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       【摘要】 
       目的分析不同采收期、贮藏期、生长条件及取材部位的太子参中多糖的含量，探讨太子参多糖的动态积累及其变化规律。方法用HPLC-ELSD法测定多糖的含量。以葡萄糖为对照品，测定太子参多糖中葡萄糖含量，求出多糖换算因子，将样品液中测得的葡萄糖量换算出多糖含量。结果不同生长期太子参中多糖的动态积累具有一定规律;贮藏时间对太子参中多糖含量具有一定影响;太子参野生品与栽培品、主根与参尾中多糖含量具有一定差异。结论 为太子参药材的采收、加工与贮藏及其质量评价提供了依据。
       【关键词】  太子参; 多糖; 含量分析; 动态变化
       Study on the Dynamic Change of Polysaccharide Content in Radix Pseudostellariae
       QIANG Jing1，FANG Kehui1,LIU Xunhong2，SONG Jianping3，WANG Lijuan2，ZENG Yanping2
       (1.Yangzhou Institute for Drug Control，Yangzhou 225009，China;2.Nanjing University of TCM，Nanjing 210046，China;3.Yancheng Health Vocational & Technical College, Yancheng 224006，China)
       Abstract：Objective To analyze the content of polysaccharide in Radix Pseudo stellariae from different harvest time,storage time, growth condition and drawed meterial, and determine the dynamic change of polysaccharide content in Radix Pseudostellariae. MethodsPolysaccharide was tested by HPLC-ELSD.With glucose as standard,the purified polysaccharide was hydrolyzed to glucose, and the polysaccharide conversion factor was culculated. Through the conversation factor,the content of glucose was converted to the content of polysaccharide in different samples. ResultsThe accumulation of polysaccharide showed a regular pattern in different growth time;Storage time had effect on content of polysaccharide in Radix Pseudostellariae, and the content of polysaccharide was different in wilding and cultivated sample , in the bodies and roots of Radix Pseudostellariae. ConclusionThis experiment provides theory foundation for scientific harvest, processing,storage and quality assessment of Pseudostellaria heterophylla.
       Key words： Radix Pseudostellariae; Polysaccharide; Content analysis; Dynamic Change
       太子参为《中国药典》收载的常用中药，具益气健脾、生津润肺之功效，临床用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不足、自汗口渴、肺燥干咳等症，尤其是治疗小儿脾虚而食欲不佳的要药。药理试验表明，太子参多糖具有增强机体免疫功能的作用[1，2]。太子参多糖为中性葡聚糖[3]，有关太子参多糖含量测定一般多采用硫酸-苯酚比色法 [4～6]，还有采用SE-HPLC法测定[3]，本文在建立多糖HPLC-ELSD测定方法，分析不同产地太子参多糖含量[7]的基础上,对不同采收时间、不同贮藏时间、不同取材部位以及野生与栽培的太子参样品进行了分析，为太子参药材的合理采收、科学加工与贮藏及其质量评价提供依据。
       1 仪器与试药
       岛津LC-10AD高效液相色谱仪，Allfech500型蒸发光散射检测器，HW-2000色谱数据工作站;Shimadzu AY220电子天平;KQ-500B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
       葡萄糖对照品(Sigma公司)，甲醇(江苏汉邦科技有限公司，色谱纯，批号2005051802)，双重蒸馏水，硫酸(批号061030558)等试剂均为化学纯。
       太子参不同采收时间(S1～S7分别为：20050515，20050625，20050715，20050810，20050827，20050920，20051010)、不同贮藏时间(S8～S11分别为20050927，20060425，20061025，20070425)及块根不同部位(S12～S13分别为：主根、参尾)的样品均采自江苏句容天王镇朱巷村白龙地;S14～S15分别为江苏句容白杨村、江苏江宁栽培品;S16～S17分别为江苏南京极山、江苏南京茅山野生品。经笔者鉴定均为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.的块根。留样凭证存放于南京中医药大学中药鉴定实验室。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件色谱柱为汉邦 Kromasil C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为CH3OH-H2O(5∶95);流速0.8 ml/min;柱温30℃;检测器漂移管温度115℃;分析时间5 min;进样量20 μl。
       2.2 标准曲线的制备精密称取葡萄糖对照品20 mg，置10 ml容量瓶中，加双蒸水溶解并稀释至刻度，为标准贮备液。精密量取标准贮备液5 ml置10 ml容量瓶中，得到1 000μg/ml的标准溶液，然后依次稀释一倍得到浓度为500，250，125 μg/ml，62.5 μg/ml的标准系列溶液。分别吸取标准系列溶液各20 μl, 进样，测定峰面积，以葡萄糖浓度的对数(X)为横坐标，葡萄糖峰面积的对数(Y)为纵坐标，线性回归，得到线性方程是：Y=1.1 883X+3.391，r=0.999 5。结果见表1。表1 葡萄糖线性关系
       2.3 多糖的提取与精制称取已干燥的太子参(S8)粗粉(60目)200 g,用工业乙醇回流提取6 h，回收乙醇。残渣挥干后,用双蒸水回流提取3次，提取液减压浓缩后，加95%乙醇使含醇量达80%,静置过夜，滤取白色沉淀，用双蒸水溶解，用Sevag法去蛋白质，上清液加90%乙醇使含醇量达80%，静置过夜，滤取沉淀，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多次，真空干燥，得太子参多糖。
       2.4 多糖换算因子的测定
       2.4.1 多糖水解液的制备 精密称取多糖10 mg，于10 ml具塞刻度试管中，加1 mol/ml H2SO4 2 ml，封管100℃恒温水解4 h，冷却后用饱和Ba(OH)2中和至中性，离心分离(5 000 r/min,10 min)除去BaSO4沉淀，取上清液至10 ml容量瓶中，定容，经0.45 μm微孔滤膜，备用。
       2.4.2 多糖换算因子的测定取多糖水解液20 μl，进样，测定峰面积，由线性方程求出多糖中葡萄糖含量，按下式f= W/(C×D)[ W为多糖的重量(μg)，C为多糖中葡萄糖含量(μg)，D为多糖的稀释因数]计算换算因子，测得f=1.302 5。
       2.5 样品溶液的制备精密称取太子参样品1.0 g，置100 ml圆底烧瓶中,加80%乙醇80 ml， 水浴90°C回流提取3 h,趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤(10 ml×3)。残渣连同滤纸置圆底烧瓶中,加超纯水80 ml,水浴提取2h, 趁热过滤，残渣及烧瓶用热超纯水洗涤(5 ml×4), 洗液并入滤液，移入100 ml容量瓶中，定容。精密吸取样品液5ml，于10 ml具塞刻度试管中，加1 mol/ml H2SO4 1 ml，封管100℃恒温水解2 h，冷却后用饱和的Ba(OH)2中和至中性，离心分离(5 000 r/mim,10min) 除去BaSO4沉淀，取上清液至10 ml容量瓶中，定容，经0.45μm微孔滤膜，供测试。
       2.6 方法学考察
       2.6.1 精密度实验 精密吸取葡萄糖标准溶液(500μg/ml)，重复进样5次，测定葡萄糖峰面积，其峰面积相对标准偏差RSD为3.03%。
       2.6.2 稳定性实验 精密称取太子参样品(S8)，制成样品溶液，分别于制备后0，1，2，3，4，5，6，7，8 h进行测定，葡萄糖峰面积相对标准偏差RSD为1.87%，说明样品液在8 h内基本稳定。
       2.6.3 重复性实验 精密称取太子参样品(S8)，5份，制成样品溶液，进样，测定样品中葡萄糖含量，求出多糖含量，多糖含量相对标准偏差RSD为2.65%，说明含测方法可行。
       2.6.4 加样回收率实验 精密称取6份太子参样品(S8)1 g，6份，加入太子参多糖100 mg，制备样品液，进样，测定葡萄糖含量，求出多糖含量。根据样品(S8)多糖含量为20.22%，计算加样回收率。结果见表2。表2 太子参多糖加样回收率实验
       2.7 样品多糖含量测定精密吸取各样品液20 μl，进样,测定葡萄糖峰面积，由线性方程求出样品液中葡萄糖的浓度，再按下式：多糖含量%=(C×D/W)×f [W为样品重量(μg)，C为多糖中葡萄糖浓度(μg/ml),D为样品溶液稀释因数,f为多糖换算因子] ,计算样品中多糖含量。结果见表3及图1。
       3 讨论
       3.1 多糖水解条件的选择对多糖水解时间和水解时硫酸用量进行了考察。取多糖10 mg，6份，分别加1 mol/ml H2SO4 1，2 ml，分别水解2，4，6 h，制备多糖水解液，进样，测定葡萄糖峰面积，结果表明，加1 mol/ml H2SO4 2 ml，水解4h，葡萄糖峰面积不再增加，即水解完全，故确定1 mol/ml H2SO4 2 ml水解4 h作为多糖水解条件(表4)。表3 太子参中多糖含量测定结果表4 不同水解条件下的多糖中葡萄糖峰面积
       3.2 样品水解时间选择 取样品(S8)提取液5 ml ，3份，加1 mol/ml H2SO4 1 ml，分别水解1，2，4 h，制备样品液，进样，测定葡萄糖峰面积，结果葡萄糖峰面积分别为6 560 342，6 797 850，6 797 231，说明2 h水解完全，故确定2 h作为水解时间。见图2。
       图2 样品水解时间(1，2，4 h)
       3.3 多糖组分分析 太子参多糖水解液和样品液进样检测，均为一单峰，且与葡萄糖标准品峰保留时间一致，进一步证明太子参多糖为葡聚糖。结果见图3。
       1.葡萄糖对照品(t/min 3.047) 2.多糖水解液(t/min 3.037)
       3.样品液(t/min 3.044)
       图3 葡萄糖对照品、多糖水解液及样品液的HPLC-ELSD色谱图
       太子参中多糖类成分具免疫活性，能增强人体抵抗力，故可作为药材质量分析的一项指标。分析结果初步表明，不同采收时间太子参中多糖的动态积累呈现规律性变化，以7～9月份含量较高，其积累曲线最大峰值与传统采收期基本一致;贮藏时间对太子参中多糖的含量具有一定影响，随贮藏时间延长，多糖含量下降;太子参主根多糖含量高于参尾，说明药材加工过程中，修剪去除参尾，可提高太子参多糖含量，提高药材质量;野生太子参多糖含量明显低于栽培太子参，野生太子参多生于树荫下，采光量相对较少，是否对多糖的积累有影响有待进一步探讨。
       【参考文献】
         　　[1] 刘训红，阚毓铭. 太子参研究概述[J].时珍国医国药，2000，11(12):1131.
       
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