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       【摘要】 
       目的测定香青兰全草中总三萜酸成分含量。方法以齐墩果酸为指标，采用香草醛-冰醋酸 及高氯酸显色后用分光光度法测其含量。结果齐墩果酸的线性范围是8.48～42.4 μg·ml-1，测得香青兰中总三萜酸含量约为14.9 mg/g，RSD为1.23%。结论 用大孔吸附树脂对香青兰除杂后富集利用显色法测定总三萜酸是可行的，该方法具有简便、快速、准确、重复性好等优点。
       【关键词】  香青兰； 三萜酸； 大孔吸附树脂； 比色法； 齐墩果酸
       Determination of the Content of the Tritepenoidic Acid in Dracocephalum moldavica L. by Macroreticular Resin-Colorimetric Method
       TIAN Shuge， WANG Liangyu，LIU Hongbing,YAN Xue-hua
       (1.College of Traditional Chinese Medicine，Xinjiang Medical University,Urumuqi 830054 China；2.People"s Hospital of Chongqing Bishan County People"s Hospital, Chongqing 402760,China)
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of  the Tritepenoidic Acid in Dracocephalum moldavica L .MethodsWith oleanolic acid as the standard,5% Vanillin-Acetic acid and perchloric as the developer,colorimetric method was applied. ResultsA good linearity was found in the concentration range of 8.48～42.4 μg·ml-1 for oleanolic acid, the average recovery was 99.1%with RSD 1.23%.The average content of Dracocephalum moldavica L.was 14.9 mg·g-1. ConclusionMacroreticular resin-Colorimetric method is suitable for the determination of tota1 tritepenoidic acid from Dracocephalum moldavica L．This method is simple，the result is stable，and has good repeatability.
       Key words：Dracocephalum moldavica L；  Tritepenoidic Acid；  Macroreticular resin；  Colorimetric method ；  Oleanolic acid
       
       香青兰Dracocephalum moldavica L.为唇形科青兰属植物，分布于华北、东北、西北等省区，新疆以南疆和东疆栽培较多。其药用全草为干燥地上部分，有泻火、清热、止痛、止血等功效。在维吾尔医和民间常用于治疗冠心病及高血压病、寒性神经性头痛、寒性感冒、气管炎等疾病［1，2］。近年来经药物成分分析，香青兰主要含有挥发油［3］、氨基酸［4］、微量元素［5］、萜类、黄酮类、多糖等［6］，其中含有三萜类化合物齐墩果酸［7］、熊果酸等［8］。A. Kakasy等［9］利用HPLC与GC-MS分析了香青兰中非挥发性成分，V.Povilaitytoee等［10］研究了香青兰的抗氧化活性，洪秀芳等［11］做了香青兰治疗冠心病、心绞痛的疗效分析研究，鉴于香青兰临床疗效显著，有进一步研究的价值，对其总三萜酸成分进行了含量测定研究。现报道如下。
       1  材料
       1.1  仪器S54 UV－Vis Spectraphotometer 54 ,S54PC紫外可见分光光度计数据处理软件包（上海棱光技术有限公司），RE－52旋转式蒸发器（上海安亭电子仪器厂），YOKO－SY紫外线分析摄影仪（武汉药科新技术开发公司），BS110S电子天平（sartorius德国产），KQ－400DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），YOKO－BD薄层电动点样仪（武汉药科新技术开发公司），大孔吸附树脂（HPD－100型沧州宝恩化工有限公司）。
       1.2  药材香青兰（购于新疆乌鲁木齐，自治区维吾尔医院）药材经新疆医科大学中医学院主任药师李永和鉴定。
       1.3  试剂齐墩果酸标准品(中国药品生物制品检定所0709-9803)，所用其他试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  标准品溶液的制备  
       精密称取齐墩果酸标准品10.6 mg，用无水乙醇定容于25 ml容量瓶中，即得0.424 mg/ml的齐墩果酸标准品溶液。
       2.2   供试品溶液的制备
       2.2.1  回流提取     
       称取香青兰全草5.0 g，用甲醇回流提取6 h 至无色，蒸干后再用甲醇溶解并定容于50 ml容量瓶中。
       2.2.2  富集总三萜酸
       取3 ml定容后的甲醇溶液至大孔吸附树脂上，分别用40 ml的水，30%乙醇，50%乙醇，75%乙醇、无水乙醇重复洗脱两次，定量收集，每份40 ml，按齐墩果酸的硅胶薄层层析鉴别方法进行定性检查，待无水乙醇收集液呈阴性后，方终止收集，共有8份。
       2.3 显色反应分别取4 ml 75%，无水乙醇收集液在水浴中蒸干，加入0.5 ml 5%香草醛冰醋酸和0.8 ml高氯酸，在60℃的水浴中加热10 min，取出置冰水中冷却2～3 min，加冰醋酸定容至10 ml，摇匀后在560 nm处测定吸收值。
       2.4  波长的选择齐墩果酸与香草醛-冰醋酸及高氯酸显色后，可在560 nm处有最大吸收且空白对照无干扰。
       2.5  标准曲线的绘制精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml 按显色反应的步骤在560 nm处测定吸收值，以吸收度为横坐标，齐墩果酸为纵坐标作标准曲线，回归方程为：Y=68.236X+3.761，r=0.996 8。
       2.6  样品含量测定从定容后的50 ml香青兰甲醇溶液中吸取3 ml的甲醇液上样于大孔吸附树脂，后按供试品溶液的制备和显色反应的步骤进行测定，水平重复3次。结果见表1。表1  香青兰中总三萜酸含量测定（略）
       2.7  精密度考察取供试品溶液，按含量测定项下测定，RSD为1.23%。
       2.8   稳定性考察取供试品溶液，按含量测定项下以时间扫描方式测定，显示在60 min内稳定。
       2.9   加样回收率实验精密吸取已知含量的无水乙醇洗脱液4 ml，分别加入0.2，0.4，0.6 ml的0.1 mg/ml齐墩果酸对照品，每组平行3次。结果见表2。表2  加样回收实验（略）
       3  讨论
        依据文献和薄层色谱法的验证，证明香青兰中确有齐墩果酸成分。由于齐墩果酸是五环三萜化合物，在紫外区无吸收,故用显色法，使其在可见光区有最大吸收。
        由于皂苷类成分的显色反应专属性较差，常用的显色试剂又很多，本次实验选用香草醛-冰醋酸及高氯酸法，因其显色灵敏，试剂空白溶液色浅，常用于三萜类皂苷的显色，但由于其与皂苷元反应所产生的颜色受试剂的浓度、反应温度、反应时间等影响较大。因此必须注意反应条件的控制。
        大孔吸附树脂是一种具有多种立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其他吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，是依靠它和被吸附的分子之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。本文选用HPD－100大孔吸附树脂，属非极性，广泛应用于天然植物中提取、分离、纯化各类皂苷等活性物质。装柱高度20 cm，柱子的直径1.5 cm，洗脱液流速1 ml/min，每份洗脱液都要经过重吸附后才定容收集，这是为了保证大孔吸附树脂与被吸附分子之间能充分结合。
        利用大孔吸附树脂比色法测定总三萜酸成分，该方法具有简便、快速、准确、重复性好等优点。
       【参考文献】
         　　［1］刘勇民. 维吾尔药志(上)［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社,1999 ：405 .
       
       ［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：73.
       
       ［3］倪慧,贾晓光,陈茂齐. 香青兰挥发油中的化学成分［J］.新疆中医药,1999 ,17 (2) ：42.
       
       ［4］迪丽菲嘎尔·阿不都热依木. 新疆香青兰氨基酸成分研究测定［J］. 新疆师范大学学报(自然科学版) ，2000，20 (1) ：44.
       
       ［5］迪丽菲嘎尔·阿不都热依木. 新疆香青兰微量元素含量测定［J］.新疆师范大学学报(自然科学版)，2000，19 (4) ：39.
       
       ［6］郭春梅,武荣兰,封 顺.香青兰多糖的提取、测定及其对活性氧自由基的清除作用［J］.食品与发酵工业,2003,31(3)：129.
       
       ［7］李建北,丁 怡.香青兰化学成分的研究［J］.中国中药杂志,2001,26(10)：697.
       
       ［8］冯长根,李 琼.香青兰化学成分研究［J］.中成药，2006，28（1）：94.
       
       ［9］A. Kakasy, Zs. Fu¨zfai, L. Kursinszki, et al. Analysis of Non-volatile Constituents in Dracocephalum Species by HPLC and GC-MS Chromatographia［J］. Supplement Vol. 63, 2006,S17.
       
       ［10］V. Povilaitytoee and P.R. Venskutonis. Antioxidative Activity of Purple Peril (Perillafrutescens L.), Moldavian Dragonhead(Dracocephalum moldavica L.), and Roman Chamomile(Anthemis nobilis L.) Extracts in Rapeseed Oil［J］. JAOCS, 2000，77（9）：951.
       
       ［11］洪秀芳,魏 妤,王晓雯. 香青兰冲剂治疗冠心病心绞痛疗效分析［J］.新疆中医药，1999 ,17 (2) :38.