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       【关键词】  蜘蛛
        摘要：目的建立测定蜘蛛香药材中总缬草素含量的方法。方法用电位滴定法进行测定，用一级微商法确定终点。结果该方法操作简便，设备普及率高，可操作性强，结果准确客观。结论电位滴定法可作为测定蜘蛛香药材中总缬草素含量的一种方法。
        关键词：蜘蛛香；  总缬草素；  含量测定；  电位滴定法
        蜘蛛香Valeriana jatamansii Jones又名马蹄香、老虎七、印度缬草等，系败酱科缬草属植物。主产于四川、贵州、云南等地，临床主要用于消化不良、腹痛、止水泻、流感等。近年来，运用马蹄香(即蜘蛛香)制剂治疗某些病毒感染和抗抑郁等方面均有一定疗效，该属植物的药用价值已越来越引起重视，其化学成分含有缬草素类(Valeportriates)、挥发油类(Volatile oils)、生物碱类(alkaloids)、黄酮类flavonoids)等多种成分，其中，缬草素类成分是其镇静催眠、抗病毒等作用的主要活性成分［1］。因此总缬草素的含量可以作为评价蜘蛛香质量的主要指标。文献报道缬草类生药中总缬草素的含量测定方法有：电位滴定法［2］、比色法［3］、酸碱滴定法［4］、硝苯吡啶法［5］等，其中电位滴定法操作简便，设备普及率高，判断滴定终点不受颜色等其他主观因素的干扰，结果准确客观，故本文选择电位滴定法测定蜘蛛香中总缬草素的含量。
           1  仪器与试药
        PHS-3型酸度计(上海第二分析仪器厂)；232型甘汞电极，231型玻璃电极(上海电光器件厂)；蜘蛛香购于贵州各地，由成都中医药大学药学院中药室签定为Valeriana jatamansii Jones的干燥根茎和根。所用二氯甲烷等试剂均为分析纯。
           2  方法与结果
        2.1  电位滴定曲线的制备精密称取生药粉末(40目)［同时另取本品粉末测定水分］约10 g，置索氏提取器中，用二氯甲烷80 ml提取至几乎无色，提取液转移并定容至100 ml的量瓶中。精密量取样品液5 ml，置40℃水浴蒸干，残渣加丙酮30 ml溶解后，精密加入氢氧化钠滴定液（0.01 mol/L）25 ml，置56～59℃水浴上加热30 min，照电位滴定法（附录Ⅷ电位滴定法与永停滴定法项下），用盐酸滴定液（0.01 mol/L）滴定，以酸度计指示电位变化，记录电位值，以VHCL为横坐标，电位值E为纵坐标作图。结果见图1。
        图1  滴定曲线
        由图1可知，该滴定为一级滴定，故可以用一级微商法确定终点。
        2.2  终点确定方法的选择 因本品颜色较深，干扰指示剂终点变色的观察，导致用指示剂法不能客观地判定终点，故选用电位法指示终点，并通过一级微商法进行数据处理，可准确判断其滴定终点。以消耗盐酸滴定液的量为横坐标，以△E/△V为纵坐标，作图。结果见图2。结果表明，用一级微商法确定终点直观可行，结果精确，误差小，可以作为确定终点的可靠方法。
        2.3  滴定时样品溶剂的选择根据被测成分的性质，对滴定时样品溶液的溶剂进行考察，被测成分常用的溶剂有乙醇和丙酮，取同一样品，分别用两种溶剂进行滴定，结果表明，两种溶剂所测得的结果比较接近，由于以丙酮为溶剂滴定时，电位变化较明显，故选择丙酮作为滴定时样品溶液的溶剂。
        2.4  线性关系的考察 精密量取已知含量的样品溶液1，3，5，7，9 ml，分别按样品测定方法测定含量，以总缬草素的量（mg）为横坐标（X），所消耗的氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）的体积（ml）为纵坐标（Y），进行回归。结果见表1，图3。
        表1  线性关系考察结果总缬草素的量（略）
        图2  滴定终点图
        图3  总缬草素滴定线性关系考察图
        结果表明：总缬草素含量在3.39～30.51 mg范围内与滴定所消耗的氢氧化钠滴定液（0.01 mol/L）的体积呈良好的线性关系，回归方程为Y=1.407 8 X，相关系数为r=0.999 9。
        2.5  精密度实验同一样品溶液，精密量取10份，每份5 ml，按含量测定项下方法进行测定，计算5次测定结果的RSD值为1.25%，表明该方法精密度较好。
        2.6  重复性实验取药材粗粉6份，每份约10 g，精密称定，分别按药材提取方法提取并进行含量测定，根据测定结果计算RSD为1.70%，结果表明该方法重复性良好。
        2.7  药材提取方法的研究
        2.7.1  药材提取方法的选择取生药粉末(40目) 3份，每份约10 g，精密称定，分别加二氯甲烷80 ml后，分别用超声法、回流提取法、索氏提取法进行提取，将提取液转移并定容至100 ml的量瓶中，摇匀，分别精密量取样品液各5 ml，置40℃水浴上蒸干，残渣加丙酮30ml溶解后，精密加入氢氧化钠滴定液（0.01 mol/L）25 ml，置56～59℃水浴上加热30 min，立即冷却，照电位滴定法（附录36页），用盐酸滴定液（0.01 mol/L）滴定，并将滴定结果用空白实验［精密量取5 ml，置40℃水浴上蒸干，残渣加丙酮30 ml使溶解，照电位滴定法（附录36页），用氢氧化钠滴定液（0.01 mol/L）滴定］校正。每毫升氢氧化钠滴定液（0.01 mol/L）相当于1.41 mg的缬草三酯（C22H30O8）。测定结果见表2。结果表明：索氏提取方法提取效果较好，故药材选用索氏提取。
        2.7.2  提取溶剂的选择取生药粉末(40目)4份，每份约10 g，精密称定，分别用甲醇、氯仿、石油醚、二氯甲烷提取，同提取方法的选择项下测定。结果见表3。
        表2  提取方法的考察及结果%提取方法 （略）
        表3  提取溶剂的考察及结果%提取方法   （略）
        结果表明，以二氯甲烷为溶剂提取效果较好，故选择二氯甲烷为提取溶剂。根据以上研究结果，确定药材的提取方法为：取生药粉末(40目)约10 g，精密称定，加二氯甲烷80 ml，置索氏提取器中提取至将近无色。
        2.7.3  贵州不同产地蜘蛛香药材的含量测定按既定药材含量测定方法，对安顺、纳雍、长顺、关岭等不同产地的蜘蛛香药材中总缬草素的含量进行测定。结果见表4。
        表4  不同产地蜘蛛香药材含量测定结果%序号 （略）
           3  讨论
        该方法精密度高、重复性好，能作为测定蜘蛛香中总缬草素含量的一种方法，用该方法测定贵州各地产蜘蛛香中总缬草素的含量范围在3%～6%之间，与全国其它地方产蜘蛛香中总缬草素的含量［2］相比，相对较高。蜘蛛香根茎部比例较大，应粉碎均匀（40目），否则因取样不均或提取不完全会带来测定误本方法在做空白扣除实验时，出现多个电位突跃点，这可能是由于蜘蛛香中含有多种有机酸，有机酸与0.01 mol/L的NaOH逐步反应所致，为了使有机酸与碱反应完全，实验中确定以最后一个突跃点为反应终点。本实验研究过程中受到刘晓晴教授指导和成都中医药大学药学院中药鉴定教研室马逾英副教授及同学王森、罗琴的帮助，在此表示衷心感谢！
           参考文献：
       ［1］  石晋丽，刘  勇，肖培根.缬草属植物化学成分与药理作用［J］.国外医药・植物分册，2003，18(6)：231.
［2］  明东升，郭济贤.缬草类生药中总缬草素的含量测定［J］.上海医科大学学报，1993，20(3):210.
［3］  Popov DM.Quality control of valerian preparations by photocolorimetry［J］. Khim-Farm Zh,1986,20(4):831.
［4］  Konovalova OA. Quantitative determination of total valepotriates［J］. Khim-Farm Zh,1983,17(7):831.
［5］  Braun R. Valeportriates determination with the aid of nitribenzyl pyridine (NBP method)［J］.Disoh Apoth-Ztg,1983,125(50):2174.
        (成都中医药大学药学院，四川 成都  610075)