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       【摘要】 
       目的 研究吐温80对黄连中小檗碱提取率的影响。方法综合考虑吐温80用量，H2SO4浓度，H2SO4用量三方面因素，按照正交实验设计的要求确定最佳的提取条件。结果吐温80固液比为2∶3，H2SO4浓度为0.2 % ，H2SO4固液比为1∶35时黄连中盐酸小檗碱的提取率最高 。结论吐温80可促进黄连中小檗碱提取率的增加。
       【关键词】  吐温80; 黄连; 小檗碱
       Study on Extraction of Berberine from Coptis chinensis  by  Polysorbate80
       XU Yan ,HANG Tianjiao
       Institute of Bioscience and Technology，Shenyang Agricultural University,Shenyang 110161,China
       Abstract:Objective To study the including effect of polysorbate-80 on extraction of berberine from Coptis chinensis. MethodsOrthogonal experiment design was conducted to optimize excraction conditions.Three factors,including the content of polysorbate80， concentration of sulfuric acid, content of sulfuric acid ,were considered. ResultsThe optimum conditions of extraction were obtained as follows: ratio of solid-liquid of polysorbate-80 was 2∶3, concentration of sulfuric acid was 0.2 %, ratio of solid-liquid of sulfuric acid was1∶35.ConclusionPolysorbate-80 can promote the extracting rate of berberine from coptis chinensis.
       Key words:Polysorbate-80;   Coptis chinensis;  Berberine
       
       黄连为植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎，是一种著名的中药材。始载于东汉《神农本草经》。以上3种分别习称为“味连”“雅连”及“云连”，列为上品，其功能清热燥湿，泻火解毒，临床主要用于胃肠湿热和痛肿疗毒等症的治疗［1］。其中以小檗碱的含量最多，也是最有效的成分之一，其对心血管系统、神经系统和消化系统具有良好的治疗和保健作用。
       
       表面活性剂，其基本应用原理是表面活性剂在溶液中的胶团化作用和在界面上吸附作用。因胶团化作用而形成的胶团(在非水溶剂中形成反胶团)或其它有序组合体使得表面活性剂溶液有独特的物理化学性质，其中增溶作用有重要地位。某些难溶或不溶的有机物可因表面活性剂胶团的形成而大大提高其溶解度，这种现象称为增溶(或加溶)作用(solubilization)。
        吐温80（英文名：Tweenum 80）；是一种非离子亲水性的表面活性剂，淡黄色粘稠状液体；微有脂肪臭，味微苦。易溶于水、乙醇、氯仿、乙醚，不溶于液状石蜡。应用广泛，除作乳化剂外，也用作某些水中难溶药物的增溶剂，物理吸附于脂质双面表层，其聚氧乙烯基从脂质双层中伸出，致密覆盖在双层表面，形成有一定厚度的亲水相，对植物粉末产生润湿作用，对不同分子结构的难溶物质增溶作用不同，降低提取溶剂乙醇的体积分数，降低提取成本，因此用吐温80作为药物的增溶剂有较高的实用价值［2］。
       1  材料与仪器
        黄连，购自于沈阳东北大药房，经沈阳农业大学生物科学技术学院高级实验师陈贵老师鉴定为味连Coptic chinensis Franch；盐酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检定所。所用试剂均为国产分析纯。722-型光栅分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1 小檗碱标准曲线的制备［3］精密称取10 mg小檗碱纯品，用95 %的乙醇定容于50 ml的容量瓶中，摇匀，备用。从50 ml容量瓶中精密量取0，0.2，0.4，0.8，1.6，2.0 ml的小檗碱溶液，置于6个50 ml容量瓶中，再分别将其用95 %的乙醇定容到50 ml，振荡静置。制成一系列不同浓度梯度的溶液。用分光光度计在348 nm下测定A值,求出标准曲线为y = 0.251 3x + 0.007 6。
       2.2  传统稀H2SO4 浸渍法提取
       称取2.000 6 g黄连粉末倒入一个小烧杯中，按固液比1∶30的比例加入60 ml 0.2 %的H2SO4溶液，浸泡1h，过滤，得到硫酸小檗碱。用石灰乳调pH 7～8，抽滤。再用10 %的盐酸小檗碱将滤液pH调至2～3，然后加入滤液体积3 %～5 %的NaCl,静止30 min后抽滤，得到盐酸小檗碱的粗提物，在348 nm下测其A值。得盐酸小檗碱含量为101.8 mg/g。
       2. 3  表面活性剂吐温80对黄连中小檗碱提取率的影响
       2.3.1  吐温80用量对黄连中小檗碱提取率的影响
       称取干燥的黄连粗粉2 g左右，置于100 ml烧杯中，按固液比（1∶30）加入60 ml的0.2 % H2SO4 ，然后加入吐温80，加入量分别为固液比2∶1，1∶1，2∶3，1∶2，按稀H2SO4粗提法测定小檗碱的含量。结果见图1，由图可知，吐温80用量为固液比1∶1时，小檗碱提取率最高。表1  正交实验因素水平（略）表2  L9（34）正交实验结果（略）
       表 3  方差分析结果（略）
       2.3.2  H2SO4浓度对小檗碱提取率的影响
       称取干燥的黄连粗粉2 g左右，置于100 ml烧杯中，按固液比（1∶30）加60 ml H2SO4，加入3 ml吐温80，选取H2SO4的浓度分别为0.2 %,0.4 %,0.6 %，0.8 %。处理后按稀H2SO4粗提法分别测定黄连中小檗碱的含量。结果见图2，由图2可知，当H2SO4浓度为0.2%时，小檗碱提取率最高。
       2.3.3  H2SO4 用量对黄连小檗碱提取率的影响
       称取干燥的黄连粗粉2 g左右，置于100 ml烧杯中，按固液比（1∶25，1∶30，1∶35，1∶40）加入H2SO4，加入2 ml吐温80。处理后按稀H2SO4粗提法分别测定黄连中小檗碱的含量，结果见图3，由图3可知，H2SO4用量为固液比1∶35时，小檗碱提取率最高。
       2.4  正交设计实验
       在单因素基础上，本实验选取3个有代表性且对小檗碱的提取率影响较大的因素作为正交设计的三因素，即吐温80用量，H2SO4浓度，H2SO4用量。按照L9（34）正交实验要求，称取2 g左右黄连粉末于100 ml烧杯中，加入对应量的吐温80，在H2SO4不同的浓度和用量下进行实验，得到不同的小檗碱含量。
        由极差分析可知，影响因素: H2SO4固液比 > 吐温80固液比> H2SO4浓度。通过数据处理，得出最佳条件：吐温80固液比为2∶3， H2SO4浓度∶0.2%， H2SO4 固液比为1∶35,以A3B1C2为最佳工艺。 
       2.5 定性检测实验
       本实验为了确定在用表面活性剂提取后，小檗碱的结构、化学性质不发生变化，采用薄层层析法进行检测。方法是在一块硅胶薄层板上，将小檗碱纯品、不加表面活性剂提取的小檗碱和用表面活性剂提取的小檗碱分别点样，干燥后，将其放在（氯仿∶甲醇∶冰醋酸=7∶1∶2）的展开剂中展开，观察结果。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
       3 讨论
        吐温80能提高植物有效成分的提取率,主要是利用它对植物粉末产生润湿作用,对提取溶剂有促进渗透的作用以及对提取的有效成分产生增溶作用。对药物的增溶作用是靠临界胶束的作用,而不同的药物分子结构不同,分子极性也不同,因此在不同酸度下，不同的吐温80用量对小檗碱的提取量也不同。
       【参考文献】
         　　［1］舒华，向丽华. 黄连药理作用及临床应用［J］.甘肃中医，2004，17（12）：5.
       
       ［2］肖进新，赵振国.表面活性剂应用原理［M］.北京：化学工业出版社，2003.
       
       ［3］薛慧清.分光光度法测定康尔乐洗涤剂中小檗碱类的含量［J］.中国中药杂志，2003，28（6）：571.