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红参膨化炮制实验研究
作者:张 瑛1,张翠英2,王盛民2*    
作者单位:(1.陕西中医学院,陕西 咸阳 712046; 2.西南交通大学生命科学与工程学院,四川 成都 610031)

《时珍国医国药》 2010年 第7期

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       【摘要】 
       目的考察膨化炮制对红参有效成分人参皂苷的影响。方法运用膨化技术对红参进行膨化炮制,并与传统炮制品进行外观性状、TLC鉴别、含量测定比对实验。结果在相同提取次数下,膨化品采用单次分别提取10,20,30 min的提取方法,生品采用单次提取2 h的提取方法,实验中浸提的人参皂苷量之间无显著性差异(P>0.05)。结论红参膨化炮制后,可显著缩短提取时间,提高其浸提效率。
       【关键词】  红参; 膨化炮制; 人参皂苷
       红参性温,味甘而微苦,气浓香,具有大补元气、回阳固脱功效。阳气不足、冬季畏寒、四肢寒冷、肺虚咳嗽、脾虚久泻久痢、老人早衰、妇女内分泌紊乱者宜选用之[1]。红参含多种成分,主要活性成分为人参皂苷。红参质地致密、坚硬,因此有效成分不易浸提。为此,笔者运用单螺杆挤压膨化机对红参进行膨化处理,继而采用乙醇回流法提取人参皂苷,对红参膨化前后人参皂苷进行了含量比较[2~4]。现报道如下。
       1 材料
       1.1 炮制品及制备红参生品,购自成都市荷花池中药材批发市场,经王盛民鉴定为五加科人参属植物Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根;红参膨化品,取红参,将其切片,粉碎,过1号筛(8~10目),启动单螺杆挤压膨化机,用大米预热,有成型的膨化大米出来后,改用红参,除去大米-红参交接的膨化部分,收集红参膨化饮片,备用。
       1.2 仪器PH-42单螺杆挤压膨化机;旋转蒸发器RE-52,上海亚荣生化仪器厂;DK-S26型电热恒温水浴锅;KQ-100型超声波清洗器;日本岛津LC-20AHPLC仪;电子分析天平(德国,赛多利斯sartorius,型号:BS224S)。
       1.3 试剂高效液相使用甲醇(色谱纯,天津科密欧化学试剂公司),乙腈(色谱纯,美国Fisher公司),水为超纯水;其他所用试剂均为分析纯。
       1.4 对照品为中国药品生物制品检定所提供(人参皂苷Rg1,批号110703-200424,供含量测定用;人参皂苷Re,批号110754-200421,供含量测定用)。
       2 方法与结果
       2.1 形态比较见图1~2及表1。图1 生品形态 图2 膨化品形态表1 红参膨化前后性状特征
       2.2 提取工艺(乙醇回流法)将红参生品和膨化品粉碎,过40目筛,分别取10.0 g,加8倍量70%乙醇,水浴回流提取,温度为85℃,合并提取液,回收乙醇,用10倍量蒸馏水溶解,用少量蒸馏水洗涤蒸馏瓶,再用乙醚脱脂2次(60,30 ml),合并到分液漏斗中,用水饱和正丁醇萃取3次(60,40,30 ml),合并正丁醇萃取液。加入约1/2量的蒸馏水减压浓缩至干,残渣用甲醇溶解,定容至5 ml,作为供试品溶液,待用[5,6]。膨化前后提取时间及次数见表2。表2 红参膨化前后提取时间及提取次数
       2.3 TLC鉴别取人参皂苷标准品,称量人参皂苷Rg15.03 mg,人参皂苷Re5.00 mg,用甲醇溶解,分别定容到5 ml容量瓶中,作为标准品溶液。分别吸取提取次数为3次的4个供试品溶液,并与标准品溶液点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶正丁醇∶甲醇∶水(13∶10∶10∶8)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰[7]。结果见图3。1.Rg1 2.Re 3.2h×3次(生品)4.10min×3次 5.20min×3次 6.30min×3次图3 红参TLC图谱
       2.4 人参皂苷的含量测定
       2.4.1 色谱条件色谱柱为Hypersil ODS柱,规格4.0 mm×200 mm,类型C18 5 μm,大连中汇达科学仪器公司;流动相为乙腈-0.05%磷酸(体积比19.7∶80.3);柱温30℃;检测波长203 nm;流速1.0 ml∕min。
       2.4.2 标准曲线精密称取人参皂苷Rg1对照品7.90 mg,人参皂苷Re对照品5.90 mg,置5 ml容量瓶中,加甲醇使溶解,并稀释至刻度,摇匀,待用(每毫升混合液含人参皂苷Rg11.58 mg∕ml,人参皂苷Re1.18 mg/ml)。精密吸取混合对照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 ml注入液相色谱仪进行测定,测得各峰面积结果见图4。以人参皂苷Rg1对照品溶液的浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程为Y=3.359 3×106X-90 780,r=0.999 9;以人参皂苷Re对照品溶液的浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程为Y=3.321 4×106X-65 982,r=0.9999。表明人参皂苷Rg1在0.158~1.580 mg/ml范围内线性关系良好;人参皂苷Re在0.118~1.180 mg/ml范围内线性良好。
       2.4.3 供试品溶液分别吸取“2.2”提取工艺中的供试品溶液各1 ml,加甲醇定容至5 ml,经0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为人参皂苷含量测定用的供试品溶液。
       2.4.4 含量测定 取“2.4.3”项下供试品溶液,进行含量测定。测定结果见表3及图5~6。表3 红参皂苷含量测定结果
       2.5 结果分析 预实验结果表明,红参在乙醇回流提取条件下,采用2 h×3次提取法,可取得较好的提取效果。在此基础上,本实验拟采取对红参膨化品提取10 min×3次,20 min×3次,30 min×3次,并对其中每次的实验结果进行了含量测定。运用spss11.5统计软件,对所得的数据进行单因素完全随机设计的方差分析。结果表明:① 在提取次数相同的情况下,膨化品采用单次分别提取10,20,30 min的提取方法,生品单次提取2h的提取方法,实验中浸提的人参皂苷量之间(指人参皂苷Rg1和Re的总量)无显著性差异(P>0.05)。② 在提取次数相同的情况下,人参皂苷Rg1的提取量间无显著性差异(P>0.05);人参皂苷Re提取量之间亦无显著性差异(P>0.05)。③ 在单次提取时间相同的情况下,提取1次所得的人参皂苷量与3次比较,具有显著性差异(P< 0.05);其中提取1次所得的人参皂苷Rg1,Re含量分别和3次比较,亦均具有显著性差异(P<0.05)。图4 对照品图谱图5 生品图谱图6 膨化品图谱
       3 讨论
       膨化过程是中药在膨化机中受到挤压、剪切、摩擦等作用,当中药从膨化机内通过出料口的环型间隙时,高温、高压突然释放,水分闪蒸,热量挥发,中药被膨化成多孔疏松的产品。因此中药经膨化处理后,细胞壁破碎,有效成分更易溶解和释放出来,显著缩短了提取时间。
       由于膨化过程是瞬间的高温高压,因此对中药的有效成分影响较小。在红参的膨化实验中,我们可以看出膨化炮制对人参皂苷Rg1,Re均无影响。
       红参质地坚硬,直接采用煎煮法、温浸法、乙醇回流法提取人参皂苷都较费时,而且煎煮法温度较高,煎煮时间过长,对有效成分破坏较大[8]。而红参膨化炮制后,比表面积增加,孔隙率增大,不需煎煮,用热水浸泡即可服用,简单易行,且携带亦方便。
       【参考文献】
           [1] 刘 郁,刘连新.人参功效再认识[J].时珍国医国药,2006,17(2):289.
       
       [2] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2000.
       
       [3] 周立艳,梁生旺,冯素香,等.优肝宁胶囊中人参皂苷Rg1、Re的含量测定[J].广东药学院学报,2006,22(2):146.
       
       [4] 曹泰山,王 丹.人参皂苷Rg1与人参皂苷Re含量测定方法的研究[J].时珍国医国药,2005,16(8):739.
       
       [5] 张 玲,单卫华,梁瑞雪,等.人参提取工艺研究[J].时珍国医国药,2000,11(9):777.
       
       [6] 张 晶,陈全成,弓晓杰,等.不同提取方法对人参皂苷提取率的影响[J].吉林农业大学学报,2003,25(1):71.
       
       [7] 周 漩,冯毅凡,郭晓玲.主成分分析法用于人参皂苷薄层色谱分离的研究[J].广东药学院学报,2003,19(2):101.
       
       [8] 张崇禧,郑友兰,张春红,等.不同方法提取人参总皂苷工艺的优化研究[J].人参研究,2003,10(4):5.

经典中医古籍

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穴位数据库(附图片)