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       【摘要】 
       目的研究影响板蓝根中靛玉红含量的因素。方法考察不同来源以及不同性状板蓝根中靛玉红含量的差异，同时对靛玉红提取工艺、靛玉红的稳定性作进一步的研究。结果来源不同、性状不同、提取工艺不同的板蓝根中靛玉红含量不同。结论通过对板蓝根中靛玉红含量考察，对指导用药有重要作用。
       【关键词】  板蓝根；靛玉红
       Determination of Indirubin in Indigowoad Root and  its Affecting Factors
       XU Yan ,  LIU Xin
       （Institute of Biosc Tience and Technology，Shenyang Agricultural University,Shenyang 110161,China ）
       Abstract:ObjectiveTo study the factors which affect the mass of indirubin in indigowoad root. MethodsResearched the difference of the content of Indirubin because of different places and different characteristics. And at the same time studied the different extracting workmanships and the stability of indirubin in chloroform.ResultsThe content of Indirubin in indgowoad root of different places,different characteristics and different extracting workmanships was different. ConclusionIt has important significance to use the herb through the content research of Indirubin in indigowoad root.
       Key words:Indigowoad Root;   Indirubin
        板蓝根,别名靛青根、蓝靛根、靛根，为十字花科菘蓝属植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根，具有清热、解毒、凉血、利咽之功效，用于治疗瘟毒发斑、高热头痛、大头瘟疫、烂喉丹痧、肝炎、流行性感冒等。板蓝根内含靛玉红、吲哚苷、多种氨基酸、β-谷甾醇、植物性蛋白、糖类等成分［1］。本研究目的在于利用分光光度法测定不同板蓝根中靛玉红的含量，分析不同来源、不同产地板蓝根中靛玉红含量的差异，同时利用不同的实验方法，考察影响板蓝根中靛玉红含量的主要因素，这其中包括对靛玉红稳定性的考察以及板蓝根颜色、性状、提取工艺等对靛玉红含量的影响。
       1  器材与方法
       1. 1  器材
       板蓝根购自于辽宁省。靛玉红(中国药品生物制品检定所)；T22型光栅分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）；干燥箱（南京实验仪器厂，熊猫DG30/H－ⅡA型电热干燥箱）；电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司，JA2103型电子天平）；恒温水浴锅（HH－6，国华电器有限公司）。所用试剂均为国产分析纯。
       1.2  方法
       1.2.1  板蓝根氯仿抽提液的制备
       将板蓝根置烤箱65～70℃恒温8 h后粉碎，精密称量板蓝根，氯仿热回流提取2 h，过滤，重复提取2次，合并氯仿液，回收氯仿至氯仿液仅余5 ml备用。
       1.2.2  标准曲线的绘制
       向圆底烧瓶中加入19.8 mg靛玉红标准品于250 ml容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，反复摇匀后得标准靛玉红氯仿溶液。用移液管精密吸取各0.25，0.5，0.75，1.00，1.25，1.50，1.75，2.00，2.25，2.50 ml置10 ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度，以氯仿为空白，在530 nm处测定其吸收值绘制曲线并计算得回归方程［2］。
       1.2.3 板蓝根药材中靛玉红含量的测定
       精确称取10 g样品板蓝根，以氯仿抽提2 h，过滤回收滤液，重复1次抽提，合并滤液。将滤液移入100 ml容量瓶中，定容后测其在531 nm处的吸光度值。根据标准曲线计算样品板蓝根的靛玉红含量。
       1.2.4 影响板蓝根中靛玉红含量的因素
        不同来源的板蓝根药材中靛玉红含量的测定与比较：取不同单位提供的板蓝根药材样品，研磨成粉末状，依上法进行操作，测定其各自含量。
        同一产地，不同直径的板蓝根中靛玉红含量的测定与比较：取同一板蓝根药材样品（板蓝根系购于沈阳成方圆大药房），按饮片直径分成大、中、小3档，分别依上法进行测定其靛玉红含量。
        外皮颜色差别较大的板蓝根药材中靛玉红含量的测定与比较：总的来说，板蓝根药材颜色差异并不明显，以褐色为主，但有个别来源的板蓝根药材颜色较浅，但仍呈褐色，而有的板蓝根药材颜色则明显较其它药材深，呈深褐色。取外皮颜色相差较大的板蓝根药材3份，依上法对其靛玉红含量进行测定。
       
       板蓝根药材中靛玉红提取工艺与靛玉红提取效果关系的分析：①氯仿提取工艺样品溶液的制备方法：同“1.2.3”项。②乙醇提取工艺样品溶液的制备（以95%乙醇提取靛玉红为例）：取10 g购于沈阳成大方圆药房的板蓝根，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入30 ml 95%乙醇抽提2 h，过滤后再抽提2 h，过滤，合并2次滤液，回收乙醇，氯仿滤液定容至100 ml，得样品溶液备用。其它以50 %乙醇、75 %乙醇提取的靛玉红溶液的制备类似此法。③水提取工艺样品溶液的制备：10 g购于沈阳成方圆大药房的板蓝根干燥根，粉碎，加入30 ml水煮沸提取2 h，过滤后再煮沸提取2 h，过滤，合并两次滤液，蒸干，加入氯仿将其定容至100 ml，得样品溶液备用。
       1.2.5  稳定性实验
       取靛玉红氯仿溶液1ml置于10 ml的刻度试管中，分别于3，6，12，24，36 h测定其氯仿溶液浓度随时间变化情况。
       2  结果
       2.1  薄层层析法对靛玉红的分离检测 在用薄层层析法检测靛玉红时，以9：1比例的氯仿与丙酮作展开剂，分离效果十分明显，靛玉红（粉红色）和靛蓝（蓝色）所成谱带清晰分布于薄层板上。图略。
       2.2  标准曲线的绘制 根据靛玉红溶液浓度和其在531nm处的吸光度可绘制靛玉红标准曲线，其回归方程为Y = 0.524X + 0.015 8，r=0.994 3。
       2.3  影响板蓝根中靛玉红含量的因素
       2.3.1  不同来源的板蓝根药材中靛玉红含量的测定结果见表1。表1  不同来源的板蓝根药材中靛玉红含量的测定结果比较（略）
       2.3.2  板蓝根直径对靛玉红含量影响的考察  同一产地、不同直径的板蓝根中靛玉红的含量亦有差异。测定结果见表2。表2  板蓝根直径对靛玉红含量的影响（略）
       2.3.3  外皮颜色差别较大的板蓝根药材中靛玉红含量的测定与比较 选择颜色差异较大的3份板蓝根药材，经含量测定结果见表3。表3  板蓝根外皮颜色差异对靛玉红含量的影响（略）
       
       上述实验结果表明，来源不同的板蓝根药材中靛玉红含量差别显著。从板蓝根直径对靛玉红含量影响来看，靛玉红含量随板蓝根直径的增大而升高，但不成正比升高，直径为0.75 cm的板蓝根中靛玉红含量明显高于直径为0.25 cm和0.5 cm的板蓝根中靛玉红含量。而从颜色对靛玉红含量的影响来看，不同产地、不同批号的板蓝根在颜色差异上不具有可比性。而对于产地相同，板蓝根产品，颜色较深的板蓝根的靛玉红含量稍高于其它板蓝根，中等颜色的与浅色板蓝根的靛玉红含量则没有发现明显差异。
       2.4 板蓝根药材中靛玉红提取工艺与靛玉红提取效果关系的分析 通过实验得知，靛玉红提取工艺不同对其提取率的影响较大，氯仿、95 %乙醇、75 %乙醇、50 %乙醇及水对靛玉红的提取效果对比结果见表4。表4  提取工艺对靛玉红含量影响（略）
        从表4中可知，对靛玉红的提取率最高的是75 %的乙醇，是几种提取工艺中提取效果最好的。水对靛玉红的提出率最低。因此可知板蓝根中靛玉红不适宜用水作溶剂提取。
       2.5  氯仿溶液中靛玉红的稳定性考察 靛玉红在氯仿溶液中并不稳定存在，其氯仿溶液浓度随时间变化情况如图1。
       3  讨论
       
       在靛玉红的吸收光谱中，存在292 nm和531 nm两处吸收峰值，但292 nm处靛蓝对靛玉红的干扰较大［3］，故采用531 nm作为靛玉红最大吸收波长。
        传统上以苯:氯仿:丙酮＝5∶4∶1的比例进行展开效果较好［4］，但本实验通过比较表明，以氯仿∶丙酮＝9∶1展开效果较好，故只采用氯仿丙酮作为展开系统。
       【参考文献】
         　　［1］国家医药管理中草药情报中心站．植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社，1993：606.
       
       ［2］张建军，薄少英，张玉霞，等.板蓝根提取工艺的探讨［J］.中国中药杂志，1990，15(5)：31.
       
       ［3］刘依，韩鲁佳，阎巧娟，等.板蓝根中靛蓝和靛玉红的提取及其质量分数的测定［J］.中国农业大学学报，2003,8（6）：5.