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       【摘要】 
       目的对湖南产杨梅树皮中黄酮类活性成分进行研究。方法用95%乙醇提取及各种柱色谱法分离，波谱法鉴定结构。结果分离并鉴定了6个化合物，其结构分别为槲皮素（Quercetin, 1）、杨梅素（Myricetin, 2）、异槲皮苷（Quercetin3OβDglucoside, 3）、槲皮苷（Quercetin3OαLrhamnoside,4）、杨梅苷（Myricetrin, 5）、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷（Myricetin3OβDglucoside, 6）。结论1，4，6为首次从杨梅属中分离得到；2为杨梅树皮的主要化学成分，该植物可作为杨梅素的资源植物加以开发利用。
       【关键词】  杨梅树皮； 黄酮； 杨梅素
       Study on the Flavonoid Constituents from the Bark of Myrica ruba
       
       WANG Dingyong, LIU Engui, FENG Yujing
       (College of Pharmacology, Guangdong Pharmacological University, Guangzhou 510006, China)
       AbstractObjectiveTo study the flavonoid constituents of the bark of Hunan Myrica ruba. MethodsThe chemical constituents were separated and repeatedly purified by methods of chromatography, and their structures were elucidated by UV, IR, MS and NMR. ResultsSix flavones were obtained and they were identified as Quercetin(1), Myricetin(2), Quercetin-3-O-β-D-glucoside(3), Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside(4), Myricetrin(5) and Myricetin-3-O-β-D-glucoside (6). Conclusion1，4，6 were isolated from the bark of Hunan Myrica ruba for the first time. Myricetin is the main constituent of the bark of Hunan Myrica ruba, and this plant can be utilized as plant sources of myricetin.
       Key wordsBark of Myrica ruba;  Flavonoids;  Myricetin
       
       杨梅Myrica ruba (Lour.)Sieb. et Zucc. 系杨梅科杨梅属植物。杨梅树皮味苦、性温，具有散淤止血、止痛之功效, 民间用于治疗跌打损伤、骨折、痢疾、胃和十二指肠溃疡、牙痛等［1］。黄酮类化合物具有多种生物活性和较低毒性［2］，目前已成为国内外天然药物研究的热点之一。杨梅素为一多羟基黄酮类化合物，具有极强的抗自由基氧化和紫外线吸收性能, 安全性高，近几年的研究发现天然杨梅素具有降血糖［3］、酪氨酸酶抑制［4］、血小板活化因子拮抗［5］、肝脏保护等［6］作用，开发潜力大。为了开发湖南杨梅植物中的黄酮类化合物和寻找富含杨梅素的资源植物，我们对采自湖南省洞口县的杨梅树皮进行了化学成分的初步研究。从该树皮的乙醇提取物中共分离得到6个黄酮类化合物，化学结构式（见图1）。现报道如下。
       1  器材
        熔点用 XRC-1 显微熔点仪 (四川大学科仪厂制造) 测定, 温度计未校正；红外光谱用 Nicolet PROTéGé460 光谱仪测定；紫外用 GBC Cintra 20 UV Spectrometer 在甲醇溶液中测定；核磁共振 Bruker AM-400/600 型核磁共振仪测定，TMS为内标； ESIMS 在 HP-1100 LC/ MS 上测定。杨梅树干的皮于200409采自湖南省洞口县，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为杨梅 Myrica ruba (Lour.) Sieb.et Zucc. 的树皮。硅胶均为青岛海洋化工厂生产，聚酰胺(100～200目)为上海新量化工试剂有限公司产品。
       2  方法与结果
       2.1  提取与分离取阴干的杨梅树皮5 kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，2 h/次。减压回收乙醇，浓缩得浸膏。将浸膏用95%乙醇溶解，加8倍量水沉淀叶绿素，离心除去叶绿素后，回收乙醇混悬于水中，依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取。氯仿部分反复硅胶(200～300 目)柱色谱，石油醚-丙酮体系梯度洗脱，甲醇重结晶纯化，得到化合物1 (418 mg)、2 (2186 mg)。正丁醇部分经硅胶(200～300 目)柱色谱，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱及聚酰胺(100～200目)柱色谱，甲醇-水系统梯度洗脱，甲醇重结晶纯化，得到化合物3 (235 mg），4 (284 mg)，5 (783 mg)，6 (153 mg)。
       2.2  结构鉴定
       2.2.1  化合物 1 
       黄色粉末 (MeOH)，mp 303～304.0 ℃，三氯化铁反应绿色，三氯化铝反应亮黄色，Molish反应阴性。UV (MeOH)λmax nm: 258, 300, 369。IRνmax (KBr) cm-1:3 332, 1 668, 1 620, 1 568, 1 401, 1 283, 1 146, 1 020, 940, 830; 720, 703, 634。ESIMS m/z: 325.0 ［M + Na］+ (positive), 301［M-H］- (negative)。1HNMR (DMSO-d6)：δ12.55 (1H, s, OH-5), 10.91 (1H, br.s, OH-7), 9.63 (1H, br.s, OH-3), 9.40 (2H, br.s, OH-3", 4"), 7.70 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2"), 7.62 (1H, dd, J=9.0, 2.0 Hz, H-6"), 6.93 (1H, d, J=9.0 Hz, H-5"), 6.40 (1H, d, J=1.9 Hz, H-8), 6.21 (1H, d, J=1.9 Hz, H-6)。 13CNMR见表 1。化合物1的数据与文献［7］报道的槲皮素数据基本一致。
       2.2.2  化合物 2
        
       棕黄色针晶 (MeOH), mp 323.0～325.0 ℃, 溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯，微溶于水, 难溶于氯仿、石油醚。 UV (MeOH) λmax nm：254, 301, 374。IRνmax (KBr) cm-1: 3 350, 1 659, 1 609, 1 544, 1 515, 1 447, 1 317, 1 242, 1 204, 1 163, 1 113, 1 094, 1 026, 937, 832, 792, 766, 725, 707, 645。ESI-MS m/z: 319.3 ［M + H］+ (positive), 317.1 ［M-H］- (negative)。 1HNMR (DMSO-d6): δ 12.51（1H, s, OH-5）, 7.25 (2H, s, H-2", 6"), 6.37 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6), 6.18 (1H, d, J=2.0 Hz, H- 8)。13CNMR见表 1。以上数据与文献［8］报道的杨梅素光谱数据基本一致。
       2.2.3 化合物 3 
       黄色颗粒状结晶（MeOH），mp 221～223 ℃，TLC紫外灯下（1%AlCl3乙醇溶液）显深黄色荧光，HCl-Mg粉反应呈红色，Molish反应呈阳性，薄层酸水解检测有葡萄糖。 UV (MeOH)λmaxnm：258, 358。ESI-MSm/z: 465.2［M+H］+ (positive), 487［M+Na］+ (positive)，463.3 ［M-H］-(negative)。1HNMR (DMSO-d6)：δ12.63 (1H, s, OH-5), 7.76 (1H, d, J=2.2 Hz, H-2"), 7.60 (1H, dd, J=2.2, 8.5, H-6"), 6.91 (1H, d, J=8.5 Hz, H-5"), 6.41 (1H, d, J=2.1 Hz, H-8), 6.26 (1H, d, J=2.1 Hz, H-6), 5.28 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1"), 3.23～3.89 (6H, m, H-2“～6”)。 13CNMR见表 1。以上数据与文献［9］报道的异槲皮苷即槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷光谱数据一致。
       2.2.4 化合物 4 
       黄色颗粒状结晶 (MeOH)，mp 183～185.0 ℃，TLC紫外灯下（1%AlCl3乙醇溶液）显深黄色荧光，HCl-Mg粉反应呈红色，Molish反应呈阳性，薄层酸水解检测有鼠李糖。UV (MeOH)λmaxnm : 255, 300, 368。IRνmax (KBr) cm-1: 3 420, 2 910, 1 646, 1 610, 1 450, 1 080, 972 , 915, 849, 720, 639。ESIMS m/z: 449.2［M+H］+ (positive), 447.0 ［M-H］- (negative)。1HNMR (DMSO-d6): δ 12.60 (1H, s, OH-5), 10.91 (1H, s, OH-7), 9.77 (1H, s, OH-4"), 9.34 (1H, s, OH-3"), 7.29 (1H, d, J=1.2 Hz, H-2"), 7.22 (1H, dd, J=1.2,8.7 Hz, H-6"), 6.85 (1H, br.s, H-5"), 6.39 (1H, d, J=1.5 Hz, H-8), 6.18 (1H, d, J=1.5 Hz, H-6), 5.21 (1H, br.s, H-1"), 3.46～4.95 (4H, m, H-2", 5"), 0.85 (3H, d, J=5.7 Hz, H-6")。13CNMR见表 1。以上数据与文献［10］报道的槲皮素苷即槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷光谱数据一致。
       2.2.5 化合物 5 
       黄白色片状结晶 (MeOH), mp 182.0～184.0 ℃, TLC紫外灯下（1%AlCl3乙醇溶液）显深黄色荧光，HCl-Mg粉反应呈红色，Molish反应呈阳性，薄层酸水解检测有鼠李糖。UV (MeOH)λmaxnm: 258, 304, 364。IRνmax (KBr) cm-1: 3 400, 2 930, 1 656, 1 606, 1 454, 1 346, 1 291, 1 200, 1 165, 1 074, 1 058, 1 040, 1 021, 969, 917, 858, 716, 641。ESIMS m/z: 465.3 ［M+H］+ (positive), 463.1 ［M-H］- (negative)。1HNMR (DMSO-d6)：δ 12.69 (1H, s, OH-5), 6.89 (2H, s, H-2", 6"), 6.37 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6), 6.20 (1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 5.20 (1H, br.s, H-1"), 3.78 (1H, br.s, H-2"), 3.99 (1H, br.s, H-5"), 3.55 (1H, dd, J=9.4, 2.9 Hz, H-3"), 3.16 (1H, t, J=9.4 Hz, H-4"), 0.84 (3H, d, J=6.2 Hz,  H-6")。13CNMR见表 1。以上数据与文献［11］报道的杨梅苷光谱数据基本一致。
       2.2.6  化合物 6 
       黄色颗粒状结晶 (MeOH), mp 220～223 ℃，TLC紫外灯下（1%AlCl3乙醇溶液）显深黄色荧光，HCl-Mg粉反应呈红色，Molish反应呈阳性，薄层酸水解检测有葡萄糖。UV (MeOH)λmaxnm : 252, 366。IRνmax (KBr) cm-1: 3 500, 2 908, 1 640, 1 608, 1 449, 1 082, 968, 912, 850, 716, 645。ESIMS m/z: 481.3［M+H］+ (positive), 479.2 ［M-H］- (negative)。1HNMR (DMSO-d6)：δ 12.65 (1H, s, OH-5), 6.87 (2H, s, H-2", 6"), 6.34 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6), 6.18 (1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 5.24 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1"), 3.25～3.86 (6H, m, H-2“～6”)。 13CNMR见表 1。根据以上信息, 推断该化合物的结构为杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷。表1  化合物 1～6 的13CNMR数据（略）
       3  讨论
        杨梅树皮的化学成分前人已有报道，至今已从杨梅树皮中分离得到黄酮类、单宁类、三萜类和环状二芳基庚烷类等化合物［12］。黄酮类化合物是杨梅树皮中含量最大的一类天然产物，高达10%以上。近年来，黄酮类化合物的广泛药理作用受到人们的极大关注，成为当前天然产物研究的热点之一。本实验采用有机溶剂提取、柱色谱分离以及现代波谱技术鉴定等方法，对杨梅树皮中黄酮类化学成分进行了系统的研究，发现了6种黄酮类化合物，其中杨梅苷的含量最高。这些研究结果将为人们合理开发利用杨梅植物资源提供一定的科学依据。
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