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       【摘要】 
       目的观察果王素对 D -半乳糖 (D- gal)致衰老模型小鼠学习记忆能力的影响。方法10%D-半乳糖皮下注射6周建立衰老小鼠模型，同时灌胃给予果王素，正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。通过跳台实验和Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力，同时检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶 (SOD)活力以及丙二醛 (MDA)含量。结果与正常对照组相比，模型组小鼠学习记忆能力明显降低(P<0.01)，灌胃给予果王素后，小鼠上述变化明显改善(P<0.01或P<0.05)。结论果王素可改善D-gal衰老模型小鼠的学习记忆能力，其机制可能与果王素具有抗氧化能力有关。
       【关键词】  果王素; D-半乳糖; 学习记忆
       果王素(即猕猴桃果仁油脂肪酸)为猕猴桃果仁经临界CO2萃取法提取的果仁油，主要成分为α亚麻酸，含有一定量的维生素E及微量元素硒等物质，具有很高的药用和保健价值[1]，猕猴桃籽油具有抗氧化作用[2]和延缓衰老的作用而有关果王素对D-乳糖所致的学习记忆障碍是否有改善作用，目前还未见报道。本实验采用D-半乳糖所致衰老小鼠模型，研究果王素对衰老小鼠学习记忆的影响，旨在筛选对学习、记忆障碍有改善作用的有效物质提供实验依据。
       1 材料与仪器
       1.1 药品果王素由吉首大学提供，为黄色油性液体，浓度60 %。
       1.2 动物昆明种2月龄清洁级小鼠40只，雌雄各半，体质量(20±2) g ，由吉首大学动物中心提供。
       1.3 试剂D - 半乳糖，购自sigma公司，用生理盐水配成100 g/L的浓度。SOD、MDA试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
       1.4 仪器UV-3100紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)。
       2 方法
       2.1 动物分组随机分为4组(空白组、 模型组、 果王素高、低剂量组)，每组 10 只。
       2.2 动物模型制备[2]模型组、果王素高、低两个剂量组,每日颈背部皮下注射10%D-半乳糖0. 0125L/kg，持续6周，空白组注射同剂量的生理盐水。从第1天开始，果王素高、低两个剂量组，分别按0.05，0.2g/ kg·d的剂量灌胃进行实验干预，模型组和空白组也灌胃等量的生理盐水。
       2.3 跳台实验各组小鼠处理6周后，将小鼠置于跳台仪中，适应环境3 min，然后底部铜栅通以36 V交流电，记录动物受到电击后跳上跳台的反应时间和5 min内受电击的次数(错误次数)，作为学习成绩。24 h后将小鼠放入跳台仪中适应3 min，再将其直接放于跳台上，记录其第1次跳下平台的潜伏期和3 min内受电击的次数(错误次数)，作为记忆成绩。
       2.4 Morris水迷宫实验采用改良的Morris水迷宫实验，参考聂荣庆等[4]的方法，水迷宫为圆形水槽，直径60 cm，高17 cm，水深11 cm，测试过程中室温保持在18～22℃。在槽壁上等距离地标记4个点分别为N，E，S，W，这4个点作为实验起始点。在NW象限中间固定位置处放一透明玻璃平台，高9.5 cm，直径6 cm，使其低于水面1.5 cm。在水面覆盖一层大小相似，直径约为1.5 mm的泡沫颗粒屑，使平台不可见。水槽周围有丰富的固定不变的参照物(包括试验者本身)，以供小鼠定位。参考Williams等[5]的方法，训练共历时5 d，分为每天上下午两个时段，每个时段训练四次。训练开始将平台放在NW象限的固定位置处，将小鼠从槽壁四个起始点分别放入水槽中，记录从放入小鼠到小鼠找到平台的时间(逃避潜伏期，escape latency)，4次训练分别从不同的起点放入小鼠，小鼠找到平台后，让小鼠在平台上休息30 s，再进行下一次训练。如小鼠120 s仍找不到平台,则由实验者将小鼠放置于平台上，逃避潜伏期记为120 s，也让小鼠在平台上休息30 s。造模成功后，进行定向航行实验，记录每只小鼠潜伏期的平均值。然后把站台去掉， 记录2 min内小鼠穿越站台位点的次数，记为穿越次数。
       2.5 SOD、MDA检测实验结束后同一部位的脑组织150 mg，吸干水渍后置入液氮保存。测定前称质量，剪取适量心肌组织块,研磨成100 g/L匀浆,低温离心,取上清液,测定上清液中SOD、MDA 含量。SOD测定采用羟胺法，MDA测定采用TBA法。按试剂盒说明书进行操作。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
       2.6 统计学分析利用SPSS 11.50统计软件做统计分析，所有计量资料以 ±s表示，单因素方差分析，组间进行两两比较。
       3 结果
       3.1 果王素对小鼠跳台实验成绩的影响对照组的学习成绩和记忆成绩都好于模型组，数据的差异性具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比，除了低剂量组中的潜伏期数据没有表现出明显差异外，果王素高剂量组和低剂量组的其余结果都差异明显，差异具有统计学意义(P<0.05);学习和记忆成绩都好于模型组。结果见表1 。表1 果王素对小鼠跳台实验成绩的影响
       3.2 果王素对小鼠Morris水迷宫成绩的影响小鼠用 D-gal皮下注射连续6周后模型组，逃避潜伏期延长，与对照组相比有显著性差异(P<0.01);而灌胃给予果王素后，逃避潜伏期缩短，与模型组相比有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。表2 果王素对小鼠Morris水迷宫成绩的影响
       3.3 果王素对小鼠脑组织SOD活性、 MDA含量的影响模型组小鼠脑组织SOD活性降低,MDA 含量升高,与正常对照组有显著性差异(P<0.01) ，果王素灌胃给药后小鼠脑组织中SOD活性升高，MDA 含量降低,与模型组有显著性差异( P<0.01)。表3 果王素对小鼠Morris水迷宫成绩的影响
       4 讨论
       D-半乳糖是公认的造成衰老模型的方法，实验结果表明，给予D-半乳糖后，小鼠学习与记忆能力明显下降，模型组与对照组相比，水迷宫和跳台实验成绩均明显处于劣势，这说明衰老模型复制是成功的。本研究选用跳台实验和水迷宫实验作为学习与记忆能力的评价指标，研究果王素的抗衰老作用。跳台实验主要反映动物的空间位置感和方向感的学习记忆能力，也可反应小鼠的学习能力;而水迷宫实验主要反映动物的记忆能力，从而使实验评价更为全面。通过灌胃给予果王素后，小鼠跳台和水迷宫实验均明显优于模型组，这说明果王素能够改善衰老小鼠的学习和记忆能力，而果蝇的生存试验表明，果王素能显著提高雌性果蝇的最高寿命[2]，从而表现一定的抗衰老作用。
       D-半乳糖属于生理性营养成分，可引起动物痴呆样行为，其发生机制与与氧化应急损伤和自由基的毒性有关[6]。青年小鼠长期注射D-半乳糖后，其代谢产物半乳糖醇不能进一步代谢而堆积在细胞内,导致细胞肿胀,同时D-半乳糖在体内氧化产生的大量自由基超过机体的清除能力,引发脂质过氧化的链式反应,其分解终产物(如MDA)可与蛋白质、核酸、磷脂等物质结合，破环其结构，影响其功能，引起细胞衰老。猕猴桃营养丰富，其籽油中富含多种不饱和脂肪酸、脂类、黄酮类、酚类、维生素、微量元素硒以及其它生物活性物质，研究表明经口给予老龄小鼠一定剂量的猕猴桃籽油，能明显提高小鼠血清SOD活性[2]，李双杰研究结果显示果王素能增强谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶(CAT) 、铜-锌-超氧化物歧化酶活力[7]，可见果王素能通过某种途径增强机体的抗氧化酶活性，减弱了脂质过氧化反应，有效清除了过量的自由基，使脑组织功能有所恢复，进而表现出对D-半乳糖所致的学习记忆障碍的改善作用。
       【参考文献】
         　[1] 张永康，蒋剑波，陈莉华，等. 猕猴桃果仁油脂肪酸的测定及其利用[J].吉首大学学报(自然科学版) ，2001 ，22 (1) : 37.
       
       [2] 李加兴，陈双平，麻成金，等.猕猴桃籽油保健功能研究[J].食品科学，2005，26(9):511.
       
       [3] 龚国清，徐黻本.小鼠衰老模型研究[J].中国药科大学学报，1991，22(2):101.
       
       [4] 聂荣庆，张 进，胡国柱，等. 脑细胞活性因子对小鼠学习、记忆能力的影响[J].中国行为医学科学，2002，11(5):488.
       
       [5] Williams M T，Morford L L，Wood S L，et al. Developmental D-methamphetamine treatment selectively induces spatial navigation impairments in reference memory in the Morris water maze while sparing working memory[J]. Synapse，2003，48(3): 138.
       
       [6] 杨占军.螺旋藻对衰老小鼠学习、记忆障碍的改善作用[J].食品科学，2009，30(7):236.
       
       [7] 陶辉宇，谭小进，李 丽，等. 猕猴桃果王素对大鼠阿霉素心肌损伤的保护作用及其机制[J].临床心血管病杂志，2006，22(9):550.