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       【摘要】 
       目的对当归六黄汤中药配方颗粒与传统汤剂中盐酸小檗碱的含量进行比较，从而为其临床应用提供依据。方法采用反相液相色谱法，DIKMA ODS-C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流动相为乙腈－0.5%的三乙胺（磷酸调pH=3.00)（27∶73），流速为1.0 ml·min-1，柱温30℃，检测波长为343 nm。结果配方颗粒与传统汤剂中盐酸小檗碱含量分别为360.83 mg/处方，255.15 mg/处方。结论中药配方颗粒中盐酸小檗碱含量明显高于传统汤剂。
       【关键词】  当归六黄汤 盐酸小檗碱
       当归六黄汤出自李东垣《兰室秘藏》，药方组成为当归6 g，生地黄6 g，熟地黄6 g，黄连6 g，黄芩6 g，黄柏6 g，黄芪12 g，药材均为粗末。每服五钱（15 g），水两盏（300 ml），煎至一盏（150 ml），口服［1］。主治阴虚火旺证的发热盗汗，面赤心烦，口干唇燥，大便干结，小便黄赤，舌红苔黄，脉数等症。李东垣称当归六黄汤为“治汗之圣药也”，并为历代医家所推崇。本研究对当归六黄汤中药配方颗粒与传统汤剂中盐酸小檗碱的含量进行比较，从有效成分含量变化的角度探讨其临床应用的科学依据。
       1  仪器与试药
        Aglient 1100高效液相色谱仪；(包括真空脱气机，自动进样器，四元泵，DAD 检测器)， HP1100/ WIND3D化学工作站。盐酸小檗碱对照品（批号：110773-200611，供含量测定用）购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。药材经贵阳中医学院董丽莎教授鉴定，当归为伞形科植物当归Angelica sinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria  baicalensis Georgi的干燥根，黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的干燥根茎，黄柏为芸香科植物黄皮树的干燥树皮Phellodendron chinense Schneid.。黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var. mongholicus (Bge.)Hsiao的干燥根。地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块茎。
           2  方法与结果
        2.1  中药配方颗粒、传统汤剂、阴性样品的制备
        2.1.1  中药配方颗粒（分煎）样品称取黄芪120 g，先加8倍量的水，煎煮1 h后过滤，滤渣加6倍量的水煎煮1 h，过滤，合并滤液，浓缩，减压干燥，粉碎。分别称取生地、熟地、黄连、黄柏、当归、黄芩各60 g，按上述方法进行制备，即得各味药材的浸膏粉（该提取工艺为商品化当归六黄汤中药配方颗粒生产工艺，由贵州宏宇药业提供）。
        2.1.2  传统汤剂（合煎）样品按处方比例称取各味药材粗粉，加20倍量的水， 煎煮至10倍量，过滤，浓缩，减压干燥，粉碎，即得传统汤剂样品（传统方法）。
        2.1.3  阴性样品按照处方比例称取除黄柏、黄连外的各味药材浸膏粉，混合均匀，即得分煎阴性样品；按照处方比例称取除黄柏、黄连外的各味药材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，浓缩，减压干燥，即得合煎阴性样品。
        2.2  色谱条件色谱柱：DIKMA ODS-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)，以乙腈－0.5%的三乙胺（磷酸调pH =3.00)（27:73）为流动相，流速：1.0 ml/min，检测波长：343 nm，柱温：30℃。
        2.3  对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4 h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成浓度为0.156 2 mg/ml的溶液，作为对照品溶液，备用。
        2.4  供试品溶液的制备分别精密称取干燥的分煎与合煎样品约0.4 g，置100 ml量瓶中，加盐酸∶甲醇(1∶100)稀释至刻度，称重，超声处理30 min，放冷，加盐酸∶甲醇(1∶100)补足减失溶媒，过滤，即得。
        对照品、样品色谱图如图1。
        a-盐酸小檗碱对照品  b-分煎样品  c-合煎样品
        图1  对照品及样品色谱图
        2.5  线性关系考察分别精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，10 ml置10 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度,摇匀。在上述色谱条件下进样10 μl，测定峰面积。以峰面积积分值(A)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为A=1 781.4X-3.471 8，r=0.999 97盐酸小檗碱在0.156 2～1.562 0 μg范围内线性关系良好。
        2.6  精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10μl，连续进样6次，在上述色谱条件下测定峰面积，结果RSD＝0.19％，表明精密度良好。
        2.7  重复性实验精密称取同一批分煎、合煎样品各6份，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件测定，计算盐酸小檗碱的含量，RSD分别为0.12%，0.19%。结果表明该方法具有良好的重现性。
        2.8  稳定性实验精密称取分煎、合煎样品各0.4 g，按供试品溶液的制备方法处理，分别在0，2，4，6，8 h进样，在上述色谱条件下测定，RSD分别为0.11％，0.05％，表明两种样品溶液在8h内稳定。
        2.9  加样回收率实验分别精密称取已知含量分煎、合煎样品各9份，加入适量阿魏酸对照品溶液，按供试品溶液制备方法处理，上述色谱条件下测定。结果见表1～2。表1  合煎样品加样回收实验结果表2  分煎样品加样回收实验结果
        2.10  样品的测定按供试液制备方法分别处理样品，在“2.2”色谱条件下进行测定，结果：分煎样品与合煎样品含量（mg/处方）分别为：360.83，255.15。在盐酸小檗碱出峰位置阴性对照液无干扰。
        2.11  分煎样品与合煎样品中平均含量的比较
        2.11.1  两种供试品精密度的比较分煎、合煎样品盐酸小檗碱含量分别为n1=6，-χ1 =360.83；n2=6， -χ2  =255.15 计算得S1=0.580 2，S2=0.321 6；f1=6-1=5，f2=6-1=5 查表得F0.05，5,5=5.05   根据公式F=S12S22=3.25
        F        2.11.2  两种样品中盐酸小檗碱平均含量的比较可求得合并标准偏差为：
        S=Σ（χ1i--χ1）2+Σ（χ2i--χ2）2（n1-1）+(n2-1)=0.4691
        t=-χ1--χ2Sn1n2n1+n2=506.97
        查表，当置信度为95%， f= n1+ n2-2=10时，t0.05,10=2.23。
        t> t0.05，10，分煎、合煎样品中盐酸小檗碱平均含量之间存在显著性差异。
       3  讨论
        在测定过程中，分别考察了①0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液－乙腈（28∶72）［2］；②乙腈-0.1 mol·L-1磷酸二氢钠溶液-0.025 mol·L-1十二烷基硫酸钠溶液 (50∶25∶25) ［3］；③乙腈－0.5％三乙胺（磷酸调pH 3.0）(27∶73)等流动相，结果以③为流动相时，保留时间适中，分离效果好且很好地消除拖尾现象。
        分别用盐酸－甲醇［4］（1∶100）、甲醇［2］为提取溶媒，进行考察。结果表明用盐酸－甲醇（1∶100）为提取溶媒，盐酸小檗碱的含量较高。
        分别考察超声处理15，30，45，60 min，结果表明30 min时盐酸小檗碱含量较高，且能够提取完全。
        当归六黄汤分煎样品中盐酸小檗碱含量比合煎样品高。组方中当归含有阿魏酸,在合煎过程中酸碱可能发生中和反应,从而导致合煎样品中小檗碱含量偏低。但中药复方成分复杂，其原因还需作进一步深入的研究。
       【参考文献】
         ［1］ 李 飞.方剂学，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2002：641.
       
       ［2］ 迟芳振，刘 群，李伟妮.黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定［J］.医药导报，2005，24（9）：821.
       
       ［3］ 周 芳. HPLC测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.中国中药杂志，2003，28(10)：984.
       
       ［4］ 晁若冰，张 浩，庄燕黎，等.高效液相色谱法测定黄连药材中小檗碱型生物碱的含量［J］.药物分析杂志，2003，23(5)：354.