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       【摘要】 
       目的研究阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌的动态影响。方法以乌拉坦(500 mg/kg )1次腹腔注射和雌激素(50 mg/kg)每周1次肌肉注射诱发小鼠肺肿瘤，用阳和汤喂养小鼠18周，每周6次，观察肿瘤生成时间和发生率, 检测其癌变过程中血清和肺组织超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)的活性及丙二醛(MDA)、白细胞介素2（IL2）与肿瘤坏死因子(TNFα)含量。结果 阳和汤在乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中对SOD，CAT的活性及IL-2与TNF-α含量有回升作用, 可以推迟肿瘤形成时间，降低肿瘤发生率，并能阻止与癌变相应的GST活性及MDA含量增高。结论阳和汤对乌拉坦诱导的小鼠肺癌有预防作用，主要机制可能与其抗氧化和免疫调节作用有关。
       【关键词】  阳和汤； 乌拉坦； 肺癌
       Dynamic Effect of Yang-He Decoction on the Lung Carcinogenesis Induced by Urethane
       DU Gangjun, LIN Haihong,XU Qitai, ZHU Xin-ke
       (1.Department of Pharmacology, Pharmacological college of Henan University, Kaifeng 475001，China; 2.Pharmaceatical Factory of Henan University,Kaifeng,475001,China)
       Abstract：Objective To study the effect of Yang-he decoction(YHD) on the process of lung carcinogenesis induced by urethane. MethodsThe mouse lung carcinoma was induced by urethane 500 mg/kg injected ip once and diethylstilbestrol 50mg/kg injected im once weekly,  the animals were treated with YHD 6 times weekly for 18 weeks to investigate the time and rate of tumor formation，and the activities of SOD ，CAT ，GST and the contents of MDA，IL-2 and TNF-α in serum and in lung homogenate were tested. ResultsIn the process of lung carcinogenesis ,YHD could elevate the activities of SOD and CAT , increase the contents of IL-2 and TNF-α, delay the time of tumor formation , reduce the rate of carcinogenesis , inhibit the increase of GST and MDA due to carcinogenesis. ConclusionYHD can prevent lung carcinogenesis induced by urethane, which might be related to its antioxidantion and immune-regulation .
       Key words：Yang-He Decoction;   Urethane;   Lung Carcinogenesis
        中医认为,肿瘤的形成是由于机体正气先虚,然后客邪留滞而引起的一系列病变结果。阳和汤是清代名医王洪绪所创，功能温阳补血、散寒逐滞，主治阴疽病症。据文献报道，阳和汤有抗肿瘤作用，可以抑制小鼠S180及HepA实体瘤的生长［1］。为探讨肿瘤的发病机制、丰富中药治疗肿瘤的内涵，笔者动态地研究了阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成的影响。
       1  材料与仪器
       1.1  试剂 
       乌拉坦（上海化学试剂厂产品，批号030412）。雌激素（Sigma产品，批号0402134）。SOD、CAT、GST及MDA试剂盒（南京建成生物技术研究所）。TNF-α及IL-2  ELISA 测定试剂盒（华美生物工程公司）。
       1.2  药物　
       阳和汤由熟地黄、鹿角胶、白芥子、肉桂、麻黄、炮姜、甘草按20∶6∶4∶2∶1∶1∶2的比例混合, 除鹿角胶外，加入4倍量蒸馏水煎煮1 h，药渣同法再煎煮两次，过滤。 将3次煎煮滤液混合并浓缩至浓度为0.7 g(生药)/ml（浓缩近完成时，将鹿角胶加入烊化），4℃保存备用（一次性购买原药材，分次煎煮，每次煎煮液使用不超过2周）。
       1.3  动物　
       昆明小鼠,♀，体重20～23 g（河南医学实验中心,动物合格证号:医动字第410115号）。
       1.4 仪器
       EL-800X型酶标仪（BIO-TEK公司）。
       2 方法
       2. 1  模型建立与研究方案　
       将210只雌性昆明小鼠分为3组，每组70只：①模型对照组：ig 生理盐水10 ml/kg；②阳和汤组：ig阳和汤7 g（原药材）/kg（相当于成人等效日剂量）；③正常对照组：不造模型，平行饲养。实验第1天，模型对照组和阳和汤组小鼠均ip乌拉坦500 mg/kg 1次，同时开始给药，1次/d，每周6次。从实验第4天起，造模小鼠均im雌激素50 mg/kg，1次/周。第6周开始，每组随机抽取10只小鼠腹主动脉放血，取血清-80 ℃保存；同时取小鼠肺脏先观察有无肿瘤生成（如有，记录肿瘤个数，并用游标卡尺测量肿瘤长径a与宽径b, 按肿瘤=0.4ab计算大小），随后将肺脏在液氮中研碎，加二重蒸馏水匀浆后取离心上清-80℃保存，用于检测SOD，CAT，GST的活性及MDA，每2周1次，直至第18周。
       2. 2  测定方法　
       SOD，CAT，GST的活性及MDA ，IL-2与TNF-α含量均按试剂盒说明进行，其中SOD，CAT，GST及MDA用比色法测定；IL-2与TNF-α用ELISA方法测定, 所有比色均在96孔酶标板中由EL-800酶标仪完成。
       2. 3  统计处理　
       文中结果均以±s表示，组间差异采用单因素方差分析，通过SPSS11.0完成。P<0.05, 表示有显著性差异；P<0.01, 表示有非常显著性差异。
       3  结果
       3.1  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中SOD，CAT的活性及IL-2与TNF-α含量的影响  与正常对照组比较，模型对照组血清及肺脏组织SOD，CAT的活性及IL-2与TNF-α含量均明显降低，阳和汤组与正常对照组无统计学差异；与模型对照组比较，阳和汤对血清和肺组织SOD，CAT的活性及IL-2与TNF-α含量均有回升作用。结果见表1～2。表1  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中血清SOD，CAT的活性及IL-2与TNF-α含量的影响（略）表2  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中肺脏SOD，CAT的活性及IL-2与TNF-α含量的影响（略）
       3.2  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中GST活性及MDA含量的影响与正常对照组比较，模型对照组血清及肺脏组织GST活性及MDA含量均明显升高，阳和汤组与正常对照组无统计学差异；与模型对照组比较，阳和汤对血清和肺组织GST活性及MDA含量均有降低作用。结果见表3～4。表3  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中血清GST活性及MDA含量的影响（略）表4  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中肺脏GST活性及MDA含量的影响（略）
       3.3  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成率的影响阳和汤可以推迟肿瘤形成时间，抑制肿瘤生长，降低肿瘤发生率（见表5）。表5  阳和汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌形成的影响（略）
       4  讨论
        乌拉坦对小鼠有致肺癌作用，其特点为不影响动物饮食和体重，无剂量蓄积作用［2］；雌激素自身虽对小鼠无致癌作用，但可促进乌拉坦致癌，提高乌拉坦的致小鼠肺癌发生率［3］。阳和汤为温阳补血名方，现代医学研究表明其对肿瘤有治疗作用［4，5］。我们采用乌拉坦与雌激素联合诱导小鼠肺癌模型研究阳和汤对此过程的动态影响，结果发现阳和汤可以推迟肿瘤形成时间，抑制肿瘤生长，降低肿瘤发生率，表明阳和汤也有预防肿瘤发生的作用。
        自由基的诱癌、促癌及致癌作用已被公认，其产生和消除失衡与肿瘤的发生发展关系密切［6］。SOD，CAT，GST属于体内消除自由基和脂质过氧化物的酶类,它们与体内其他酶类及抗氧化剂组成一个自由基的防御系统,以清除过多的自由基［7］。本文实验结果显示，阳和汤在乌拉坦诱导小鼠肺癌形成过程中对SOD，CAT的活性有回升作用, 并能阻止与癌变相应的GST活性及MDA含量增高，推测提高机体自身的抗氧化能力、降低肿瘤的解毒能力是阳和汤阻止肿瘤发展的机制之一。另外，在本研究中阳和汤对小鼠血清及肺脏IL-2与TNF-α含量也有升高作用，结合阳和汤有诱生干扰素作用的报道［8］，我们认为调节免疫是阳和汤阻止肿瘤发生和抗癌的另一机制。
        中药在肿瘤的治疗和预防方面有独特优势，如无明显不良反应、增强体质、改善症状等，其原因与中药的多途径、多靶点协同作用有关［9］。阳和汤方中重用熟地大补血气为君;鹿角胶为血肉有情之品,能生精补髓,养血助阳,强筋壮骨为辅;炮姜炭温中,破阴回阳;肉桂入营,温通血脉；麻黄达卫散寒, 白芥子祛皮里膜外之痰,合用使血脉宣通,令全方补而不滞，有利于发挥扶正祛邪作用。本文从抗氧化和免疫调节方面证明了阳和汤抗肿瘤的多途径性，为阳和汤的应用提供了更好的依据。其更多的作用机制有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］黄立中，张晓明，左亚杰 ，等. 阳和汤对小鼠移植性肿瘤抑制作用的实验研究［J］. 湖南中医学院学报，2002，22（1）：33.
       
       ［2］Terry W. Moodya, Julius Leytona, Farah Ziaa et al. Thymosina1 is chemopreventive for lung adenoma formation in A/J mice［J］. Cancer Letters , 2000,155(2)：121.
       
       ［3］蒋义国，陈家，吴中亮，等. 己烯雌酚对乌拉坦诱发小鼠肺肿瘤的促进作用［J］. 癌变·畸变·突变，1998， 10（2）：72.
       
       ［4］郑翠娥,　王晓红. 阳和汤加减治疗骨肿瘤［J］. 山东中医杂志，1998， 17（2）：62.
       
       ［5］黄立中，蒋益兰，曾松林，等. 阳和汤加味治疗骨转移癌疼痛63例［J］. 湖南中医学院学报，1997，17（1）：20.
       
       ［6］Jayne Sierens , John A. Hartley , Maeli J. Campbell et al. Effect of phytoestrogen and antioxidant supplementation on oxidative DNA damage assessed using the comet assay［J］. Mutation Research , 2001, 485 (2)：169.
       
       ［7］Estrada-Garc?′a. L, Carrera-Rotllan. J , Puig-Parellada. P. Effects of oxidative stress and antioxidant treatments on eicosanoid synthesis and lipid peroxidation in long term human umbilical vein endothelial cells culture［J］. Prostaglandins & other Lipid Mediators, 2002, 67 (1)：13.
       
       ［8］黄立中, 肖雅, 王大安，等. 阳和汤对移植S180小鼠抑瘤及体内诱生干扰素作用的实验研究［J］. 中国中医药信息杂志，2003，10（5）：22.
       
       ［9］李丹， 陈涛. 中药复方抗肿瘤作用研究进展［J］. 山东中医杂志，2005，24（6）：381.