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       【关键词】  桉油
        摘要：目的优选β环糊精包合桉油的最佳工艺。方法采取L9 (34) 正交实验，以包合物得率及包合率两个指标，综合考察βCD与油、βCD与水的比例、包合温度、搅拌时间四因素对β环糊精包合桉油工艺的影响。结果优选出工艺为A3 D1 C1B1，即环糊精∶桉油为8∶1，环糊精∶水为1∶10，包合时间为1 h，包合温度为40℃。结论包合方法工艺简单，方便实用，达到了改变桉油剂型的目的。
        关键词：桉油；  β环糊精包合物；  正交实验
        Study on Preparation of β-cyclodextrin Inclusion Compound for Eucalyptus Oil
        HE Yuan， WANG Siwang*， WU Hong,    LI Xiao ye
        （Institute of Materia Medica, School of Pharmacology, Fourth Military Medical University, Xi"an 710032,China）
        Abstract：ObjectiveTo optimize the including preparation for Eucalyptus oil with betacyclodextrin．MethodsTwo indexes including the ratio of obtained inclusion compound and the inclusion rate of oil were used to evaluate the technologies based on orthogonal design, in which the proportion between βcyclodextrin and eucalyptus oil、βcyclodextrin and water, the experiment temperature and the time of stiring were considered as four main technology factors．ResultsThe optimized experimental conditions were A3 D1 C1B1,which was that    βcyclodextrin : eucalyptus oil= 8∶1, βcyclodextrin ∶water= 1∶10, temperature at 40℃and one hour stiring for including. ConclusionThe including technology is simple，reliable and can transform of dosage form of eucalyptus oil.
        Key words：Eucalyptus oil；  βcyclodextrin inclusion compound；  Orthogonal design
        桉油（Eucalyptus oil）为桃金娘科植物蓝桉Eucalyptus globulus Labill、樟科植物樟Cinnamomum camphora (L.) Sieb 或上述两科同属其他植物经蒸馏得到的挥发油, 系《中国药典》（2005 年版）法定药材。桉油中主要含桉油精(C10H18O)，其含量大于70.0％，还含有柠檬烯、α蒎烯等成分。大量药理研究表明其具有广泛的抗菌、抗氧化、改善呼吸道功能 ［1，2］等作用；由于存在较明显的胃肠道及神经系统副作用［3］，未能得到充分的利用。为了更好地发挥桉油的治疗作用,减少对胃肠道的刺激,防止有效挥发性成分挥发，并使其粉末化以便于制备各种剂型,故采用L9 (34) 正交设计进行包合，并对影响包合率的诸多因素进行考察，从而筛选优化得到较佳的包合工艺。
           1  仪器与材料
        气相色谱仪（Agilent4890），氢离子火焰检测器；集热式恒温加热磁力搅拌器：巩仪市英峪子华仪器厂，型号DF101S；电子分析天平：德国sartorius，R200D；真空抽气泵：日本TOKYO，型号A3S SER；真空干燥箱：上海实验仪器总厂，型号ZK82A。桉油：佛山市南海中南药化厂，批号040701，经测其桉油精含量为71.74%；桉油精对照品：中国药品生物制品鉴定所，批号1107889202；β环糊精：陕西礼泉化工有限实业公司生产，纯度99％；无水乙醇、乙酸乙酯、环己酮、甲苯均为分析纯。
           2  方法与结果
        2.1  包合物中桉油精的含量测定方法［4］
        2.1.1  色谱条件Agilent4890气相色谱仪，氢火焰离子化检测器；色谱柱 DB5（30 m，0.53 mm），膜厚1.0 μm，氮气流速30 ml/min，氢气流速30 ml/min，空气流速300 ml/min；进样口及检测器温度为200℃ ，柱温90℃，进样量1 μl。在上述色谱条件下，桉油精色谱峰的理论塔板数大于2 500，桉油精与相邻杂质峰的分离度大于1.5，见图1~2。
        图1  桉油精标准品     
        1.溶剂峰  2.环己酮  3，4.杂质峰  5.桉油精
        图2  桉油色谱图
        2.1.2  线性关系考察精密称取桉油精22.66 mg, 置10 ml容量瓶中, 用无水乙醇稀释至刻度, 作为对照品溶液；精密称取环己酮39.83 mg, 置5 ml容量瓶中, 用无水乙醇溶解并稀释至刻度, 作为内标溶液；精密吸取对照品溶液0.4, 0.8, 1.2，1.6，2.0 ml分别置10 ml容量瓶中, 并分别加入内标溶液0.5 ml , 最后加乙醇至刻度, 混匀,制成系列浓度的溶液。分别取 1μl进样测定 (每1浓度进样2次), 以对照品浓度与内标浓度比值(CR／CS)为横坐标(X), 对照品峰面积和内标峰面积比值(AR／AS)为纵坐标(Y),考察线性关系, 结果其回归方程为: Y = 0.963 03X +0.023 431, r= 0.999 76，证明桉油精浓度在0.090 64～0.453 2 mg/ml范围内线性关系良好。
        2.1.3  精密度考察取“2.1.6”项下一供试品溶液，重复进样5次，桉油精峰面积与内标峰面积的比值(AR／AS)平均为0.554 28，RSD=0.658%，说明仪器精密度满足要求。根据精密度实验结果计算校正因子，算得校正因子为0.821 153。
        2.1.4  溶液稳定性取“2.1.6”项下一供试品溶液，分别于0，2，4，8，24 h进样测定，桉油精峰面积与内标峰面积的比值(AR／AS)平均为0.594 54，RSD=0.307％ ，说明供试品溶液至少24 h内稳定。
        2.1.5  包合物中桉油精加样回收率实验 精密称取包合物约10 mg, 置10 ml具塞离心管中, 精密加入10 ml无水乙醇，再加入一定量的桉油精, 结果桉油精平均回收率为97.29% , RSD=1.652%(n=5)。见表1。
        表1  回收率实验结果编（略）
        2.1.6  样品桉油精含量测定精密称取包合物约20 mg, 置10 ml具塞离心管中,用移液管精密加入10 ml无水乙醇，超声15 min，静置过夜。精密吸取内标溶液0.2 ml（1 ml含环己酮8.17 mg）于5 ml容量瓶中,用上述包合物乙醇提取液定容至刻度, 混匀, 进样1μl/次，每个样品进样3次，测定,取平均值并计算包合物中桉油精含量。
   
    2.2  正交实验设计
        2.2.1  包合方法 ［5］取一定量的βCD ,按表2 因素水平与表3 搭配顺序加入一定量的蒸馏水,加热溶解制成过饱和溶液后,保温至规定温度,缓慢加入桉油无水乙醇溶液（1∶1体积比），边加边搅拌至规定时间，固定转速为300 r・min1,冷却后置冰箱冷藏24 h，抽滤至干，用5 ml乙酸乙酯洗涤，再置55℃真空干燥箱中干燥24 h，得白色疏松粉末，即为βCD桉油包合物。
        2.2.2  考察因素及水平值的选择［6］为得到最佳包合工艺，对影响包合工艺的因素：油与βCD 之比,包合温度,搅拌时间,βCD 与水之比4个水平进行考察，采用L9 (34) 正交表设计实验，由于桉油的主要有效成分为桉油精, 其含量达71.74% , 故本实验采用桉油精的包合率作为包合率的考察指标，并结合包合物收得率进行优选,其因素水平见表2。
        表2  因素水平水平 （略）
 
    2.2.3  包合物桉油精包合率、包合物收得率的测定与计算按2.1.6项下方法测定每一样品中桉油精含量，并按下列公式计算包合物收得率及桉油精包合率：桉油精包合率=包合物中桉油精含量(mg)／所投油中桉油精含量(mg)×100％；包合物收得率=包合物重(g)／(βCD +桉油)重(g)×100％。桉油精包合率是考察包合效果的主要指标，具有质量意义，同时包合物收率在工业生产上具有经济意义，所以最终考察指标“综合评分”是二者分别乘以加权系数0.8及0.2的加权平均值。综合评分=桉油精包合率     桉油精包合率最高值×80+包合物收率     包合物收率最高值×20
        表3  桉油β环糊精包合物的正交设计结果实验（略）
        2.2.4  正交实验数据与结果正交实验结果见表3。方差分析结果见表4。
        表4  方差分析变异来源  （略）
        因为在实际生产中挥发油中有效成分的包合率对产品质量影响较大，故本文重点考虑包合工艺条件对桉油精包合率的影响，用综合评分法分析可知各因素对实验结果影响的大小顺序为：A > D > C >B，最佳的制备条件即优选工艺为A3 D1 C1B1，β环糊精:桉油为8∶1，环糊精∶水为1∶10，包合时间为1 h，包合温度为30℃。
        2.3  验证性实验 取桉油3批，按最佳工艺包合进行验证性实验，桉油平均包合率为：86.35%，包合物收得率为：87.88%，两项指标均超过正交设计实验中的最大值。
        3  讨论
        3.1  目前在中药挥发油包合物制备工艺研究中以及中药新药研制的过程中，对挥发油包合率的考察大多以包合物中提取的挥发油量为考察指标，缺乏对挥发油中有效成分包合率的考察。本实验以挥发油中有效成分桉油精为考察指标，来确定挥发油的最佳包合工艺，较为科学、准确。采用气相色谱法测定桉油精具有快速、准确、重复性好的特点。含量测定结果比较可靠。
        3.2  本研究确定最佳工艺为环糊精:桉油为8∶1，β环糊精:水为1∶10，包合时间为1 h，包合温度为30℃。经过包合作用能够达到使其固化形成粉末利于制剂的目的，为进一步的药效学研究及临床应用提供了一定的药学基础。
           参考文献：
       ［1］  Pascal J Delaquis, Kareen Stanich, Benoit Girard, et al. Antimicrobial activity of individual and mixed fractions of dill,cilantro, coriander and eucalyptus essential oils. International Journal of Food Microbiology ［J］.2002,74:101.
［2］  周建娅，唐法娣，王  砚，等.二氧化硫吸入致大鼠肺组织核因子κB 的激活及蓝桉油的抑制作用［J］.中华结核和呼吸杂志，2003，26（5）：311.
［3］  M De Vincenzi, M Silano, A De Vincenzi,F et al. Safety data review Constituents of aromatic plants: eucalyptol［J］.Fitoterapia，2002，73 ：269.
［4］  张启明，姜平川，刘  刚，等.气相色谱法测定岗松油中芳樟醇和桉油精的含量［J］.中国药学杂志，2004，39（4）：298.
［5］  董方言.现代实用中药新剂型新技术，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，2001：571.
［6］  胡永芳，焦海胜，蔡兴国，等.正交实验研制烈香杜鹃油β环糊精包合物［J］.中成药，2002，24（10）：746.
        (中国人民解放军第四军医大学，陕西 西安  710032)