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       【摘要】 
       目的探讨人脐带间充质干细胞(HDCMCS)外周静脉移植治疗酒精性肝硬化的临床效果。方法10例肝硬化失代偿期患者，采用人脐带干细胞外周静脉移植治疗，移植术后1，2，4，8，12周，观察血清转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB)水平变化，同时观察临床症状的改善情况。结果术后2周，各项肝功能指标改善有显著性差异(P<0.05)，8周、12周改善有极显著性意义(P<0.01)。术后12周，腹水明显减轻8例(80%)，消失2例;乏力好转8例(80%);食欲改善7例(70%)。移植术中和术后未见明显的不良反应。结论HDCMCS体外培养诱导、扩充后外周静脉移植是治疗酒精性失代偿期肝硬化一种安全有效的方法，可以显著改善酒精性失代偿期肝硬化患者肝功能及临床症状。同时提示：人脐带间充质干细胞移植治疗酒精性肝硬化比病毒性肝炎后肝硬化疗效更显著。
       【关键词】  干细胞; 外周静脉; 移植; 酒精性肝硬化
       Feasibility Study on the Transplantation of Human Umbilical Cord Cells via Peripheral Veins in the Patients with Alcoholic Cirrhosis
       WENG Jingbiao，
       WEI Ling，
       RUAN Hailan，
       CHEN Changzhi
       (Hainan General Hospital of Bureau of Agriculture,Haikou 570203，China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the clinical effect of transplantation of human umbilical cord mesenchymalstem stem cells(HUCMSCs) through peripheral veins in treatment of transplantation.
       MethodsTen patients who had alcoholic cirrhosis received translation of HUCMSCs .The levels of serum alanine aminotransferase(ALT)，total bilirubin(TB),prothrombin time(PT) and albumin(ALB) were examined before and after transplantation(1，2，4，8，12 weeks).Simultaneously the improvement of clinic syndrome was also observed after transplantation.
       ResultsSignificant improvement(P<0.05) was found two weeks later.There were significant differences eight weeks and twelve weeks later(P<0.01).Twelve weeks after transplantation ascite was reduced obviously in eight patients (eighty percent) and vanished in two patients.Debility and appetite were improved in eight patients(eighty percent) and seven patients(seventy five percent).No patient developed severe complications and adverse reaction associated with transplantation.
       ConclusionCulture in vitro and extension transplantation of HUCMSCs via peripheral veins is a safe and effective therpy.It can significantly improve the indexes of liver function and clinical symptoms in the patients with alcoholic cirrhosis.It indicated at the same time that it has special effects in the transplantation of HUCMSCs in the patients with alcoholic cirrhosis compare with patients with hepatic cirrhosis after virus hepatitis.
       Key words： Stem cell; Peripheral veinstransplantation; Alcoholic cirrhosis
       酒精性肝硬化近年来发病率有逐渐上升的趋势，仅次于病毒性肝炎后肝硬化。终末期病理改变为肝组织弥漫性纤维化，假小叶和再生结节形成。据国内资料统计，戒酒后CP评分A、B级病情有逆转的可能，CP评分C级逆转的可能性仍有争议。药物治疗效果较差，病死率较高，原位肝移植市有效的方法，但存在供肝短缺，免疫排斥，高额费用及伦理道德等限制了受益者的范围，近年来国内外研究的干细胞移植治疗方法具有光明前景。本研究采用HUCMSCs外周静脉移植治疗酒精性失代偿期肝硬化的方法，以观察移植术后肝功能及临床症状改善情况。
       1 资料与方法
       1.1 一般情况我院自2009-11～2010-02收治10例酒精性肝硬化患者，诊断符合2000年全国传染病及肝病学分会修订的标准，肝炎病毒标志物阴性，排除药物性肝病及其它系统性疾病，其中男9例，女1例，平均年龄(40±11.8)岁，Child-Pugh分级，A级2例，B级2例，C级4例。术前均行B超及CT检查排除肝脏占位性病变。实验室检查包括血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB)。本研究按2005年国务院《医院管理条例》第33条规定[1]，对患者的治疗及风险进行如实告知，术前签治疗同意书。
       1.2 脐带干细胞制备[2]由深圳市北科生物科技有限公司提供的用静脉内膜酶消化法分离培养纯化的hucmscs 30 ml悬液，细胞数量不小于2×107。
       1.3 移植途径及方法[3]静脉途径注干细胞：患者取俯卧位，使用输血器取肘前部较粗血管先用生理盐水建立静脉通道再注入已经复温好细胞袋接入静脉通道，并在穿刺部位覆盖10 cm×10 cm无菌纱布，滴入的时候注意控制滴速，30 ml悬液在10 min左右滴注完干细胞，再滴入生理盐水10ml冲洗管道。
       1.4 术后观察术后1，4，8，12周观察ALT、TB、ALB和PT水平变化，观察术后不良反应及临床症状(乏力、纳差、腹水等)改善情况。
       1.5 统计学处理采用两样本均数的t检验，显著性水准α=0.05或α=0.01。
       2 结果
       2.1 技术成功率及不良反应成功率100%。术中未出现不良反应(发热、过敏反应及其它不适)。
       2.2 肝功能检测结果移植术后肝功能各项指标监测结果见表1。表1 脐带间充质干细胞移植术后肝功能各项指标监测结果　术后1周，其观察指标改善无显著性差异;术后2周，肝功能指标改善有显著性差异(P<0.05);术后8，12周各项肝功能指标改善有极显著性差异(P<0.01)。
       2.3 临床症状改善情况见表2。表2 脐带间充质干细胞移植术后临床症状改善情况移植后1周临床症状出现不同程度好转，术后12周腹水明显减轻8例(80%)，消失2例(20%);，乏力好转占80%(8/10)。食欲改善者占70%(7/20)。
       3 讨论
       酒精性失代偿期肝硬化临床上缺乏特异的治疗方法，病死率较高，如何改善终末期肝病患者肝功能，修复损伤的肝组织结构，提高患者的生活质量及生存率，成为临床研究难点和热点。干细胞发现于20世纪50年代。1999年Petrres首次报道骨髓干细胞可以转化为肝细胞，为干细胞治疗急慢性肝衰奠定了基础。干细胞具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体[4，5]，即这些细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群体的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞，从而构成机体各种复杂的组织器官。成体干细胞分成两种：造血干细胞(HSCS)和间充质干细胞(MSCS)。MSCs来源于自体骨髓外周血、胎儿、脐带、脐带血。在治疗过程中选择什么样来源的干细胞，怎样有效获得存活率好的干细胞，用什么途径使干细胞移植到受损的组织器官，是临床上需要探查的问题。目前用于临床治疗多采用自体骨髓间充质细胞，但由于获取大量骨髓干细胞存在一定困难，并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加会出现数目及分化潜能下降趋势等局限。Sarugser等[6]报道脐带间充质干细胞平均4～5 d即可传代(骨髓间充质干细胞需4～6 d，外周间充质干细胞需7 d以上)，细胞平均倍增6.18倍，因此短期培养也可获得足够的细胞数，Lu等[7]报道脐带间充质干细胞与骨髓间充质干细胞相似，但分离培养的脐带间充质干细胞可能更均一，性质更稳定。近期研究表明脐带来源的间充质干细胞取材方便，来源广泛，易于取集，不受伦理、道德及法律方面的分论与限制，相对纯净，含量丰富，较为原始，分化能力强，在体外进行分离、培养扩增迅速，免疫活性低。具有跨胚层向多组织细胞分化的潜能和自我更新的高增值能力。干细胞移植途径，有学者提出采取不同的移植途径，在肝脏定居的细胞数量是有差异的，但这种观点缺乏实验依据，而且有关比较移植途径的实验研究也较少。国内学者穆丽雅[3]等探讨小鼠骨髓干细胞，在同种异体不同途径移植向受体肝脏迁移的情况，结论表明骨髓干细胞向肝脏迁移的细胞数与迁移途径无关。Lagasse E等[8]报道，在FAH缺陷大鼠模型中证实经外周静脉移植干细胞能在肝内分化功能齐备的肝细胞，改善FAH缺陷大鼠症状，只要50个干细胞就能达到这种效果。移植干细胞的途径大多数学者采用门静脉移植及股动脉移植途径。本研究采用外周静脉移植治疗酒精性失代偿期肝硬化，同样取得了显著的疗效。
       我们对10例酒精性失代偿期肝硬化患者进行了HUCMSCs外周静脉移植治疗的研究，移植后1周各项肝功能指标改善无显著性意义(P>0.05)。这可能与肝细胞移植到肝脏内时间较短不能起到增植、分化、融合作用有关[9];2周改善有显著性差异(P<0.05)，8周、12周有极显著性改善(P<0.01)。说明从2周开始干细胞在肝脏逐渐发挥了修复的作用，随着时间的推移，其作用逐渐增强[9] ，本组资料表明，至2周肝功能各项指标明显好转的同时，临床症状得到不同程度改善，而且没有明显不良反应及并发症。本研究还表明HUCMSCs作为“种子”细胞，在治疗终末期肝病中初步起到作用，外周静脉作为移植途径是可行的。本研究的结果与国内学者姚鹏[10]及朱康顺等[11]研究的结果比较疗效更显著，可能与移植的途径及所用干细胞的“种子”不同有关。也可能与病因不同，疗效有差别，仍需进一步探讨，在本单位研究同种干细胞“种子”用同种移植方法治疗不同病因的肝硬化患者，疗效是存在差异的。
       干细胞移植治疗酒精性失代偿期肝硬化的报道较少，但和国内报道的干细胞移植治疗病毒性肝炎后肝硬化所得到的结论比较，其疗效更显著。干细胞具有多向分化的潜能，该分化发育特异性是其自身特性和生存环境联合作用的结果，其中生存环境起重要作用[12，13]。研究发现[14]在肝脏损害中，机体能够分泌一系列细胞因子和化学增活素，重症肝病患者血清中一些肝脏发育和再生中重要的因子如干细胞生长因子、肿瘤坏死因子、白细胞介素2、γ-干扰素、一氧化氮均明显高于正常值。研究发现酒精性肝硬化患者血清中干细胞生长因子、成纤维细胞生长因子等能够诱导人骨髓间充质干细胞表达甲胎蛋白及白蛋白，向肝细胞样细胞分化，故人脐带间充质干细胞移植治疗酒精性肝硬化比病毒性肝炎后肝硬化疗效更显著。
       【参考文献】
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