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       【摘要】 
       目的探讨14C-尿素呼吸试验（14C-UBT）和幽门螺杆菌抗原快速试卡（HpSA）检测儿童患者幽门螺杆菌（Hp）感染的应用价值。方法对68例因上消化道症状接受胃镜检查的儿童进行14C-UBT和幽门螺杆菌粪便抗原快速检验，并同时取胃液标本进行FQ-PCR检测，以FQ-PCR检测结果作为金标准，对14C-UBT和幽门螺杆菌抗原快速试验进行初步评价。结果14C-UBT的敏感性、特异性、准确性分别为93.5%，97.3%，95.6%， HpSA的敏感性、特异性、准确性分别为87.1%，100%，94.1%。结论14C-UBT法的敏感性略优于HpSA法，但HpSA法简便易行，易于在实验室推广使用。
       【关键词】  幽门螺杆菌 感染 抗原 检测
       幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)与慢性胃炎、消化性溃疡的关系日益受到重视，HP感染是儿童上消化道炎症，消化道溃疡的重要病因这一。目前，诊断Hp感染的非侵入方法多以14C-UBT为金标准，但此法在低龄儿童中其特异性降低，且收集此类人群的呼出气体困难［1］。幽门螺杆菌粪便抗原(HpSA)是近年来推广应用于临床的一种非侵入方法。本研究采用14C-UBT试验、HpSA抗原检测卡及FQ-PCR检测，探讨14C-UBT试验、HpSA抗原对检测儿童患者Hp感染的应用价值。
       1  资料与方法
       1.1  研究对象
       选择2006-03～2008-10在我院因上消化道症状接受胃镜检查的儿童患者68例（全部病例均排除4周内服用过抗生素、铋剂、H2受体阻滞剂和质子泵抑制剂等药物），其中男30例，女38例，年龄3.5～14岁。
       1.2  14C-UBT检测
       受检者空腹或禁食>3 h，用水吞服14C尿素胶囊1粒，静坐15 min后往呼气卡内呼气2～5min。当卡上批示窗内片上的颜色由蓝色转为白色时完成采样。将卡插入检测仪进样口，仪器将自动进行检测，显示并打印结果。
       1.3  HpSA检测
       采用美国Meridian公司生产的Hp快速免疫检测卡(Immunocard STAT! HpSA)，操作步骤如下：取5～6 mm直径大小的粪便标本，放入1 ml样品稀释液中，充分混匀后，滴加4滴混合液于检测孔内，5 min内判读结果。结果判读方法参照试剂盒说明书。
       1.4  FQ-PCR仪器系PE公司的PE7700，Hp FQ-PCR试剂盒由上海申友生物技术有限公司提供。核酸提取按试剂盒操作说明书，PCR反应体系设置参见文献［2］：PCR反应液23μl, 核酸提取液模板2μl,混匀后6 000 r/min离心数秒，扩增条件为37℃ 2 min, 然后按94℃ 3min， 94℃25S, 55℃ 30s, 72℃ 40 s进行40次循环，最后25℃恒温10 s。其中荧光激以波长487nm,检测波长525 nm。参比品分别设定为3×105，3×106，3×107copy/ml及阴性对照。小于3×107copy/ml的样本为阴性。
       1.5  统计学处理以FQ-PCR作为金标准，按照试验评价方法，采用四格表分析，计算出敏感性、特异性、准确性。应用SPSS11.0统计软件，组间计数资料的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
       2  结果
       2.1  14C-UBT法与FQ-PCR法比较
       见表1。两法检测结果无显著性意义(χ2=0，P>0.05)， 14C-UBT的敏感性、特异性、准确性分别为93.5%，97.3%，95.6%。表1 14C-UBT法与FQ-PCR法比较（略）
       2.2  HpSA法与FQ-PCR法比较
       见表2。两法检测结果无显著性意义(χ2=2.25，P>0.05)， HpS法的敏感性、特异性、准确性分别为87.1%，100%，94.1%。表2  HpSA法与FQ-PCR法比较（略）
       3  讨论
          
       目前，Hp感染的诊断方法分为侵入性检查和非侵入性检查，侵入性检查易引起交叉感染，非侵入性检查主要包括14C-UBT和HpSA检查。诊断Hp感染最准确的方法是培养检查，常作为Hp感染诊断的金标准，但细菌培养受条件、技术、细菌本身等因素的影响。而FQ-PCR检测胃液中的Hp与培养法相比，不仅有较高的敏感性、特异性，且能克服传统PCR产物污染带来的假阳性问题［3］。故在本研究中以FQ-PCR检测胃液中的Hp作为金标准。
       
       14C-UBT试验是一种高准确性、无创伤的诊断方法，检查相对简单，且敏感性、特异性高，本研究的14C-UBT试验的敏感性93.5%,特异性97.3%,对诊断儿童Hp感染及判断根治Hp效果，随访Hp感染有无反复发作有很好的提示作用。虽然14C是放射性同位素，但由于其辐射剂量低，仍可安全地用于儿童。呼气试验利用的是Hp能产生大量的尿素酶的特性，若胃液中存在金黄色葡萄球菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌等可产生的尿素酶的细菌，可对检测结果产生影响［4］。此外，若患儿年龄太小，其呼出气体的采集也不太方便，故对低龄儿童群体的应用受到了一定的限制。HpSA是检测Hp感染的新方法，胃上皮细胞更新快，定植于上皮细胞表面的Hp随细胞脱落，通过粪便排出体外。HpSA试验留取标本方便，无痛苦，且不受年龄限制，在本研究中的敏感性达87.1%，略低于14C-UBT法。但它适用于儿童乃至婴幼儿Hp感染的检测。粪便标本室温下保存5 d或-20℃下保存亦不影响检测准确性［5］。但由于HpSA纸条上包被的是单克隆抗体，故须4℃下保存，检测前须在室温下平衡30 min。总之，HpSA试卡法适用于婴幼儿诊断Hp现症感染及判断Hp疗效，有着广阔的应用前景。
       【参考文献】
         　　［1］Imrie C, Rowland M, Bourke B,et al. Limitations to carbon 13-labeled urea breath testing for Helicobacter pylori in infants［J］. J Pediatr, 2001 ,139(5):734.
       
       ［2］薛进，袁建芬，喻海忠.荧光定量聚合酶链反应技术在胃幽门螺杆菌检测中的应用［J］. 现代肿瘤医学杂志,2006，14（9）：1110.
       
       ［3］高静云，高庆双.应用PCR技术检测慢性胃炎儿童胃液中幽门螺杆菌［J］. 中国实验诊断学,2008,12(5):673-674.
       
       ［4］Osaki T, Mabe K, Hanawa T, et al. Urease-positive bacteria in the stomach induce a false-positive reaction in a urea breath test for diagnosis of Helicobacter pylori infection［J］. J Med Microbiol,2008 ,57(7):814.
       
       ［5］Koletzko S, Konstantopoulos N, Bosman D, et al. Evaluation of a novel monoclonal enzyme immunoassay for detection of Helicobacter pylori antigen in stool from children［J］. Gut, 2003 ,52(6):804.