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       【摘要】 
       目的探讨黄芩苷元对小鼠CCl4肝损伤的保护作用。方法采用CCl4小鼠急性肝损伤模型，测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性、肝组织MDA含量，并观察肝组织病理变化。结果黄芩苷元能保护CCl4所致小鼠肝损伤，表现为血清ALT，AST活力和肝脏MDA含量下降，同时其肝脏病变较模型组为轻。结论 黄芩苷元对CCl4所致小鼠肝损伤具有保护作用。
       【关键词】  黄芩苷元； 肝损伤； 保护作用
       
       Protective Effect of Baitalein on Experimental Liver Injury in Mice
       LIU Jianxin，XIE Shuixiang,  ZHOU Li,  WANG Xiurong,  YANG Qingchun,  ZHANG Wenping
       1.Department of Pharmmacology, Gannan Medical College, Ganzhou 341000, China；
       2.Department of Ethiologic Microbiology, Gannan Medical College, Ganzhou 341000, China；
       3.Departmcent of Functional Subject Laboratory, Gannan Medical College, Ganzhou, 341000, China
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of baicalein against carbon tetrachloride(CCl4)-induced hepatotoxicity in mice. MethodsThe experimental model of liver injury was induced by CCl4 in mice . The serum alanine aminotransferase (ALT) , aspartate aminotransferase(AST) and liver malondialdehyde (MDA) were determined. The pathological examination of liver was performed . ResultsBaicalein significantly reduced serum ALT , AST activities and liver MDA content, and the liver lobule were ameliorated obviously . ConclusionBaicalein has a protective effect on acute hepatic injury induced by CCl4.
       Key words：Baicalein;   Hepatotoxicity；  Hepaticprotection
       
       黄芩苷元baicalein ,Bai是从传统中药唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi中分离出的三羟黄酮苷(5,6,7三羟黄酮) baicalein (5,6,7trihydroxyflavone),属黄酮类单体化合物。现代药理学研究主要集中在它作为12脂氧化酶抑制剂降低缓激肽所致胞内Ca2+增加的镇痛抗炎、抗氧化、抗肿瘤等生理及药理活性［1］。另据Shieh DE等报道Bai能明显抑制肝炎等所致血清黄嘌呤氧化酶等升高，而且这种作用机制与其抗氧化作用有关［2，3］。由于CCl4对肝脏所造成的损伤主要是它进入体内以后，在肝脏发生过氧化反应产生氧自由基，造成脂质过氧化，而脂质过氧化产物MDA等进一步损伤肝细胞，导致肝细胞坏死和凋亡［4，5］。因此，我们采用CCl4诱发小鼠肝损伤的病理模型，探讨了黄芩苷元对小鼠实验性肝损伤的影响。
       1   器材
       1.1  药物 
       黄芩苷元由江西省中医药研究所提供。
       1.2  动物
       昆明种小鼠，雌雄兼用，体重为（20±2）g，由江西医学院动物实验部提供，动物质量合格证号：JXA2005025。
       1.3 仪器及试剂 
       722型可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司生产；KDC2046低速冷冻离心机，合肥科大创新股份有限公司中佳分公司生产；400型全自动生化仪，日本奥林巴斯公司生产；MDA，ALT，AST试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。
       2  方法
        40只昆明种小鼠，每组10只，随机分成4组，分别为对照组，CCl4模型组，BaiⅠ组，BaiⅡ组。对照组和模型组分别腹腔生理盐水10 ml/kg；BaiⅠ组小鼠腹腔注射Bai 50mg/kg；BaiⅡ组小鼠腹腔注射Bai 100 mg/kg。1次/d，连续15 d。末次给药后2 h，正常组腹腔注射容量花生油，其余各组均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10 ml/kg一次。禁食，自由饮水，16 h后各组小鼠断头取血。以16 000 r/min离心5 min，取血清，采用400型全自动生化分析仪测定ALT，AST活性；采用分光光度法测定MDA，MDA 含量测定采用硫代巴比妥酸法。取适量肝组织用冰冷生理盐水冲洗，置冰浴中匀化制得10%肝匀浆，以4 000 r/min离心10 min，取上清液测定MDA，蛋白定量采用考马斯亮兰法,以牛血清白蛋白为标准,具体步骤均按各试剂盒说明书操作。另取各鼠相同部位的肝脏用10%福尔马林溶液固定，采用常规石蜡切片，HE染色，光镜下观察肝细胞变性坏死程度。
        
       统计方法使用SPSS11.0统计软件包， 所有数据用±s表示，计量资料采用方差分析的Post Hoc 检验，P＜0.05为差异有显著性。
       3  结果
       3.1 Bai 对CCl4肝损伤小鼠ALT，AST活性的影响如表1 所示，Bai高、低剂量组可显著性抑制CCl4所致的ALT，AST的升高，低剂量组虽没有显著性抑制CCl4所致的ALT，AST的升高，但均有抑制CCl4所致肝损伤的趋势。
       3.2  Bai 对CCl4肝损伤小鼠肝脏MDA含量的影响如表2所示，Bai高、低剂量组可明显降低CCl4肝损伤小鼠肝脏MDA含量，且呈剂量相关性。见表2。表1  Bai 对CCl4所致肝损伤小鼠血清ALT，AST活性的影响(略)表2  Bai 对CCl4肝损伤小鼠肝脏MDA含量的影响(略)
       3.3  Bai 对CCl4肝损伤小鼠肝组织病理学的影响
       CCl4肝损伤造模组肝组织明显损伤，肝细胞浊肿、气球样变性，病变以肝小叶中央静脉周围为重。肝小叶内可见轻度、中度肝细胞点状、碎片状坏死；坏死区内有中、重度淋巴细胞和浆细胞浸润，汇管区内有单核细胞浸润。在各给药组中， Bai 低、高剂量组也有不同程度的肝细胞破坏、炎性细胞浸润等肝损伤病变，但与模型组比较损伤程度明显减轻，尤其是高剂量组表现更为明显。
       4  讨论
        肝脏是外源性过氧化物在体内转化与排泄的主要场所，肝内经氧化还原后产生多种自由基，后者可引起组织过氧化损伤。近年来，对有毒基团在肝损伤中的作用十分重视，据文献报道，有毒氧基在肝细胞损伤过程中发挥着重要作用［6］。CCl4可引起化学性肝脏损伤，用CCl4诱导小鼠肝损伤，其致毒机制［7］是CCl4经肝微粒体细胞色素P450代谢生成自由基（CCl3-），攻击肝细胞膜上磷脂分子引起脂质过氧化，或与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合，破坏肝细胞膜结构和功能的完整。ALT为可溶性酶主要分布在细胞浆内，而AST有80%分布在线粒体内，其余分布在细胞浆内。当肝细胞破坏、细胞通透性增高及线粒体损伤时， ALT，AST活性增高，并且ALT、AST活性的高低变化与肝细胞受损的程度相一致。有研究表明在轻型中毒性急性肝损伤时，血清酶活性ALT升高最为明显，在重型肝损伤时，肝细胞受到严重损伤，血清中AST升高的程度可超过ALT。因此，血清中的ALT，AST是用于诊断肝实质损害的主要酶类。本实验经CCl4处理后小鼠血清ALT、AST均显著升高，表明此时小鼠肝细胞已经损伤，模型复制成功。本研究证明用Bai治疗的小鼠血清ALT、AST较模型组显著性降低，且呈剂量相关性，同时能明显改善肝脏组织结构的病理损害，提示Bai 对化学性肝损害具有一定的保护作用。
        肝脏脂质过氧化的程度可通过测定脂质过氧化物等来评价，MDA是不饱和脂肪酸过氧化作用的终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死。它在血清及组织中的含量高低，间接反映了机体细胞受自由基攻击时组织的破坏程度。因此，肝组织内MDA含量的变化可反映肝损害的程度及治疗后肝功能恢复的情况。本实验通过测定小鼠肝脏MDA含量的变化，发现Bai能明显减少肝脏氧化产物MDA的含量，低剂量组未能显著性降低肝损伤血清中ALT，AST酶的含量，但能显著性地抑制MDA的产生。实验结果表明该药对肝脏的保护作用与其清除或抑制自由基有关。另外CCl3-还可抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使Ca2+内流增加，Ca2+内流增加引起细胞内钙稳态破坏，进一步引起代谢紊乱，从而最终导致肝细胞的死亡，Bai 是12-脂氧化酶抑制剂，降低炎性细胞内Ca2+增加，因此Bai 对小鼠肝损伤的保护作用可能与它减少CCl3-所致Ca2+内流增加有关，有待于今后实验进一步证实。
        
       【参考文献】
         　　［1］Shieh DE, Liu LT, Lin CC. Antioxidant and free radical scavenging effects of baicalein, baicalin and wogonin［J］. Anticancer Res. 2000，20(5A)：2861.
       
       ［2］Jieun Shin, Hawon Cho, Sun Wook Hwang, et al.Bradykinin-12-lipoxygenase-VR1 signaling pathway for inflammatory hyperalgesia［J］. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002，99(15)：10150.
       
       ［3］Shimizu I, Ma YR, Mizobuchi Y, Liu F, et al. Effects of Sho-saiko-to, a Japanese herbal medicine, on hepatic fibrosis in rats［J］. Hepatology. 1999，29(1)：282.
       
       ［4］Shi J, Aisaki K, lkawa Y, Wake K. Evidence of hepatocyte apoptosis in rat liver after the administration of carbon tetrachloride［J］. Am J Pathol, 1998, 153: 515.
       
       ［5］Camps J, Bargallo T, Gimenez A,，Relationship between hepatic lipid peroxidation and fibrogenesis in carbon tetrachloride-treated rats:effect of zinc administration［J］. Clin Sci （Lond），1992,83: 695.
       
       ［6］严奉祥，朱炳阳，郑 兴，等.金粉蕨素对小白鼠实验性肝损伤脂质过氧化的保护作用［J］.南华大学学报，2002，30(1)：4.
       
       ［7］刘春宇，顾振纶，韩 蓉，等.沙苑子提取物对小鼠四氯化碳肝损伤的保护作用［J］.中草药，2002，33(12)：1104.