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       【摘要】 
       目的比较小青龙汤分煎液与合煎液中甘草苷的含量。方法建立高效液相色谱法，采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），以乙腈-0.5%冰醋酸（20∶80）为流动相，流速为0.5 ml·min-1，检测波长为276 nm，柱温为25℃，分析小青龙汤合煎液与分煎液中甘草苷的含量。结果小青龙汤分煎液中甘草苷的平均含量大于合煎液中甘草苷的含量。结论与合煎液比较，分煎液的含量较高。
       【关键词】  小青龙汤； 分煎； 合煎； 高效液相色谱法； 含量测定； 甘草苷
       The Comparison of the Content of Liquiritin in Different of Xiao Qing Long Decocted Solutions
       PENG Xiaobing, JUN Fengyun, LI Xiang, HE Zhuying, LIANG Guangyi
       College of Traditional Chinese Medicine, Guizhou Guiyang 550002,China
       Abstract：ObjectiveTo compare the content of liquiritin between the combined decoction and the separated decoction of Xiao Qing Long decoction.MethodsAn HPLC method was established with a Agilent Zorbax SB-C18 column (5 μm, 4.6 mm× 250 mm ), a mobile phase of acetonitrile-0.5% glacial acetic acid（20∶80）, a flow rate of 0.5 ml·min-1 and a detection wavelength of 267 nm. ResultsThe average content of liquiritin in the separated decoction was higher than that of the combined decoction. ConclusionComparing with that in the combined decoction, the content of liquiritin in the separated decoction is higher.
       Key words：Xiao Qing Long decoction;  Separated decoctions;  Combined decoctions;  HPLC;  The determination of the content;  Liquiritin
       
       小青龙汤系张仲景所创的经典方，由麻黄，桂枝，白芍，干姜，细辛，甘草，法半夏，五味子8味药组成，具有解表散寒，温肺化饮之功效。中药分煎液是将单位中药经煎煮，浓缩，干燥后精制而成，按传统处方配伍，直接加水冲服，与合煎液相比，具有服用量少，携带方便，剂量准确，药物稳定，便于储存等优点。本实验以中药经方小青龙汤中的有效成分甘草苷作为指标，比较该方用合煎法与分煎法制得的汤剂中甘草苷含量差异，探索中药复方汤剂不同制法对其有效成分溶出量的影响，对单味中药精制颗粒应用于临床提供一些理论依据。
       1  器材
       1.1 仪器岛津LC—20A高效液相色谱仪，TCQ—250型超声波清洗仪，101-1-S型电热恒温鼓风干燥箱。
       1.2 药材与试剂
       草麻黄Ephedra sinica Stapf(河北);干姜Zingiber officinale Rosc（四川），制南五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et wils（河南），炙甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch（内蒙），法半夏Pinellia ternata (Thunb) Breit（贵州），白芍Paeonia lactiflora Pall.（安徽），细辛Asarun sieboldii Miq.var.seoulense Nakai（辽宁），桂枝Cinnamomum cassia Presl（广东）。以上8味药材饮片经贵阳中医学院刘芃教授鉴定。甘草苷对照品（中国药品生物制品检定所批号为：171241–200304）。甲醇﹑乙腈均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。
       2  方法与结果［1～4］
       2.1  色谱条件
       色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流动相为乙腈-0.5%冰醋酸（20∶80）；流速0.5 ml·min-1；检测波长276 nm；柱温25℃。
       2.2  溶液的制备及测定
       2.2.1  对照品溶液的制备
       精密称取甘草苷对照品适量，加甲醇溶解，制成浓度为0.74 mg·ml-1的对照品溶液，备用。
       2.2.2 合煎液供试品溶液的制备（传统煎液法）
       按处方称取药材饮片，麻黄10g，加8倍量的水，浸泡30 min，武火煎煮微沸后计时改用文火煎煮20 min，其余药材按处方称取药材饮片44 g，加8倍量的水，浸泡30 min后加入到已经煎煮了20 min的麻黄煎液中，武火煎沸后用文火煎煮40 min，趁热过滤，药渣再加6倍量的水，煎煮40 min后趁热过滤，合并两次滤液，浓缩至54 ml（1∶1）转移至蒸发皿中，浓缩至半流体状态，在60℃的温度下干燥至恒重，精密称取一定量的干浸膏约0.6 g，精密加入70%的乙醇10 ml称重，超声处理30 min，放冷后补重，滤过，取续滤液0.5 ml置10 ml容量瓶中，加入20%乙腈定容至刻度，即得合煎液供试品溶液。
       2.2.3  分煎液供试品溶液的制备（煎煮方法由宏宇药业有限公司提供）
       取麻黄等8味药材饮片，煎煮两次，合并两次滤液后浓缩成流浸膏，在60℃温度下干燥至恒重。8味药干燥至恒重后即得颗粒，按处方称取相当于合煎液原药材量的中药分煎液，用54ml水溶解后，转移至蒸发皿中，浓缩至半流体状态，在60℃的温度下干燥至恒重。精密称取一定量的干浸膏约0.6 g，精密加入70%乙醇溶液10 ml，称重，超声处理30 min，放冷，补至原重，滤过，取续滤液0.5 ml，置10 ml容量瓶中，加入20%乙腈定容至刻度，即得分煎液供试品溶液。
       2.3  阴性对照溶液的制备按中药分煎液供试品溶液制备的相当量分别称取除甘草以外的其余7味中药分煎液，同法制成阴性对照溶液；按合煎液供试品溶液制备方法分别称取除甘草以外的其余7味中药饮片药材，同法制成阴性对照溶液。
       2.4  标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液适量5份，分别置于10 ml的容量瓶中，加入甲醇制成浓度分别为18.51，37.02，74.04，148.08，296.16 mg·L-1溶液，精密吸取2 μl注入高效液相色谱仪，测定其峰面积。其色谱图见图1。以峰面积值（A）对进样量（C）进行线性回归，得回归方程为：A=183.51C+29.41，r=0.999 3。以上结果表明，在0.037～0.592μg范围内，甘草苷峰面积值与进样量有良好的线性关系。
       2.5  精密度实验精密吸取对照品溶液6μl注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定相应的甘草苷峰面积，RSD=0.7%，结果表明仪器的精密度良好。
       2.6  稳定性实验精密吸取放置0，2，4，6，8 h的样品液20 μl 分别注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，合煎液RSD=2.2%，分煎液RSD=1.36%。结果表明，供试品溶液在8 h内稳定性良好。 2.7  重复性实验按中药分煎液供试品溶液的制备方法制得供试液5份，分别精密吸取20 μl，注入高效液相色谱仪，测得峰面积值并计算含量，RSD=1.89%。
       2.8  加样回收率实验精密称取已知甘草苷含量的合煎液样品干粉6份，分别加入对照品适量，置10 ml容量瓶中，精密加入70%乙醇溶液10 ml，超声处理30 min，放冷后加入20%乙腈定容至刻度，摇匀，过 0.45 μm滤膜，同法测定计算加样回收率，结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）
       2.9  样品的含量测定
       分别精密称取5份中药分煎液和合煎液，按其供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别平行测定5次。结果见表2。表2  样品中甘草苷的含量测定（略）
       3  讨论
       
       甘草在小青龙汤方中起佐使作用,甘草苷是一个中等极性物质,故采用70%乙醇进行超声提取，在甘草苷含量测定过程中在测定方法建立过程中,分别作了不同色谱条件的探索，最后所采取的色谱条件的精密度，稳定性，重复性良好，测定方法可靠。
       
       实验结果表明，小青龙汤的分煎液与合煎液汤剂中的甘草苷含量分煎液大于合煎液，从而为小青龙汤的中药分煎液替代合煎液提供了一定的科学依据。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：59.
       
       ［2］伍慰萍，阎红涛，孙文基.HPLC法测定甘草中甘草苷的含量［J］.药物分析杂志，2004，24（4）：425.
       
       ［3］高秋涛，毕开顺.HPLC法测定甘草附子汤中甘草苷和香豆素的含量［J］.沈阳药科大学学报，2003，20（6）：439.
       
       ［4］闫永红，王文全，杨 娜. HPLC法测定栽培甘草中甘草苷的含量［J］.中国中药杂志，2006，31（11）：926.