文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的从凤仙花中提取山萘酚。方法用不同方法和不同溶剂对凤仙花中山萘酚的进行提取，对得到的醋酸乙酯提取物，采用葡聚糖凝胶LH-20进行分离，以甲醇为溶剂进行重结晶，利用HPLC进行检测。结果用醋酸乙酯溶剂提取凤仙花中山萘酚是可行的，山萘酚含量相对较高。结论凤仙花可作为提取山萘酚的优选原料。
       【关键词】  凤仙花; 山萘酚; 提取; 分离; 纯化
       凤仙花为凤仙花属植物凤仙花Impatiens balsamina L.，凤仙花科，又称为金凤花(《世医得效方》)，灯盏花(《滇南本草》)，好女儿红(《本草纲目》) ，指甲桃花(《山东中药》)，金童花(《江西民间草药》)，竹盏花《药材学》[1]。凤仙花对气候土壤要求不严，全国各省区均有栽培。凤仙花为一年生草本植物，高可达80cm左右，茎直立，圆柱行，上部分枝，下部的节常膨大，表面有短柔毛或近乎光滑，常呈紫红色。花大，腋生单朵或数朵;花色颇多，如白色，粉红色，紫色，大红，洋红，雪青等;花型丰富，有单瓣型,花型较小，长势旺盛。蔷薇型，朵较大，重瓣，宛如盛开的蔷薇，长势中常。山茶型，花瓣重叠匀整，形如父瓣类山茶模样，长势较强。顶头花新型，花大在枝顶，似山茶花样，腋花似蔷薇样，花朵浮现株丛表面，长势较弱。凤仙花性健壮，生长迅速。并且凤仙花中含多种具有药用价值的成分，山萘酚就是其中一种。
       山萘酚原本来源于山萘Kaempferia galanga L.的根茎;百蕊草Thesium chinense Turcz.的全草;槐树Sophora japonica L.的果实。
       化学名：4H-1-benzopyran-4-one,3,5,7-trihydroxy-2-(4′-hydroxy-phenyl) [2]，结构式见图1。
       图1 山萘酚化学结构式
       本实验拟从资源丰富的凤仙花中提取山萘酚，找出成本低廉，工艺简便，能得到纯净山萘酚的工艺路线。
       1 仪器与材料
       恒温水浴锅B-220(浙江舟山市定海区海源仪器厂);旋转蒸发器RE52CS(浙江舟山市定海区海源仪器厂); SHZ-CD型循环水真空泵(浙江舟山市定海区海源仪器厂); ZF-I型四用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂); LC-10ADVP型高压液相色谱仪、CLASS-VP工作站、SPD-M10AVP二极阵列检测器(日本岛津公司);电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);硅胶板(青岛美高集团有限公司); 凤仙花红色花瓣(采于新疆伊犁,自然晾干揉碎储存于密闭的广口瓶中备用),葡聚糖凝胶LH-20用甲醇浸泡后备用。山萘酚标准品，购于中国药品生物制品鉴定所，甲醇(色谱纯)、甲醇(分析纯)、石油醚、醋酸乙酯均为天津市福晨化学试剂厂试剂。
       2 方法
       2.1 提取提取中基于课题组的前期工作[3，4]，对烘干的凤仙花用不同的溶剂进行提取或是萃取。溶剂包括有甲醇、醋酸乙酯、石油醚、环己烷、乙醇、丙酮和正丁纯。对所得的甲醇提取液(H0)、石油醚提取液(H1)、环己烷提取液(H2)、醋酸乙酯提取液(H3)、丙酮提取液(H4)、乙醇提取液(H5)、石油醚萃取液(H6)、醋酸乙酯萃取液(H7)、正丁醇萃取液(H8)进行高效液相色谱检测，结果见图2～3。所得实验结果在经过分析和比较后，发现在醋酸乙酯提取液和醋酸乙酯萃取液中所含山萘酚含量较高。因此，本实验就在此基础上选择醋酸乙酯作为溶剂对凤仙花进行山萘酚的提取、分离和纯化。
       a为标准对照液;b：H0;c:H3,d:H1
       图2 样品色谱图
       a为标准对照液; e：H8;f:H7;g:H6
       图3 样品色谱图
       用索氏提取器进行提取：称取10g干燥的凤仙花碎粉，用滤纸扎成包裹，成圆状，放入索氏提取器。用石油醚约60ml浸泡用滤纸包裹的凤仙花，滤纸筒的高度不超过虹吸管，石油醚超过纸筒，但也不超过虹吸管，浸泡一夜，于第2日在恒温水浴锅中加热回流至基本无色。停止加热，在旋转蒸发仪上浓缩提取液，并晾干凤仙花包裹。用醋酸乙酯浸泡上一步中晾干的凤仙花包裹，浸泡一夜, 于第2日加热回流至回流液基本无色，将所获得回流液转移入梨形瓶，进行浓缩。浓缩后将其全部溶解转移入小瓶，将小瓶用保鲜膜封口，并戳几个小洞，使溶剂慢慢挥干，以备下一步使用。
       2.2 分离与纯化采用葡聚糖凝胶LH-20分离，首先装柱：把凝胶颗粒放在甲醇溶液中浸泡，用相对多的甲醇使其充分膨胀，让其成糊浆状，沿层析柱内壁，缓缓灌入柱中，同时打开下端活塞，让洗脱液缓缓滴出。注意在装入凝胶之前应预先在层析柱中加入1 cm左右高的甲醇，使其最大可能的在装柱过程中无气泡产生，在灌浆过程中和灌浆完毕都不能让洗脱剂流完、干柱，让柱面上一直保持有一定的液面，使吸附剂自由沉降而填实，并一边用玻璃棒轻轻敲打柱子，尽量使柱子装的紧密而均匀，层析柱一般柱高30 cm，装柱内水体积在100 ml以上，柱直径采用2.5 cm左右。其次，加样：装好的层析床，至少采用3倍于层析床体积的洗脱液平衡，葡聚糖凝胶柱分离常用的溶剂系统有：①醇溶液，如甲醇、乙醇及不同比例的含水醇;②水溶液，如水、碱性水溶液(0.1mol/L NaOH)、盐溶液(0.5 mol/L NaCl)[5]。本实验选甲醇为平衡液，待平衡液流定，液面在床表面上约1～2 cm处，沿柱壁周围将样品加入。加完后打开出口阀，使样品完全渗入层析床，再关闭出口，用少量洗脱液如上操作，将管壁残留的样品洗下，再打开出口，至上面少量样品都渗入柱内，关闭出口，柱床上面露出一薄层脱脂棉，以保护柱床表面。然后慢慢加入洗脱液，开始洗脱, 20 ml一个试管，并依次浓缩各提取液，转入准备好的各小瓶中，依次标号待用。
       如凝胶有微量污染，可用0.5 mol/L NaOH(内含0.5 mol/L NaCl)处理。经多次使用后，凝胶色泽改变，流速减低，表面有污染物等情况则需再生。常用温热(50℃左右)的0.5 mol/L NaOH和 0.5 mol/L NaCl混合液浸泡，再用水洗净。经常使用的凝胶是以湿态保存。加入0.02%的叠氮钠(NaN3)，可保存一年不致发霉(本实验中取29.22g NaCl 和20.00g NaOH配置0.5 mol/L NaOH和0.5 mol/L NaCl混合液200ml，加入到凝胶中，并把此混合物在50℃的恒温水浴下浸泡过夜，于次日用蒸馏水冲洗，减压抽滤，至pH试纸显中性，然后用甲醇浸泡待用)。
       2.3 薄层色谱检测(TLC)把上述样品与山萘酚对照品对比进行薄层色谱检测。先在离薄板一端约1 cm处，用铅笔轻轻画一条线作为点样线，用毛细管蘸取被测液按一定顺序点在硅胶板上，点间距离均等，每个样用毛细管少量、多次、反复地取后点在薄板上，然后把板放入装有甲醇溶液的层析缸中，进行跑板，结果如图3所示。对于比移值一致，现象一致的点，把其所属的各小瓶中溶液进行合并，然后用甲醇进行重结晶，得山萘酚黄色针晶，熔点276～278℃。
       图4 TLC跟踪检测图
       2.4 高效液相检测[5]高效液相色谱仪所设置条件为:压力：10～400kgf/cm2，显示精度;±2%或5 kgf/cm2，流速：0.001～5ml/min，精度：±2%或2 ml/min操作温度，4～35℃。测山萘酚时所设置具体条件为：流动相：水与甲醇之比为1∶1;波长：360 nm;流速：1.0 ml/min
       取分离前的凤仙花的醋酸乙酯的提取液的浓缩物样品少量和经葡聚糖凝胶LH-20分离所得的样品分别进行高效液相检测，所得谱图见图5～6。
       图5 分离前样品的高效液相色谱图
       图6 分离后样品的高效液相色谱图
       3 结果
       由实验可知，用醋酸乙酯作为溶剂提取山萘酚是可行的，利用葡聚糖凝胶LH-20的分离能使凤仙花中可能含有的山萘酚糖苷等杂质预先除去，从而得到纯净的山萘酚。
       4 结论
       凤仙花作为原料资源广泛，山萘酚含量相对较高，且获得山萘酚的提取、分离和纯化工艺方便、可行，因此凤仙花可作为提取山萘酚的优选原料。
       【参考文献】
         　[1] 江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海：上海科学技术出版社，1977：486.
       
       [2] Lin Hua,Zhaofeng Peng. Lian Sai Chia, et al. Separation of kaempferols in Impatiens balsamina flowers by capillary electrophoresis with electrochemicaldection[J]. J.chromatography A. 2001, 909:297.
       
       [3] 胡喜兰, 朱 慧,刘纯瑞,等.凤仙花的化学成分研究[J].中成药，2003,25(10):833.
       
       [4] 胡喜兰, 韩照祥,刘玉芬,等. 凤仙花不同提取物中山萘酚的测定[J].分析试验室，2007,26(5):33.
       
       [5] 谭仁祥.植物成分分析[M].北京：科学出版社，2002：494.