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       【关键词】  中药
        摘要：目的考察抗癫痫类中药制剂中添加化学药品苯巴比妥的检测方法。方法建立化学官能团专属性鉴别方法和高效液相色谱法进行初步确认，用高效液相色谱―质谱联用技术以对照品比对做最终确认。结果与结论该法操作简便、快速，结果准确、可靠。
        关键词：苯巴比妥；  中药制剂；  薄层色谱；  高效液相色谱；  高效液相色谱质谱
        Determination Methods of Phenobarbital in Traditional Chinese Medicinal Preparation
        XUE Hengyue1, WANG Yulan1, YU Liming1, HU Rong2, WANG Wenzhen3,
        (1.Dalian Institute for Drug Control, Dalian, Liaoning 116021,China; 2.Dalian Bureau of Drug Administration, Dalian, Liaoning 116021, China; 3.Dalian Hospital of TCM, Dalian, Liaoning 116010,China)
        Abstract:ObjectiveTo identify a method for the test of phenobarbital mixed in traditional Chinese medicine(TCM)preparations.MethodsChemical method and HPLC method were established for the determination of the organic extract of TCM preparations, and phenobarbital was last identified by comparation of samples with standards in HPLC-MS.Results and ConclusionThe samples were determined and contained phenobarbital.The method is simple, accurate and reliable.
        Key words:Phenobarbital;   Traditional Chinese medicine(TCM) preparations;  TLC;  HPLC;   HPLCMS
        抗癫痫类药物目前的种类很多。其中苯巴比妥类属于苯巴比妥酸的衍生物，主要作用于中枢神经系统的不同层面，具有非特殊性抑制作用。一些自制中药制剂为增加疗效非法添加了苯巴比妥类治疗药物，由于对其剂量没有进行控制，临床应用时易产生肝、肾毒性，给患者造成伤害甚至危及生命。因此建立一个有效的方法检测此类药物，以便及时查处制假行为是十分必要的。本文对检测方法操作进行了探讨。
           1  仪器与试药
        仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪(二级管阵列检测器)；Agilent 1100LC-MSD高效液相色谱―质谱联用仪。试剂：均为分析纯。苯巴比妥对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号17222-200303)。样品为个体医疗诊所自制中药制剂。
        2  检测方法
        首先采用化学官能团专属性鉴别对添加的西药类别进行筛选，用薄层层析法进一步筛选确认，然后采用高效液相色谱法对样品与对照品色谱峰的保留时间进行比对，并在二级管阵列检测器上测定色谱峰的纯度及紫外图谱的相似性。最终用高效液相色谱―质谱联用技术确定具体药物的成分。
        2.1  样品提取取样品10粒倾取内容物，加氯仿30 ml，超声处理15 min，滤过，滤液中加入活性炭0.5 g，摇匀，过滤。滤液水浴上蒸至近干，得白色粉末(测试样品)。
        2.2  专属性化学鉴别反应取测试样品10 mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约5 mg，摇匀，溶液生成橙黄色沉淀，渐变橙红色。证明测试样品可能属于苯环取代基的苯巴比妥类药物［1］。
        2.3  薄层层析取测试样品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取苯巴比妥对照品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，作为对照品溶液。分别吸取上述两种溶液各5 μl，点于同一硅胶GF254薄层板上。分别用正己烷氯仿甲醇(5∶3∶1)、氯仿甲醇(9∶1)、氯仿环己烷甲醇(5∶4∶1)3种不同的系统展开，检视。结果表明：测试样品色谱图中均有一暗紫色的主斑点，与苯巴比妥对照品色谱中相应位置上的斑点颜色相一致。
        2.4  高效液相色谱法测定
        2.4.1  仪器与色谱测定条件色谱柱：Diamonsil C18，4.6 mm×200 mm，5 μm；流动相：甲醇10 mmol/L磷酸二氢钾(58∶42)；检测波长：210 nm；柱温：30.0℃；进样量：10 μl［2］。
        2.4.2  操作方法取测试样品1 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取苯巴比妥对照品1 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。上述两种溶液分别用微孔滤膜(0.2 μm)过滤，进样，即得。
        2.4.3  结果测试样品色谱图中主峰保留时间与苯巴比妥对照品色谱峰保留时间一致，而且两者在色谱峰各位置处的紫外图谱均相叠。见图1~2。
        图1  供试品高效液相色谱图    
        图2  对照品高效液相色谱图
        2.5  高效液相色谱―质谱联用测定
        2.5.1  仪器与色谱测定条件色谱柱：ZobaxC18 2.1 mm×250 mm，5 μm；干燥气体流量：10 L/min；温度：350℃；喷雾压力：25～30 Psi。
        2.5.2  供试品溶液制备操作方法同2.4.2操作方法。
        2.5.3  结果对测试样品中保留时间为11.7 min的峰进行ESI-MS分析，结果显示，在正离子模式下质谱图上出现准分子离子峰［M＋H］＋(m/E 233.3)，加合离 子［M＋Na］＋(m/E 255.3)及［IM＋H＋H2O］＋(m/E 484.4)；在负离子模式下质谱图上显示准分子离子峰［M-H］-(m/E 231.3)，加合离子［M＋Cl］-(m/E267.1)。测试样品显示与苯巴比妥对照品分子量及峰位相同的分子离子碎片峰，证实样品中添加了苯巴比妥。见图3~4。
        图3  供试品质谱图    
        图4  对照品质谱图
           3  讨论
        中药制剂中非法添加化学药品是近年来出现在中药制剂领域中的一种高科技制假手段，这种手段具有隐蔽性，但对患者的身体具有伤害性，是药品质量管理中的薄弱环节。由于缺乏相应的检测手段和方法，制约了药品监督管理部门对制假者的及时查处工作。本文尝试并研究了抗癫痫类中成药中添加化学药品苯巴比妥的检测方法。用本文的实验思路和方法，可以进一步扩大研究的领域和范围，及时掌握和监督市售更多中药制剂的品种。致谢：高效液相色谱―质谱由大连理工大学国家精细化工重点实验室完成。
           参考文献：
        ［1］  国家药典委员会.中国药典,Ⅱ部［S］.北京:化学工业出版社,2000:362.
        ［2］  刘文英,冯  芳,李好枝,等.药物分析,第5版［M］.北京:人民卫生出版社,2003:95.
        (1.大连市药品检验所，辽宁 大连  116021；
2.大连市药品监督管理局稽查大队，辽宁 大连  116021；  3.大连市中医医院，辽宁 大连  116010)