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       【摘要】 
       目的确定大黄、何首乌中大黄素与大黄酚的含量。方法甲醇回流方法提取大黄素与大黄酚，高效液相色谱方法测定大黄素与大黄酚含量。结果大黄中大黄酚的含量是何首乌的83倍，何首乌中大黄素的含量是大黄的3倍。结论这为大黄与何首乌药材的质量控制，制药企业的合理选料及研究大黄素、大黄酚在不同植物中的分布提供技术参数和理论指导。
       【关键词】  大黄；何首乌；大黄素；大黄酚；含量比较
       Determination of Emodin and Chrysophanol Contents in Rheum officinale Baill. and Poly gonummultiflorum Thunb.
       ZHOU Jiayu, TANG Jia, LIAO Hai, SONG Liangke, LIAO Zheng
       (College of Pharmacology, Southwest Jiaotong University, Emei 614202, China)
       Abstract:ObjectiveTo determine the emodin and chrysophanol contents in Rheum officinale Baill. and Polygonum multiflorum Thunb. .MethodsThe emodin and chrysophanol were extracted by means of methanol-reflux, the contents of emodin and chrysophanol were determined by HPLC method.ResultsThe emodin content in Rheum officinale Baill. was 83 times of that in Polygonum multiflorum Thunb.. The chrysophanol content in Polygonum multiflorum Thunb. was three times of that in Rheum officinale Baill. ConclusionThis may provide technical parameters and guidance for quality control of Rheum officinale Baill. and Polygonum multiflorum Thunb., rational selecting materials for enterprises, and studying the distribution of emodin and chrysophanol in various plants.
       Key words:Rheum officinale Baill.；Polygonum multiflorum Thunb.;    Emodin; Chrysophanol;  Comparison of contents
         
       大黄与何首乌为常用的中药。大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.，唐古特大黄Rheum tanguticum Maximex Balf. 或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎，味苦、性寒，具有清热泻下、抗菌、行淤化积、消炎止血、抗肿瘤等多方面的功效［1］；何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，具有抗衰老、增强免疫力、抗菌、泻下、调节血脂之功效［2］。大黄与何首乌的成分复杂，发挥泻下、抗菌、抗肿瘤、抗衰老、调节血脂作用的成分主要是大黄素、大黄酚等蒽醌类化合物［3，4］。本实验在相同实验条件下，测定了大黄、何首乌中大黄素与大黄酚的含量，并做比较分析，旨在为大黄与何首乌药材的质量控制、为制药企业的合理选料、研究大黄素、大黄酚在不同植物中的分布提供技术参数和理论指导。现报道如下。
       1 仪器与材料
        岛津高效液相色谱系统：ODS-C18色谱柱，LC-6AD泵，SPD-M10AVP紫外检测器，Shidamzu色谱工作站；FA21004电子天平(上海天平)；Millipore超纯水制备器和0. 45μm滤膜；KQ2200DB超声波；川产大黄与何首乌药材购自成都杏林大药房，经本院宋良科教授鉴定为药用大黄Rheum officinale Baill.与何首乌Polygonum multiflorum Thunb.；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110756-200110)，大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号110796-200514）；甲醇为色谱纯；其余试剂均为国产分析纯。
       2 方法与结果
       2.1  色谱条件
       色谱柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；紫外检测波长254 nm；流速0.8 ml/min；柱温：30℃；流动相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15)。以大黄素和大黄酚色谱峰，保留时间分别为6.50和9.06 min，理论塔板数按大黄素峰计算不低于6 000。
       2.2  对照品溶液的制备与标准
       曲线的制作精密称取大黄素对照品3.0 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液5 ml于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，得浓度为15 μg/ml的大黄素对照溶液，以0.45 μm微孔滤膜过滤。分别进样1，2 ，4，6，8，10 μl，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，大黄素的浓度为横坐标，绘制大黄素的标准曲线。回归方程为A=7 117 826.69M-2 029.05，r=0.999 9，表明大黄素在0.015～0.300 μg范围内有良好的线性关系。
       
       精密称取大黄酚对照品6.0 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液5 ml于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，得浓度为30 μg/ml的大黄酚溶液。再用逐级稀释法配成浓度为0.3，0.6，0.12，3，6 μg/ml的对照品溶液，以0.45 μm微孔滤膜过滤。按上述色谱条件分别进样10 μl，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，大黄酚的浓度为横坐标，绘制大黄酚的标准曲线。回归方程为A=7 825 522.38M+3 776.91，r=0.999 9，表明大黄酚在0.003～0.600 μg范围内有良好的线性关系。
       2.3  精密度与拖尾因子考察配制
       大黄素含量为15 μg/ml和大黄酚含量为30 μg/ml的混合对照品溶液，按上述色谱条件，20 μl连续5次进样，纪录峰面积与分离度。精密度实验中，大黄素的RSD为1.20%，大黄酚的RSD为1.31%。大黄素的拖尾因子为1.016，大黄酚的拖尾因子为0.951，峰型良好。
       2.4  重现性实验
       取同一份大黄样品溶液，连续进样6次，每次进样体积为10 μl，结果表明重现性良好，大黄素、大黄酚RSD分别为0.20%和0.48%。
       2.5  稳定性实验
       取大黄供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24，48 h各进样1次，10 μl/次，结果表明供试品溶液在48 h内稳定性良好，大黄素、大黄酚RSD分别为 0.73%和0.43%。
       2.6 加样回收实验
       取已知含量的大黄药材适量，精密称定后，分别加入混合对照品溶液（含大黄素对照品0.1 mg，大黄酚对照品0.6 mg）。按“供试品溶液的制备”项下的方法制得供试品溶液6份，按上述色谱条件分别进样10 μl各2次，记录峰面积。结果见表1，大黄素平均回收率为101.20%，RSD为1.99%；大黄酚平均回收率为100.37%，RSD为1.35%，表明该法的回收率良好。表1  总大黄素和大黄酚的回收率考察（略）
       2.7  供试品制备与含量测定
       各取6份大黄和何首乌粉末（过4号筛）约0.15 g，精密称定，置100 ml锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 ml，置100 ml锥形瓶中，挥去甲醇，加8%盐酸10 ml，超声处理2 min，再加氯仿10 ml，加热回流1 h，冷却。回流液移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次约10 ml，合并氯仿液，移至100 ml锥形瓶中，挥去氯仿至干，残渣加甲醇溶解，在10 ml容量瓶中定容。用0.45 μm微孔滤膜滤过后待用。取大黄和何首乌的供试品溶液，按上述色谱条件分别进样10 μl，记录峰面积，计算含量。结果见表2。高效液相色谱见图1。表2  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
        实验结果表明，大黄中大黄素的含量为0.13%，大黄酚含量为0.83%；何首乌中大黄素的含量为0.37%，大黄酚含量为0.01%。比较发现，大黄中大黄素的含量仅是何首乌的1/3，而大黄酚的含量却是何首乌的83倍，说明大黄主产大黄酚，而何首乌主产大黄素，这为制药工业的选料提供了参考，若要制备大黄酚，主选大黄；若要制备大黄素，则选何首乌。
       
       本实验采用甲醇-0.1%磷酸水溶液(85∶15)作为流动相，在此条件下大黄素、大黄酚与其它组分基本达到基线分离，分离效果较为满意。本实验在相同实验条件下，同时测定大黄和何首乌中大黄素与大黄酚的含量，其含量比较结果更具参考价值。
        由于本实验只测定了大黄素与大黄酚的含量，未能参照2005版《中国药典》判断大黄药材的质量优劣。但根据2000版《中国药典》Ⅰ部［5］规定大黄中测得的大黄素与大黄酚的总量不得少于0.5%。本实验中所使用的大黄中大黄素与大黄酚的总量为0.96%。说明川产大黄的质量是优良的。根据2005版《中国药典》Ⅰ部［6］规定何首乌大黄素含量不得低于0.05%，通过“甲醇回流”测得的大黄素含量为0.37%，说明川产何首乌品质是优良的。
       【参考文献】
         　　［1］李秀才. 大黄的研究进展［J］. 中国药学杂志，1998，33（10）：581.
       
       ［2］张志国，吕泰省，姚庆强. 何首乌蒽醌类化学成分研究 ［J］. 中草药，2006，37（9）：1311.
       
       ［3］金雪梅，金光洙. 天然蒽醌抗肿瘤作用机制研究进展［J］. 延边大学医学学报，2006，29（3）：221.
       
       ［4］罗志毅，黄新，包国荣. 大黄中主要成分清除超氧阴离子自由基的ESR研究［J］. 中华中医药学刊，2007，25（3）：612.
       
       ［5］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2000：18.
       
       ［6］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：122.