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       【摘要】 
       目的就蒲公英多糖对小鼠抗疲劳作用效果及有效剂量进行研究。方法将蒲公英多糖分3个剂量组即0.2，0.5，0.8 g/kg 给小鼠灌胃,对照组为蒸馏水。21 d 后小鼠游泳造成疲劳，测定小鼠力竭游泳时间、血清尿素氮及肝糖原等指标。结果小鼠负重游泳时间明显延长，血尿素氮显著下降，肝糖原的含量明显升高。结论 蒲公英多糖的各个剂量组能有效提高小鼠的抗疲劳能力，其中多糖浓度0.5 g/kg剂量组效果最好。
       【关键词】  蒲公英多糖 小鼠 抗疲劳
       蒲公英为蒲公英属Taraxacum植物的统称，是常用的抗菌中草药，在动物医学和人类医疗保健等方面的应用源远流长。蒲公英适应性广，抗逆性强，抗寒又耐热，对光照要求不严，抗旱、抗涝能力较强，可在各种类型的土壤条件下生长，有较强的环境适应能力［1］。蒲公英属植物均可以药用，有清热解毒、消痈散结之功能，具有抗病原微生物、提高免疫力、利胆保肝、抗自由基延缓皮肤衰老等功效［2］。近年，随着对其开发利用价值的深入研究，特别是其医疗保健功能的被确认，引起了医学专家和营养学专家的关注。我国对多糖的研究，始于20世纪70年代，虽然起步较晚，但发展很快，到目前为止，人们发现多糖在抗肿瘤、抗病毒、防治心血管疾病、抗衰老以及增加免疫性等方面有独特的生物活性。但到目前为止，只有一些真菌多糖和为数不多的种子植物多糖被用于临床［3］。
        关于蒲公英多糖提取及抗肿瘤、抗突变、抗氧化等生物活性的研究仅见作者的几篇报道［4，5］。本实验就蒲公英多糖的抗疲劳作用特性进行了实验研究，以期对蒲公英活性多糖资源的开发利用提供有价值的实验依据。
       1  材料和方法
        1.1   材料实验用蒲公英为采自齐齐哈尔市区的东北蒲公英。
        1.2  多糖的提取按照文献［4］的方法制得。
        1.3  动物2～3月龄，昆明种雄性健康小鼠，共48只，体重（25±3）g，由吉林大学实验动物研究中心提供。动物饲料，由吉林大学实验动物研究中心提供。
        1.4  方法
        1.4.1  灌胃动物模型将实验动物小鼠分为4个组，即蒲公英多糖高、中、低剂量组（分别灌胃蒲公英多糖水溶液0.8,0.5,0.2 g/kg）和对照组，每组12只小鼠，采用灌胃法，每天以20 ml/kg·bw的容量给小鼠灌胃不同剂量的多糖溶液，对照组给予等量蒸馏水。1次/d，连续21 d。第22天进行各项抗疲劳指标的测定。
        1.4.2  运动模型对照组与实验组于灌胃第15天开始进行适应性游泳训练，游泳时间由10 min/d开始，每天递增5 min至第20天，力竭判断标准为按小鼠体重5%负重游泳至小鼠沉入水底8 s不浮起，捞出后无法完成翻正反射。
        1.4.3  测试指标与方法
        力竭游泳时间：末次给小鼠受试剂30 min后，采用负重方式于鼠尾系一质量为小鼠体重5%的铅块，将小鼠置于水深30 cm的游泳箱中，水的温度控制在30℃左右。强迫游泳至力竭（沉入水底8 s不动为止），记录游泳时间。
        血清尿素氮的测定：①血清的制备：末次给小鼠受试剂30 min后，将小鼠不负重置于水深30 cm的游泳箱中，水的温度控制在30℃左右，游泳90 min，休息30 min后立刻尾部采血，采血大约0.5 ml（不加抗凝剂）。置4℃冰箱约3 h，血凝固后2 500 r/min离心15 min，取血清并测定血清尿素氮值。②尿素氮测定方法：按文献［6］方法测定。
        肝糖原的测定：①肝糖原的提取：末次给小鼠受试剂30 min后，立刻脱颈处死，取肝脏，迅速以滤纸吸去附着的血液。称取约1 g，置乳钵中，加洗净细砂少许及10%三氯乙酸1 ml，研磨。再加5%三氯乙酸2  ml，继续研磨，至肝脏组织已经充分磨成肉糜状为止。然后以2 500 r/min离心10 min。将上清液转入另一离心管并量取体积，加入同体积的95%乙醇，混合后，静置10 min。此时糖原成絮状沉淀析出。沉淀溶液以2 500 r/min离心10 min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上2 min。沉淀内加入蒸馏水1 ml，用玻璃棒搅拌沉淀至溶解。②肝糖原的测定：按文献［7］方法蒽酮-浓硫酸法测定肝糖原含量，每组重复3次，取平均值。
        1.4.4  数据处理用Sigmaplot scientific Graphing system软件对数据进行处理与分析。
       2  结果
        2.1  力竭游泳时间末次给小鼠受试剂30 min后，采用负重方式于鼠尾系一质量为小鼠体重5%的铅块，将每组小鼠强迫游泳至力竭（沉入水底8 s不动为止），记录游泳时间。见表1。
        表1  力竭游泳时间
        组别浓度C/g·kg-1平均时间t/min对照0.073.74蒲公英多糖低剂量0.281.87蒲公英多糖中剂量0.5103.16*蒲公英多糖高剂量0.894.18*
        与对照组比较，*P＜0.05
        表1为小鼠负重力竭游泳时间，3个剂量组与对照组比较，均能明显延长小鼠负重游泳时间，其中中剂量组明显增加小鼠的游泳时间，高剂量组与对照组比较，也能明显增加小鼠的游泳时间。表明蒲公英多糖能增加小鼠抗疲劳的能力。
        2.2  血清尿素氮的含量末次给小鼠受试剂30 min后，将小鼠置于水深30 cm的水桶中，游泳90 min，休息30 min后立刻尾部采血，离心,得到血清，取血清并测定血清尿素氮含量见表2。
        表2  不同剂量组的血清尿素氮含量
        组别浓度C/g·kg-1血清尿素氮C/mmol·L-1对照0.09.0蒲公英多糖低剂量0.28.2蒲公英多糖中剂量0.57.9*蒲公英多糖高剂量0.88.0
        与对照组比较，*P＜0.05
        表2可以看出,用药各组别的小鼠血清尿素氮含量均低于对照组,其中中剂量组与对照组的差异具有显著性意义,延缓疲劳效果最佳，表明蒲公英多糖能减少或在一定程度上抑制疲劳小鼠血清尿素氮产生。
        2.3  肝糖原的含量  实验测得小鼠肝糖原含量见表3。
        表3  不同剂量组的肝糖原含量
        组别浓度C/g·kg-1肝糖原含量C/g·（100 g)-1对照0.01.756蒲公英多糖低剂量0.22.213*蒲公英多糖中剂量0.52.342**蒲公英多糖高剂量0.82.230*
        与对照组比较，*P＜0.05；与对照组比较，**P＜0.01
        表3可以看出，各受试剂组小鼠的肝糖原含量均高于对照组，且与对照组差异均有显著性意义，中剂量组与对照组有极显著差异（P＜0.01），表明蒲公英多糖具有促进肝糖原储备的作用。
       3  讨论
        疲劳是极其复杂的生理状态，一般指机体生理过程不能持续其功能在特定水平上，或不能维持预定的运动强度致使身体和精神状态的下降，从而导致工作能力和工作效率的衰退。能源物质的消耗、代谢物质的堆积是产生疲劳的重要原因。运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最有力的宏观表现，游泳时间的长短可以反应动物运动疲劳的程度。本实验直接观察到了蒲公英多糖能延长负重小鼠的游泳时间。3个受测试剂量组与对照组进行比较，均能明显延长小鼠负重游泳时间，其中中剂量组（0.5 g/kg）效果最好。尿素氮是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一，血中尿素氮来源于肝脏，通过肾脏随尿液排出体外。3个受测试剂量组的小鼠血清尿素氮含量均低于对照组,其中中剂量组(0.5 g/kg)与对照组的差异显著,表明蒲公英多糖能减少疲劳小鼠血清尿素氮产生。糖原的储存量可直接影响机体的运动能力。3个受测试剂量组小鼠的肝糖原含量均高于对照组，中剂量组与对照组比较差异极显著，表明蒲公英多糖能够通过增加能量物质的储备，为机体提供更多的能量来达到抗疲劳的目的。综上所述，通过对灌胃小鼠的持续浮水时间、血清尿素氮含量、肝糖原实验发现蒲公英多糖对小鼠有抗疲劳作用，在本实验条件下，以多糖浓度0.5 g/kg为最佳。
       【参考文献】
         ［1］ 葛学军，林有润，翟大彤.中国蒲公英属植物的初步整理［J］.植物研究，1998,18(4):377.
       
       ［2］ 陈 华，李银心.药蒲公英再生体系的建立和优化［J］.生物工程学报，2005,21(2)：244.
       
       ［3］ 张惟杰.糖复合物生化研究技术，第2版［M］.杭州：浙江大学出版社，2003：32.
       
       ［4］ 付学鹏，杨晓杰.蒲公英多糖的提取及含量测定［J］.现代食品科技.2007，23（5）：37.
       
       ［5］ 付学鹏，杨晓杰.蒲公英不同器官多糖抗氧化性研究［J］.食品研究与开发，2008,29(3)：28.
       
       ［6］ 魏旭东. 3种血清尿素氮测定方法的比较［J］.重庆医学.1997，26（4）：246.
       
       ［7］ 毕富永. 生物化学及分子生物学实验教程［M］.合肥：安徽科学技术出版社，2006：310.