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       【摘要】 
       目的探讨丹参预防深静脉血栓形成的作用。方法24只日本大耳白兔按随机原则分为3组（每组8只）：正常组、模型组及丹参预防组，按股静脉结扎法制作模型，作相关血液流变学指标、血清SOD活性及MDA含量检测并作统计学分析，观察血管内皮形态的变化。结果丹参预防组能明显地改善血液流变学各项指标，提高血清SOD活性、降低血清MDA含量（P<0.05），预防组内皮细胞损伤程度明显轻于模型组。结论丹参注射液能有效预防深静脉血栓形成，这可能是其通过抗氧化作用保护血管内皮细胞而发挥作用。
       【关键词】  丹参；深静脉血栓形成； 内皮细胞；预防作用
       Preventive Effect of Salvia miltiorrhiza on Deep Venous Thrombosis
       CAO Hong,ZHANG Ying,ZHANG Gong-li
       (The Affiliated People"s Hospital of Yunyang Medical College, Shiyan 442000,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the preventive effect of Salvia miltiorrhiza  on deep venous thrombosis(DVT).Methods24 rabbits were randomly divided into 3 groups(n=8):normal group,model group and Salvia Miltiorrhiza-prevented group.Rabbit model of DVT was made by ligating the femoral vein.The related rheology indices , activity of SOD and content of MDA in rabbits blood serum were measured and statistically analyzed,and endothelium form of  blood vessel was observed.ResultsSalvia Miltiorrhiza-prevented group obviously improve the rheology indices, increase the activity of SOD and decrease the content of MDA in rabbit blood serum (P<0.05), the injury of endothelial cell in the prevented group were lighter than that in the model group.ConclusionSalvia miltiorrhiza has favorable effect on DVT,and the mechanison may be related to protect the injury of endothelial cell through antioxidative action.
       Key words:Salvia miltiorrhiza;  Deep venous thrombosis(DVT);  Endothelial cell;   Preventive effect
       
       深静脉血栓形成（deep venous thrombosis，DVT）是指血液在深静脉腔内不正常地凝结，阻塞静脉管腔，导致静脉回流阻碍，全身主干静脉均可发病，尤其多见于下肢，是骨科术后常见的静脉性疾病。其起病较急，若不及时治疗容易导致血栓形成加重，严重者可引起肢体坏死［1］。临床上90%的肺栓塞是由下肢深静脉血栓引起的［2］，故探讨其发病危险因素及预防有重要意义。目前预防深静脉血栓形成的药物主要是抗凝血药和抗血小板聚集药,但其能引起多种严重的并发症如出血、血肿等。寻找一种安全、有效、副作用小的预防深静脉血栓形成的有效途径成为重要的研究课题。我们基于中医药活血化淤的理论采用丹参注射液进行了预防深静脉血栓形成的实验研究，旨在为预防深静脉血栓形成提供一种新的思路。
       1  材料与方法
       1.1  材料 
       健康成年日本大耳白兔24只，雌雄各半，由湖北省实验动物研究中心提供，体重（2.0±0.2）kg。丹参注射液（国药准字Z51021303，每毫升含生药1.5 g）。血流变仪（北京 赛科希德SA-6000）；血凝仪（美国 贝克曼-库尔特ACL-9000）。BMJ-Ⅲ型病理组织包埋冷冻台；LEICA RM 2235型切片机、图文分析系统；CS-ⅤⅠ型摊片烤片机。超氧化物歧化酶（SOD）测试盒、丙二醛（MDA）测试试剂盒购自南京建成生物工程研究所。恒温水浴箱，可见光分光光度计。
       1.2 方法 
       24只日本大耳白兔常温适应性喂养1周，雌雄分笼，按随机原则分为3组，每组8只：①正常组，不做特殊处理；②模型组，造模前1周起每天耳缘静脉注射2 ml生理盐水，直至实验结束；③丹参预防组，造模前1周起2g/(kg·d)丹参注射液耳缘静脉注射，直至实验结束。参考王辉等［3］的下肢深静脉模型制备方法，模型组与预防组用药1周后，10%水合氯醛3 ml/kg腹腔注射，麻醉满意后常规备皮、固定，沿股静脉走向切开皮肤,玻璃分针钝性分离皮下组织及肌肉，充分暴露，游离其双侧股静脉长约4 cm，4＃丝线分别结扎其远近段，缝合伤口，造模后肌内注射庆大霉素0.5 ml/d预防感染。
       1.3  检测指标
        
       正常组在适应性喂养后即采空腹静脉血1.8，5 ml迅速置于枸橼酸钠及肝素抗凝管中检测凝血功能、全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数等指标，模型组与预防组在用药1周后于造模前采空腹静脉血1.8 ml迅速置于枸橼酸钠抗凝管中检测凝血功能，并在造模成功后观察动物的下肢肿胀、伤口及呼吸情况，在第3，7 天再次分别取空腹静脉血2，1.8，5   ml迅速置于普通管、枸橼酸钠及肝素抗凝管中检测血清SOD活性及MDA含量；测凝血功能、全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数等指标。造模后第7天空气栓塞法处死动物，将所结扎静脉段取出迅速放入10%甲醛溶液中固定,采用常规石蜡切片制作法包埋,石蜡切片机切片，常规HE染色，在10×，40×光镜下观察并摄片。
       1.4 统计学分析 
       所有数据均用±s表示，应用SPSS12.0软件进行单因素方差分析。
       2  结果
       2.1 大体观察 
       模型组与预防组动物造模成功后,双下肢均出现不同程度的弥散性肿胀，但用药组造模后其肿胀程度明显低于模型组。各组实验动物手术切口均未感染，在实验过程中均未发现呼吸困难、呼吸急促的肺梗塞症状，实验结束处死并解剖动物时也未发现全身诸组织器官出血。
       2.2  造模前凝血功能的检测 
       丹参预防组用药1周后凝血功能各项指标与正常组相比较P>0.05，说明预防性用药的安全性。见表1。表1  造模前预防组与正常组凝血功能比较(略)
       2.3  造模后第3天血液流变学及凝血功能指标的检测 
       模型组造模后第3天各血液流变学指标与正常组相比P<0.05，提示血液处于“高凝”状态，与深静脉血栓形成临床指征相符，预防组各血液流变学指标与模型组相比P<0.05，与正常组相比较P>0.05（见表2）；同时在凝血功能方面，预防组、模型组与正常组相比各指标均未见明显差异。见表3。表2  造模后第3天各组血流变学指标比较(略)表3  造模后第3天各组凝血功能比较(略)
       2.4 造模后第7天血液流变学及凝血功能指标的检测 
       预防组与模型组在造模后第7天各血液流变学指标与模型组相比有显著性差异；在凝血功能方面，预防组、模型组与正常组相比较P>0.05（见表4～5）。表4  造模后第7天预防组与模型组血流变学指标比较(略)表5  造模后第7天预防组与模型组凝血功能比较(略)
       2.5  造模后第3天，第7天各组血清SOD活性及MDA含量比较 
       预防组与模型组在造模后第3天，第7天血清SOD活性及MDA含量相比P<0.05（见表6～7）。表6  造模后第3天各组血清SOD活性及MDA含量比较(略)表7  造模后第7天各组血清SOD活性及MDA含量比较(略)
       2.6  病理组织学观察 
       正常组静脉管壁连续，血管内膜完整，内皮细胞无脱落，管腔内有散在的血细胞成分（见图1～2）；造模后第7天，模型组静脉管壁的连续性中断，血管内膜不规则，内皮细胞大部分脱落，可见大量血栓形成，以混合血栓及红色血栓为主，且血栓充满管腔，并附着于管壁上（见图3～4）；预防组静脉管壁的连续性较完整，血管内膜规则，内皮细胞部分脱落，管腔内可见少量血栓形成，部分与管壁附着（见图5～6）。
       3  讨论
        本病属中医学“肿胀”“淤证”“血瘤”“筋瘤”“恶脉”“淤血流注”“脉痹”等范畴，1994年国家中医药管理局发布的《中医病症诊断疗效标准》将该病明确命名为“股肿”［4］。1946年，Virchow提出：静脉壁损伤、血流缓慢和血液高凝状态是造成深静脉血栓形成的三大因素，至今仍被沿用［5］，骨科手术涉及创伤、应激、制动、长期卧床等多种因素，与Virchow学说的三大因素密切相关。
        临床上常用抗栓药物以预防血栓形成或溶解血栓，但是这些药物应用过量便会造成出血，用量不足则达不到预期疗效，因此在应用这些药物的过程中必须作实验室检测，丹参预防组在预防性用药1周、造模后第3天及第7天后凝血功能各项指标与正常组相比较P>0.05，说明用药的安全性。活化部分凝血活酶时间（APTT）是目前推荐应用的内源性凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选实验，而血浆凝血酶原时间（PT）是反映外源性凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选实验［6］，丹参预防组在预防性用药1周、造模后第3天PT与正常组比较P<0.05。这一方面是应用抗凝药物的表现，另一方面提示丹参可能正是作用于外源性凝血系统，同时在该实验中发现预防组活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶原时间（PT）及凝血酶时间（APTT）较正常组均有不同程度的延长，这本身也就说明了丹参注射液预防深静脉血栓形成的有效性。在血液流变学方面，模型组造模后第3天各血液流变学指标与正常组相比P<0.05，说明该造模方法有效、可行，预防组与模型组在造模后第3天及第7天各血液流变学指标与模型组相比有显著性差异，提示丹参注射液确有预防深静脉血栓形成的功效。
        超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）是机体内清除氧自由基的重要抗氧化酶之一，此酶能清除超氧阴离子自由基（O2-·）保护细胞免受损伤，其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，丙二醛（malondialdehyde，MDA）是氧自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪酸而形成的脂质过氧化物，对MDA的检测可反映出机体内脂质过氧化和机体细胞受自由基攻击的损伤程度，在造模后第3天及第7天预防组血清SOD活性及MDA含量与模型组比较P<0.05，这说明丹参能有效减轻脂质过氧化反应及提高机体抗氧化能力。
        内皮细胞(endothelial cells, EC)是位于循环系统血管壁内皮下组织之间的一层单层细胞，血管内皮细胞的结构和功能正常在调节凝血、抗凝和纤溶过程中具有重要作用，主要表现在：①血管内皮细胞合成和释放舒血管物质－内皮细胞衍生舒张因子(endothelial derived relaxing factor,EDRF)和前列环素(prostacylin,PGI2)，两者不仅具有舒血管作用，还可抑制血小板聚集，因而有较强的抗血栓形成作用。②血管内皮细胞膜上有ADP酶能水解ADP，而ADP是引起血小板聚集的诱导物。③血管内皮细胞膜表面表达肝素样物质（硫酸乙酰肝素等），并与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)结合产生抗凝作用。④血管内皮细胞表面可表达凝血酶调节蛋白(TM），凝血酶与TM形成复合物后对蛋白质C的活化效率大大提高。⑤内皮细胞可产生或促进组织型纤溶酶原活化素(t-PA )、尿激酶纤溶酶原活化素(u-PA )等纤溶酶原激活物，促进纤溶过程。⑥血管内皮细胞是组织因子途径抑制物(TFPI)合成的主要场所。⑦血管内皮细胞还可摄取与破坏血小板聚集的活性物质，如5羟色胺(5-HT) ［7，8］。早期静脉血栓形成后，局部低氧环境使内皮细胞变性、坏死，部分脱落于血液中而形成循环内皮细胞［9］。本实验通过静脉病理组织形态学观察发现，模型组在造模后第7天静脉管壁的连续性中断，血管内膜不规则，内皮细胞大部分脱落；预防组静脉管壁的连续性较完整，血管内膜规则，内皮细胞少量脱落。以上结果表明，预防组的内皮细胞损伤程度轻于模型组，提示丹参具有保护静脉内皮细胞，抑制其损伤的功能，对预防深静脉血栓形成具有重要意义。
       丹参是我国传统中药中的代表药，有良好的活血化淤功效。本实验以丹参注射液为干预因素研究其预防深静脉血栓形成的作用。预防组用药后,有效且安全地降低了血黏度，同时血清SOD活性升高、MDA含量降低，提示丹参能减轻脂质过氧化反应及提高机体抗氧化能力,并减轻血管内皮细胞受损，因而可以推测,丹参可能正是通过提高机体抗氧化能力减轻脂质过氧化反应,达到保护血管内皮细胞的作用，从而起到预防深静脉血栓形成的作用。
       【参考文献】
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