文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的探讨预防“非典”中药方对机体细胞免疫功能的影响。方法健康雄性、昆明品系小鼠30只，随机等分为3组：①A组(鲜芦根20 g，蝉衣10 g，僵蚕10 g，薄荷6 g，银花15 g，连翘15 g，生甘草5 g)；②B组 (升麻10 g，鱼腥草12 g，鹅不食草12 g，朱砂根9 g，鸭跖草12 g，桃仁6 g，紫金牛12 g，生黄芪10 g，冬虫草6 g，酸浆10 g，金银花15 g，板蓝根12 g，淡豆豉6 g)；③C组(溶剂对照组)。用方药100%水煎剂，每只小鼠体内给药(灌胃)0.5ml/次，2次 /d，12 d，摘眼球取血，流式细胞仪计数A，B，C 3组小鼠的T细胞亚群(CD4+CD8-，CD8+CD4-，CD4+CD8+，CD4-CD8-)；另取小鼠脾细胞作体外细胞培养，以ConA作为剌激物，用MTT法检测淋巴细胞的转化。结果A组CD4+/CD8+ 低于B、C两组(P<0.05)，B、C两组间无差异(P>0.05)；A组淋巴细胞转化值较B、C组低(P<0.05)，B、C两组间无差异(P>0.05)。结论A方能抑制淋巴细胞转化，降低CD4+/CD8+，从而抑制细胞免疫功能。
       【关键词】  SARS； 中药方； 细胞免疫功能
       The Effect of SARS-prevent Prescription on Cellular Immune Function in Mice
       LI Xiaobo,LI Juan,MA Lianlan,ZHANG Wenping,ZENG Xiangfeng,LIU Zhichun
       1.Gannan Medical College,Ganzhou,Jiangxi Province,341000,China;2.Research Center of Tissue Transplantation and Immunity of Jinan University,Guangzhou,Guangdong 510632,China
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of SARS-prevent prescription on cellular immune function in mice.Methods30 healthy female Kunming mice were randomly divided into 3 groups:①Group A was treated with traditional prescriptions A(20 g Phragmitis,rhizoma, 10 g Periostracum cicadae, 10 g Bombyx batryticatus, 6 g Mentha haplocalyx,15 g Flos lonicerae, 15 g Forsythia suspense, 5 g Glycyrrhiza uralensis)100% apozem.②Group B was treated with traditional prescriptions B(10 g black cohosh root, 12 g heartleaf houttuynia herb, 12 g centipedae,herba, 9 g coral ardisia root, 12 g Commelina communis, 6 g peach seed, 12 g Japanese ardisia stem and leaf, 10 g astragali,radix, 6 g Cordyceps, 10 g Calyx physalis, 15 g Flos lonicerae, 12 g isatidis,radix, fermented soybean)100% apozem.③Group C was treated with sterile water as solvent control group. Each mouse took intragastrically 0.5 ml apozem or water respectively , Bid×12 days. The blood samples were taken by picking eyeball and subgroup of T cells was counted by flow cytometry(CD4+CD8-,CD8+CD4-,CD4+CD8+,CD4-CD8-). Spleen cells were taken out for cultivation in vitro, stimulated by conA, and the transformation of T lymphocyte was detected by MTT.Results①The ratio of CD4+ and CD8+ of group A was lower than that of B and C groups significantly(P<0.05), there was no significance between group B and group C(P>0.05). ②The transformation of T lymphocytes of Group A was lower than B and C groups significantly(P<0.05), there was no significance between group B and group C(P>0.05).ConclusionA prescription can suppress the transformation of T lymphocytes and lower the ratio of CD4+ and CD8+, so it can suppress cellular immunity function in mice.
       Key words：SARS;  Traditional prescription;  Cellular immune function
       
       本研究以国家中医药管理局公布的一般健康人群预防SARS的中药方，应用动物体内实验法，观察药物对T细胞数量及亚群、淋巴细胞转化的影响，探讨药方的作用机制，为临床用药提供理论依据。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       健康、雌性、昆明品系小白鼠30只，6～8周，体重16～25 g。赣南医学院实验动物中心提供。实验分别在赣南医学院和暨南大学组织移植与免疫研究中心实验室完成。DG-3022型酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂产品；XSZ-D型倒置显微镜，重庆光学仪器厂生产；75-2A型微量振荡器，上海医用分析仪器厂生产；96孔细胞培养板和6孔细胞培养板，德国Nunclon公司生产。采用BD公司FACSCalibur Flow Cytometry system，试剂采用BD公司triTest Three-color reagent，检测分析软件为Multiset自动软件。严格参照仪器及试剂操作规程执行。RPM1640培养基，Gibco公司产品，按其说明用三蒸水配制后过滤除菌，分装后4℃保存，临用前加小牛血清(杭州四季青生物制品厂)达10%和常规量的双抗。伴刀豆素球蛋白(ConA )，用无血清RPM1640培养液配成0.25g/L。四甲基偶氮哇蓝(MTT)，Amresco公司产品，用pH 7.4的PBS液配成5 g/L的溶液，0. 22 μm的微孔滤膜过滤，避光保存。淋巴细胞分离液，上海恒信化学试剂有限公司产品，批号20030617。裂解液、二甲基亚矾(DMSO )，分析纯，苏州正兴化工研究院产品。
       1.2  方法
       1.2.1  动物分组及处理30只小鼠随机等分为3组，分别为A组、B组、C组。①A组(鲜芦根20 g，蝉衣10 g，僵蚕10 g，薄荷6 g，银花15 g，连翘15 g，生甘草5 g)；②B组 (升麻10 g，鱼腥草12 g，鹅不食草12 g，朱砂根9 g，鸭跖草12 g，桃仁6 g，紫金牛12 g，生黄芪10 g，冬虫草6 g，酸浆10 g，金银花15 g，板蓝根12 g，淡豆豉6 g)；③C组(溶剂对照组)。各组小鼠禁食水 17 h，每天上、下午各给药1次，0.5 ml/次。各组动物经各实验因素处理后，断髓处死，取脾，去筋膜，然后用MTT法检测T淋巴细胞转化OD值。
       1.2.2  中药制剂A,B两方的药材均自药房，经鉴定后熬制成1g生药/ml煎剂。
       1.2.3  脾细胞培养脱颈处死小鼠，超净工作台上摘脾，去筋膜，组织研磨器研磨，每只脾加无Ca2+ Mg2+Hanks液2 ml吸上清液于淋巴细胞分离液中，2 500 r/min离心10 min后，取淋巴细胞，装入无Ca2+ Mg2+Hanks液中离心清洗(2 000 r/ min) 10 min。倒掉上清液，吸取余下细胞于培养液中，37℃的CO2孵箱3 d，摇匀1次/d。
       1.2.4  淋巴细胞转化测定用MTT法培养后细胞悬液倒人试管，将抗凝血样用Hanks"s稀释1倍，小心加在淋巴细胞分离液上层，2 000 r/min离心 20 min，吸取中间云雾状白细胞层，用无血清RPM1640。营养液洗两遍，1 500 r/min离心15 min。活细胞计数后，用 RPM11640培养液调整细胞含量为2.5 ×106个/ml，加入到 96孔细胞培养板中，80 μl孔。每孔再加20 μl ConA，每个样品重复4孔，然后置于39.5℃，5% CO2培养箱中培养44 h，每孔加MTT 20 μl，继续培养4 h后，每孔加裂解液100 μl，将细胞板置于微量振荡器上振荡5 min使沉淀完全溶解，在酶联免疫仪上检测570 nm处的吸光值。以转化值作为T淋巴细胞转化的指标。
        转化值＝ConA刺激管OD均值－PBS对照管OD均值
       
       1.2.5  统计学处理用SPSS 14.0软件中单因素方差分析法完成。
       2  结果
       2.1  实验动物数量分析纳入实验小鼠30只，实验中由于操作失误致B，C两组各损失1只小鼠。
       2.2  流式细胞仪检测T细胞亚群CD4+/CD8+结果见表1。经LSD法两两比较，A组与B，C两组有差异；B，C两组间无差异。表1  流式细胞仪检测T细胞亚群结果（略）
       2.3  淋巴细胞转化实验结果见表2。经LSD法两两比较，A组与B，C两组有差异；B，C两组间无差异。表2  淋巴细胞转化实验结果（略）
       3  讨论
        非典型肺炎属于中医“热病”范畴，病因为感受疫毒时邪，病位在肺。其基本病机特点为：热毒痰瘀，壅阻肺络，热盛邪实，湿邪内蕴，耗气伤阴，甚则出现气急喘脱的危象。传染性强，传播迅速，流行广泛，病情严重。
        从对非典治疗的有效方案看，早期使用大剂量激素有利于非典的良好预后。研究发现，非典病人感染病毒后，产生抗肺组织“自身抗体”，造成免疫病理损伤。如果药物能抑制自身免疫反应或调节机体免疫功能，则可起到治疗非典的作用。
       
       A，B两方是国家中医药管理局公布的预防非典中药方。A方实为银翘散减味方剂，重在清凉解表，发散风邪，去除了化痰燥湿的药味，加蝉衣、僵蚕，增加了其祛风透疹的功效。长期用于风热感冒、发热头痛、咳嗽干咳、咽喉肿痛、皮肤瘙痒、惊风抽搐者，但其对免疫功能的影响未见报道。本次实验A、B两方对小鼠细胞免疫功能——T淋巴细胞转化和T细胞亚群进行了研究。研究表明，A方可致小鼠T淋巴细胞转化值和CD4+/CD8+降低，B方和对照组对两者均无明显影响，差异有统计学意义。抑制细胞免疫功能，即能抑制自身免疫反应，减少免疫损伤，可作为治疗用药单独使用或结合西药使用。但作为预防用药，由于抑制细胞免疫功能，也许会产生副作用，故两药方是否能用于预防，得看其是否提高非特异性免疫功能，值得进一步研究。