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       【摘要】 
       目的建立大花红景天中没食子酸、红景天苷及儿茶素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-水(含0.1%磷酸)，梯度洗脱，流速为1 ml·min-1，检测波长为280 nm，柱温为室温，按外标法定量。结果没食子酸的加样回收率平均为98.4%，RSD=2.78%;红景天苷的加样回收率平均为99.2%，RSD=2.35%;儿茶素的加样回收率平均为98.7%，RSD=2.43%。结论所建立方法简便快速，结果准确，稳定，可以作为红景天药材的质量评价方法。
       【关键词】  大花红景天; 没食子酸; 红景天苷; 儿茶素
       HPLC Determination of Gallic Acid ， Salidroside and Catechin in Rhodiola crenulate
       ZHANG Dan, CAO Weiguo*,
       (TCM College of Chongqing University of Medical Sciences，Chongqing，401331 China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of gallic acid, salidroside and catechin in Rhodiola crenulate. MethodsThe sample was analyzed on Kromasil C18 column under gradient elution. The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid and the flow rate was 1.0ml/min. The wavelength of UV detector was 280nm, the column temperature was room temperature, and the quantification was performed with external standard method. ResultsFor gallic acid, the average recovery was 98.4%, and the RSD was 2.78%. For salidroside, the average recovery was 99.2%, and the RSD was 2.35%. For catechin, the average recovery was 98.7%, and the RSD was 2.43%. ConclusionThe method is quick, simple and accurate, and it can be used for quality control of Rhodiola crenulate.
       Key words：Rhodiola crenulate; Gallic acid; Salidroside; Catechin
       大花红景天Rhodiola crenulata (Hook.f.et Thoms)H. Ohba为景天科红景天属植物，为《中国药典》所收录的品种，具有抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等作用，其主要的化学成分有红景天苷、儿茶素、没食子酸、没食子酸乙酯等[1]。考虑到中药材有效成分的协同作用，本文拟建立一种同时测定红景天中的代表性成分红景天苷、儿茶素和没食子酸的方法，用于较全面的评价红景天药材的质量。目前国内外学者对红景天中红景天苷的含量测定报道较多[2～4]，但是还未见同时测定红景天中没食子酸、红景天苷和儿茶素的文献报道，我们采用高效液相色谱(HPLC)法测定了大花红景天中没食子酸、红景天苷和儿茶素的含量，以期为红景天药材的质量评价提供实验依据。
       1 仪器与试药
       Waters515高效液相色谱仪，2996二极管阵列矩阵检测器，Empower pro色谱工作站，Millipore溶剂过滤系统，METIER TOLEDO AG 204电子分析天平。没食子酸、红景天苷和儿茶素对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。大花红景天药材样品于2007-09采自青海省果洛，采样量3 kg，样品经中国科学院西北高原生物研究所鉴定为大花红景天。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件色谱柱为Phenomenex kromasic C18柱(5μm，250 mm×460 mm);流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.1%的磷酸水溶液，梯度洗脱程序：0 min(5%A),10 min(5%A),60 min(100%A);检测波长：280 nm;流速：1.0 ml·min-1;柱温为室温;在此条件下各组分得到良好分离。液相色谱图见图1。
       A 对照品色谱图 B红景天样品色谱图
       a-没食子酸 b-红景天苷 c-儿茶素
       图1 样品高效液相色谱图
       2.2 对照品溶液的制备分别精密称取干燥至恒重的没食子酸对照品11.26 mg，红景天苷对照品6.15 mg，儿茶素对照品7.08 mg，分别置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，作为对照品储备溶液，用时各精密量取1 ml混合即得对照品溶液。
       2.3 供试品溶液的制备取大花红景天样品，粉碎过40目筛，60℃干燥至恒重，精密称取此粉末1 g，置100 ml具塞三角瓶中，加入100 ml 50%甲醇水溶液，超声处理60 min，放冷，滤过，取续滤液10 ml置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0.45 μm)，取续滤液作为供试品溶液。
       2.4 线性关系的考察精密量取没食子酸、红景天苷、儿茶素对照品溶液适量混合，加甲醇制成标准系列进样测定。以色谱峰面积A对进样量M(μg)进行线性回归，结果表明各组分在各自进样量范围内线性关系良好，线性范围、回归方程、回归系数见表1。表1 标准曲线
       2.5 精密度实验在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液各10 μl，重复进样5次，结果测得峰面积的RSD分别为没食子酸1.46%，红景天苷1.91%，儿茶素1.87%(n=5)。
       2.6 重复性实验在上述色谱条件下，取同一样品按样品溶液的制备方法平行制备5份，分别进样10 μl，同时取混合对照品溶液进样10 μl，按外标法测定其含量并计算RSD，没食子酸2.55%，红景天苷1.87%，儿茶素2.38%。
       2.7 稳定性实验取同一供试品溶液，按上述色谱条件测定，每2 h测定1次，每次进样10 μl，共6次，测得峰面积的RSD分别为没食子酸2.12%，红景天苷1.48%，儿茶素1.96%(n=5)。
       2.8 加样回收率实验取已知含量的大花红景天药材细粉6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液，按照样品溶液制备方法制备并测定，计算平均回收率。结果没食子酸的平均回收率为98.4%，RSD=2.78%;红景天苷的平均回收率为99.2%，RSD=2.35%;儿茶素的平均回收率为98.7%，RSD=2.43%。
       2.9 样品含量测定 分别精密吸取对照品混合溶液和供试品溶液各10μl，按上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中没食子酸，红景天苷和儿茶素的含量。结果见表2。表2 样品测定结果
       3 讨论
       采用HPLC法测定大花红景天中有效成分的含量，方法简便快速，结果准确、可靠，可作为大花红景天药材质量控制的依据。
       3.1 流动相的选择 由于没食子酸、红景天苷、儿茶素的极性都比较大，必须使用极性大的流动相才能使其较好的分离。本实验中，曾试验了流动相①甲醇-水(10∶90)，②乙腈-水(10∶90)，③乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)，④甲醇-0.1%磷酸溶液系列，通过考察发现采用甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱，可以实现被测成分与其他物质的良好分离，且重现性较好。
       3.2 样品制备方法的选择 采用甲醇、50%甲醇、水3种溶剂，超声提取和加热回流提取两种方法，结果50%甲醇超声提取60 min和加热回流提取60 min的提取率最高，而超声提取简单易于操作，因此选定50%甲醇超声提取60 min为样品制备方法。
       【参考文献】
         　　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S]. 北京：化学工业出版社，2005：106.
       
       [2] 李维卫, 胡凤祖，陈世龙,等. 青藏高原红景天药材的HPLC指纹图谱[J].西北植物学报,2004,24(9):1744.
       
       [3] 马 潇, 宋玉成,谢 楠, 等. HPLC法测定大花红景天中红景天苷及没食子酸的含量[J]. 药物分析杂志,2005,25(1):58.
       
       [4] 安伟建, 陈 冠, 王文彤,等. HPLC法测定不同产地红景天属植物中红景天苷[J]. 中草药,2007,38(7):1096.