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       【关键词】  高效液相色谱法
        摘要：目的：建立驴胶补血颗粒中阿魏酸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱(HPLC)法，色谱柱采用依利特Sino Chrom ODS-BP (4.6 mm×250 mm,5 μm)柱，甲醇0.05%冰醋酸溶液（35∶65）为流动相，流速为0.7 ml/min，柱温为25℃，检测波长为320 nm。结果：阿魏酸进样量在0.462～0.924 μg内与峰面积呈良好线性关系，相关系数为0.999 5，平均回收率为97.8%，RSD为2.01%（n=5）。结论：该方法简便，准确、重现性好，可作为该制剂的质量控制。
        关键词：高效液相色谱法；驴胶补血颗粒；阿魏酸
        Determination of Ferulic Acid in Lvjiaobuxue Granule by HPLC
        JIN Zaijiu, PIAO Huishun, SHEN Yingai
        (College of Pharmacy,Yanbian University,Yanji 133000, Jilin, China)
        Abstract:Objective:To establish content assay method of ferulic Acid in Lvjiaobuxue Granule by HPLC.Methods:A Sino Chrom ODS-BP column（4.6 mm×250 mm,5 μm）was selected as separation column at 25℃. The mobile phase consists of MeOH0.05% acetic acid(35∶65). The flow rate was 0.7 ml・min-1. The detection wavelength was at 320 nm.Results:The linear ranges of ferulic acid was 0.462～0.924 μg(r= 0.999 5). The average recovery was 97.8% and RSD was 2.01%(n=5).Conclusion:The method was simple, accurate,reproducible and suitable to be used in quality control of the Lvjiaobuxue Granule.
        Key words:HPLC;Lvjiao buxue granule;Ferulic acid
        驴胶补血颗粒由阿胶、黄芪、熟地黄、当归、党参、白术等组成。具有滋阴补血，健俾益气，调经养血之功效，主要用于久病体虚、血亏气虚、妇女血虚、经闭、经少等症。为更好的控制药品质量，本文采用高效液相色谱法对本品的当归和党参中阿魏酸含量测定方法进行了研究。结果表明该法操作简便，准确、重现性好，适用于本品的质量控制。
           1仪器与试药
        日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，岛津CLASS-LC10色谱工作站；LC-10AT输液泵；SPD-10AV紫外检测器；CL-ASS-LC10色谱工作站。阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：07773-9910）；驴胶补血颗粒（湖南九芝堂股份有限公司产品，批号：200404003，200404012，200404051）；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
           2方法与结果
        2.1色谱条件色谱柱为依利特Sino Chrom ODS-BP (4.6 mm×250 mm,5 μm)柱；流动相为甲醇0.05%醋酸溶液（35∶65）；流速0.7 ml/min；检测波长为320 nm；柱温为25℃。在此色谱条件下，供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时间处有相应色谱峰，与其它组分能基本达到基线分离，R>1.5，理论塔板数按阿魏酸峰计算为3 000以上。
        2.2溶液制备
        2.2.1对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品4.62 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得每ml含0.046 2 mg的对照品溶液
        2.2.2供试品溶液的制备取本品研细混匀，约2 g粉末，精密称定，加入氯仿（以甲酸预饱和）50 ml，称定重量，加热回流提取1 h，放冷,用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 ml，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解并定容至5 ml量瓶中，微孔滤膜滤过，即得。
        2.2.3阴性对照品溶液的制备按配方比例，除去当归、党参制成不含当归、党参的颗粒样品，按制备供试品溶液相同的方法制得阴性对照品溶液。
        2.3线性关系考察精密吸取对照品溶液（浓度0.046 2 mg/ml）1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μl进样，测定峰面积，以峰面积为纵坐标（浓度μg・ml-1）为横坐标进行回归分析，得回归方程：Y=324 579 X-95 325，相关系数r=0.999 5。表明阿魏酸在0.462～0.924 μg范围内线性关系良好。
        2.4精密度实验精密吸取阿魏酸对照品溶液5.0 μl，重复进样5次，用测定值的相对标准偏差反应测定结果的精密度，结果RSD为0.175%。
        2.5稳定性考察精密吸取同一批号样品（批号200404003）溶液20 μl，按上述色谱条件下操作，每隔2 h测定一次峰面积积分值。结果见表1。
        表1驴胶补血颗粒中阿魏酸稳定性时间t/h（略）
        2.6重复性实验精密称取同一批号样品（批号200404003）5份，按前述方法制备供试品溶液，并在上述色谱条件下测定峰面积，计算阿魏酸含量，结果：=0.010 45 mg/g，RSD为2.2%(n=5)。
        2.7加样回收实验精密称取已知含量样品1g，供5份（批号200404003,阿魏酸含量为0.010 45 mg/g），分别精密加入阿魏酸对照品溶液（0.046 2 mg/ml）2 ml。按2.2.2项下方法制备供试品溶液，并在上述色谱条件下测定峰面积，计算回收率，结果：阿魏酸加样回收率为97.8%，RSD为2.01%(n=5)。
        2.8样品含量测定精密称取3批样品各3份，按2.2.2项下供试品制备方法制备，按上述色谱条件测定阿魏酸含量，共3次。测定结果见表2，色谱图见图1。
        表2驴胶补血颗粒中阿魏酸的含量（略）
        图1色谱图（略）
           3讨论
        阿魏酸是驴胶补血颗粒中当归和党参含有的成分，具有明显扩张冠脉血管,增加冠脉流量,改善心肌缺血作用。它是弱有机酸,根据文献我们采用流动相溶解［1］,使阿魏酸稳定性增加,提高了分析结果的准确性。
        3.1提取方法的确定中药复方制剂应用高效液相色谱法以阿魏酸魏指标进行含量测定的报道较多［2，3］，对样品的处理各有不同。笔者曾采用60%甲醇（含1%醋酸）溶液超声处理，提取杂质较多，而且杂质峰面积较大影响分离，而改用甲酸预饱和的氯仿加热回流提取，达到很好的提取分离效果。
        3.2提取时间的考察按所拟方法加热回流提取，依法操作，对不同回流时间的效果进行考察，确定提取时间为60 min。
本法具有操作简便，准确、重现性好等优点，为本品的质量控制提供了可靠的依据。
           参考文献：
        ［1］贾晓斌，施亚方，黄一平，等.当归和川芎中阿魏酸高效液相色谱测定方法的改进［J］.中成药，1998，20（6）：3738.
        ［2］孙立华，吴爱英，张春辉，等.高效液相色谱法测定康媛颗粒中阿魏酸的含量［J］.中国药事，2003，17（12）：756757.
        ［3］方子季，朱秀美，孙宪悌.高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸、补骨脂素及异补骨脂素的含量［J］.中国药学杂志，2001，36（6）：410411.
        (吉林省延边大学药学院，吉林 延吉133000)