis factor-alpha,and interleukin-10,and bacterial clearance in patients with gastroenteric Salmonella infection[J]. Scand J Infect Dis,2005,37(1):11.
       
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