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       【摘要】 
       目的优选提取降香中总黄酮的最佳工艺。方法采用正交实验设计，以总黄酮提取量为指标，对降香总黄酮提取条件进行优选。结果最佳提取工艺为10倍量70%乙醇在90℃提取3次，1.5h/次，测得总黄酮平均提取量为92.13mg，平均含量为4.61%。结论该提取工艺条件简单、稳定、提取效率高。
       【关键词】  降香总黄酮; 正交实验; 提取方法
       中药降香是豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen的树干和根的干燥心材。降香的功效为行气活血，止痛，止血，用于治疗脘腹疼痛，肝郁胁痛，胸痹刺痛，跌扑损伤，外伤出血[1]。降香的主要成分为挥发油和黄酮类化合物，其中，降香檀药材中总黄酮的含量为2.51%～5.82%[2]。黄酮类化合物具有抗炎、镇痛、抗氧化、中枢神经作用及心血管方面的作用[3]。本课题组对降香进行了系统研究，建立了一个适合降香总黄酮的含量测定方法[4]。本文应用该含量测定方法，以降香总黄酮提取量为考察指标，通过正交设计实验进行工艺优化，对提取总黄酮的条件和影响因素进行了探讨，为降香总黄酮的提取工艺提供了科学依据。
       1 仪器与材料
       1.1 仪器UV-2450紫外可见分光光度仪(SHIMADZU)，电子分析天平(BP211D)，HH-4型恒温水浴锅(江苏省金坛市宏华仪器厂)，RE 52-98型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
       1.2 试剂乙醇(分析纯，汕头市西陇化工厂)，甲醇钠(新制)。
       1.3 药材和对照品降香药材(广州市药材公司中药饮片厂，产地海南)，柚皮素对照品(实验室自制，经UV、1H-NMR鉴定结构，HPLC检测计算，纯度大于98%)。
       2 方法
       2.1 降香总黄酮含量测定方法及工作曲线的确定精密称取柚皮素对照品0.001 43 g，用70%乙醇溶解并定容至50 ml备用。分别精密吸取对照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml于10 ml容量瓶内，准确加入1 ml甲醇钠，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，放置40 min，在410 nm处测定其吸光度。计算得回归方程为Y=3.242 2X-0.019 3，r=0.999 8，线性范围是0.014 3～0.085 9 mg。
       2.2 正交实验设计根据影响总黄酮的提取因素，在预试验的基础上，选取提取时间(A)，提取次数(B)，提取温度(C)，乙醇浓度(D)作为考察因素，每个因素设定3个水平，以总黄酮提取量为考察指标，采用L9(34)表安排正交实验。结果见表1。表1 正交实验因素和水平
       2.3 样品溶液的提取及含量测定将干燥的降香药材粉碎，精密称量2 g/份，按照L9(34)正交实验表的工艺条件加入10倍量乙醇进行回流提取。提取液合并蒸干后用70%乙醇定容至25 ml，取1 ml各提取液稀释至10 ml，再取1 ml稀释液按对照品测定方法测量其吸光度并计算总黄酮提取量。结果见表2。表1 L9(34)正交实验设计和结果
       2.4 方差分析上述实验所用正交表无空白列作对照，所以将离差平方和中最小的项来近似作为误差的估计，用于计算各因子列的F比值[5]，本实验采用“提取时间(因素A)”项作为误差来源项，对表2的总黄酮含量进行方差分析。结果见表3。表3 方差分析
       2.5 最佳提取工艺的验证精密称取3份降香粉末各2 g，按最佳提取工艺条件平行操作，提取液定容至25 ml，按“2.3”项下方法测定吸光度并计算总黄酮提取量和提取率。结果见表4。表4 最佳提取工艺验证
       3 结果
       本实验得出的最佳提取工艺为10倍量70%乙醇在90℃提取3次，1.5 h/次，测得总黄酮平均提取量为92.13 mg，平均含量为4.61%。该提取工艺具有稳定性好、黄酮得率高、操作简单且成本较低的特点。
       4 讨论
       实验先用石油醚索氏提取除去部分脂溶性杂质，再用乙醇提取总黄酮。发现是否使用石油醚脱脂对总黄酮含量测定结果影响不大，故省去石油醚脱脂而直接使用乙醇提取。
       正交实验前考察了乙醇用量对于总黄酮提取量的影响，采用5，8，10，15，20倍量乙醇进行提取，实验结果表明乙醇用量超过10倍以上则总黄酮提取量无显著性差别，故以10倍量乙醇进行提取。
       【参考文献】
         　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社,2005:158.
       
       [2] 肖省娥，林 励.不同来源的降香药材中总黄酮含量测定[J].基层中药杂志,2000,14(6):12.
       
       [3] Zhao Q,Guo J,Zhang Y.Chemical and pharmacological research progress of Chinese drug “JiangXiang”(Lignum Dalbergiae Odoriferae)[J].Journal of Chinese pharmaceutical sciences,2000,9(1):1.
       
       [4] 郭丽冰，王 蕾. 降香总黄酮含量测定方法的研究[J].中药材,2008,31(5):68.
       
       [5] 于立芬.数理统计方法[M].上海:上海科学技术出版社,1985: 173.