布渣叶的化学成分研究
作者：杨 茵1,2，李硕果1,2，叶文才1,2，江仁望1,2*
作者单位：(1.暨南大学药学院中药及天然药物研究所，广东 广州 510632;2.暨南大学 中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室，广东 广州 510632)
《时珍国医国药》 2010年 第11期
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【摘要】
目的研究布渣叶的化学成分。方法采用硅胶、凝胶Sephadex LH-20、反相ODS柱色谱以及制备性高效液相色谱等多种方法对布渣叶(Microcos paniculata L.)进行分离纯化，并结合光谱学方法鉴定化合物的结构。结果从布渣叶中分离得到12个化合物，分别鉴定为异鼠李素①、山萘酚②、异香草酸③、对香豆酸④、阿魏酸⑤、脱落酸⑥、牡荆苷⑦、异牡荆苷⑧、水仙苷⑨、异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷⑩、异佛莱心苷、表儿茶素及山萘酚3-O-β-D-(6-O-反式对羟基桂皮酰)葡萄糖苷。结论其中化合物1～6以及化合物12～13为首次从该植物中分离得到。
【关键词】 布渣叶; 化学成分; 黄酮
Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of Microcos paniculata L. MethodsThe chemical components were isolated by silica gel, Sephadex LH-20, ODS and preparative HPLC chromatographies, and their structures were elucidated by spectral analysis. ResultsTwelve compounds were isolated and identified as isorhamnetin (1), kaempferol (2), isovanillic acid (3), p-coumaric acid (4), ferulic acid (5), abscisic acid (6), vitexin (7), isovitexin (8), narcissin (9), isorhamnetin3-O-β-D-glucopyranoside (10), isoviolanthin (11), epicatechin (12) and kaempferol3-O-β-D-(6-O-trans-p-coumaroyl)glucopyranoside(13), respectively. ConclusionCompounds 1～6 and compounds 12～13 were isolated from this plant for the first time.
Key words：Microcos paniculata L; Chemical constituents; Flavonoid
布渣叶Microcos paniculata L.为椴树科(Tiliaceae)布渣叶属(Microcos L.)植物的叶，主产于我国岭南地区，亦称为破布叶[1]。本品味微酸，性平，具有清热解毒、消食导滞、解渴开胃的功效，民间常泡茶饮用，用于治疗感冒，咽喉痛，消化不良，腹胀及黄疸等[2]。布渣叶也是多种凉茶如“广东凉茶”“王老吉”“甘和茶”“仙草爽凉茶” 及中成药如“十味溪黄草颗粒”等的主要组成药物[3]。化学成分研究方面，Bandara等[4]从布渣叶的茎和树皮中分离得到一个生物碱成分，罗集鹏等[5]从其叶中分离得到5个黄酮类化合物，冯世秀等[6]从叶中也分到三萜和黄酮类成分。为了进一步对广东道地中草药的化学成分及质量标准进行研究，本课题组从布渣叶中分离得到12个化合物，经光谱鉴定为异鼠李素(1)、山萘酚(2)、异香草酸(3)、对香豆酸(4)、阿魏酸(5)、脱落酸(6)、牡荆苷(7)、异牡荆苷(8)、水仙苷(9)、异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷(10)、异佛莱心苷(11)、表儿茶素(12)及山柰酚3-O-β-D-(6-O-反式对羟基桂皮酰)、葡萄糖苷(13)。其中化合物1～6和12～13为首次从该植物中分离得到。
1 仪器与材料
X-4型显微熔点测定仪(温度计未校正);BRUKER AV-400型核磁共振仪;Finnigan LCQ Advantage MAX质谱仪。薄层色谱和柱色谱用硅胶(200～300目，100～200目)均为青岛海洋化工厂生产，ODS柱色谱材料为日本Fuji填料生产公司生产;Sephadex LH-20为Amersham Biosciences Swede公司产品;制备HPLC柱为反相C18 (cosmosil, 5μm, 250 mm×10 mm),液相用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。实验药材于2008-09购自广州通济堂药房，由暨南大学生药学研究室周光雄教授鉴定为布渣叶，标本保存于暨南大学中药及天然药物研究所。
2 提取分离
布渣叶5 kg粉碎后用95%乙醇渗滤提取，合并提取液减压浓缩至无醇味，得到浸膏450 g。浸膏混悬于适量水中，依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取，分别得到萃取物137 g，27 g和154 g。醋酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，以环己烷-丙酮(20∶1～1∶1)梯度洗脱，得到组分Fr. 1 ～ Fr. 7。其中Fr. 3重结晶得到化合物1(50 mg)后，其剩余物过Sephadex LH-20柱层析以及制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物3(10 mg)。Fr. 4经Sephadex LH-20柱层析纯化得到化合物2(30 mg)，再经制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物4(40 mg)，化合物5(24 mg)和化合物6(10mg)。正丁醇萃取物用大孔树脂柱层析分离，乙醇-水梯度洗脱，得到组分fr.1～fr.4。其中fr.1经重结晶纯化得到化合物7(15 mg)，fr.1的剩余物经中压反相柱层析以及Sephadex LH-20柱层析反复纯化得到化合物8(40 mg)、化合物9(20 mg)以及化合物10(8 mg)。 fr.2组分经多次硅胶柱层析并结合制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物11(30 mg)、化合物12(9 mg)以及化合物13(15 mg)。
3 结构鉴定
化合物1：黄色粉末，mp 302～303℃，ESI-MS m/z: 315[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：12.5 (1H, s, 5-OH), 10.8 (1H, s, 7-OH), 9.7 (1H, s, 4′-OH), 9.4 (1H, s, 3-OH), 7.75 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2′), 7.68 (1H, dd, J=8.4, 2.0 Hz, H-6′), 6.94 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5′), 6.48 (1H, d, J =2.0 Hz, H-8), 6.20 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6), 3.84 (3H, s, 3′-OCH3)。13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 147.3 (C-2), 135.8 (C-3), 175.8 (C-4), 160.6 (C-5), 98.2 (C-6), 163.9 (C-7), 93.5 (C-8), 156.1 (C-9), 103.0 (C-10), 121.9 (C-1′), 111.7 (C-2′), 148.8 (C-3′), 146.6 (C-4′), 115.5 (C-5′), 121.6 (C-6′), 55.9 (-OCH3)。以上数据与文献[7]的异鼠李素的波谱数据一致，故鉴定化合物1为异鼠李素。
化合物2：黄色粉末，mp 267～268℃，ESI-MS m/z: 285[M-H]-。 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：12.5 (1H, s, 5-OH), 8.05 (2H, d, J=8.9 Hz,H-2′, 6′), 6.93 (2H, d, J=8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.44 (1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6)。13C-NMR(100 MHz, DMSO-d6) δ: 146.8 (C-2), 135.6 (C-3), 175.9 (C-4), 160.7 (C-5), 98.2 (C-6), 163.9 (C-7), 93.4 (C-8), 156.1 (C-9), 103.0 (C-10), 121.6 (C-1′), 129.5 (C-2′, 6′), 115.4 (C-3′, 5′), 159.2 (C-4′)。以上数据与文献[8]报道的山萘酚的波谱数据一致，故鉴定化合物2为山萘酚。
化合物3：白色粉末，mp 208～209℃，ESI-MS m/z: 167[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ：7.54 (1H, d, J=8.7 Hz, H-6), 7.54 (1H, br s, H-2), 6.83 (1H, d, J=8.7 Hz, H-5), 3.88 (3H, s, 4-OCH3)。13C-NMR(100 MHz, CD3OD) δ: 170.1 (COOH), 152.7 (C-4), 148.7 (C-3), 125.3 (C-2), 113.9 (C-5), 56. 4 (OCH3)。以上数据与文献[9]报道的异香草酸的波谱数据一致，故鉴定化合物3为异香草酸。
化合物4：白色粉末，mp 175～177℃，ESI-MS m/z: 163[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ：7.60 (1H, d, J=16.0 Hz, H-3), 7.43 (2H, d, J=8.6 Hz, H-6, 8), 6.80 (2H, d, J=8.6 Hz, H-5, 9), 6.27 (1H, d, J=16.0 Hz, H-2)。13C-NMR(100 MHz, CD3OD) δ: 171.1 (C-1), 115.7 (C-2), 146.6 (C-3), 127.3 (C-4), 131.1 (C-5, 9), 116.8 (C-6,8), 161.1 (C-7)。以上数据与文献[10]报道的对香豆酸的波谱数据一致，故鉴定化合物4为对香豆酸。
化合物5：白色晶体，mp 170～172℃，ESI-MS m/z: 193[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ：7.58 (1H, d, J=15.8 Hz, H-3), 7.16 (1H, d, J=1.8 Hz, H-5), 7.04 (1H, dd, J=8.1, 1.8 Hz, H-9), 6.80 (1H, d, J=8.1 Hz, H-8), 6.30 (1H, d, J=15.8 Hz, H-2), 3.30 (3H, s, 6-OCH3); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) δ: 171.0 (C-1), 123.0 (C-2), 146.9 (C-3), 127.8 (C-4), 111.8 (C-5), 150.5 (C-6), 149.4 (C-7), 116.0 (C-8), 116.5 (C-9), 56.5 (-OCH3)。以上数据与文献[11]报道的阿魏酸的波谱数据一致，故鉴定化合物5为阿魏酸。
化合物6：白色结晶，ESI-MS m/z: 287[M+Na]+, 263[M-H]-。1H-NMR (400 MHz，CD3OD) δ: 7.76 (1H, d, J=16.0 Hz), 6.23 (1H, d, J=16.0 Hz), 5.91 (1H, s), 5.74 (1H, s), 2.52 (2H, d, J=16.9Hz), 2.17 (2H, d, J=16.9 Hz), 2.03 (3H, d, J=1.1 Hz), 1.92 (3H, d, J=1.2 Hz), 1.06 (3H, s), 1.02 (3H, s)。以上数据与文献[12]报道的脱落酸的波谱数据一致，故鉴定化合物6为脱落酸。
化合物7：黄色粉末，mp 260～262℃，ESI-MS m/z: 431[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：8.02 (2H, d, J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d, J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.77 (1H, s, H-3), 6.27 (1H, s, H-6); 13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 163.9 (C-2), 102.4 (C-3), 182.0 (C-4), 161.1 (C-5), 98.1 (C-6), 162.5 (C-7), 104.6 (C-8), 156.0 (C-9), 104.0 (C-10), 121.6 (C-1′), 129.0 (C-2′, 6′), 115.8 (C-3′, 5′), 160.3 (C-4′), 73.3 (C-1′′), 70.8 (C-2′′), 78.6 (C-3′′), 70.5 (C-4′′), 81.8 (C-5′′), 61.3 (C-6′′)。以上数据与文献[13]报道的牡荆苷的波谱数据一致，故鉴定化合物7为牡荆苷。
化合物8：黄色粉末，ESI-MS m/z: 431[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：7.92 (2H, d, J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.92 (2H, d, J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.77 (1H, s, H-3), 6.52 (1H, s, H-8); 13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 163.3 (C-2), 102.6 (C-3), 181.7 (C-4), 161.2 (C-5), 108.9 (C-6), 163.3 (C-7), 93.8 (C-8), 156.3 (C-9), 102.6 (C-10), 121.0 (C-1′), 128.4 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 160.7 (C-4′), 73.2 (C-1′′), 70.6 (C-2′′), 79.0 (C-3′′), 70.2 (C-4′′), 81.5 (C-5′′), 61.4 (C-6′′)。以上数据与文献[14]报道的异牡荆苷的波谱数据一致，故鉴定化合物8为异牡荆苷。
化合物9：黄色粉末，ESI-MS m/z: 647[M+Na]+, 623[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：7.84 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2′), 7.51 (1H, dd, J=2.0, 8.4 Hz, H-6′), 6.90 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5′), 6.36 (1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 6.14 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6), 5.41 (1H, d, J=7.3 Hz, H-1′′), 3.83 (3H, s, 3′-OCH3), 0.99 (3H, d, J=6.2 Hz, rhaCH3); 13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 156.6(C-2), 133.0 (C-3), 177.1 (C-4), 161.1 (C-5), 99.2 (C-6), 165.7(C-7), 94.0(C-8), 156.3 (C-9), 103.5(C-10), 121.1(C-1′), 113.3(C-2′), 149.5(C-3′), 146.9 (C-4′), 115.1(C-5′), 122.3(C-6′), 55.6 (-OCH3), 101.4 (C-1′′), 74.3 (C-2′′), 76.5 (C-3′′), 70.1(C-4′′), 75.9(C-5′′), 66.9 (C-6′′), 100.9 (C-1′′′), 70.3 (C-2′′′), 70.6 (C-3′′′), 71.8 (C-4′′′), 68.3 (C-5′′′), 17.7 (C-6′′′)。以上数据与文献[15]报道的水仙苷的波谱数据一致，故鉴定化合物9为水仙苷。
化合物10：黄色粉末，ESI-MS m/z: 501[M+Na]+, 477[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：12.5 (1H, s, 5-OH), 7.93 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2′), 7.47 (1H, dd, J=8.4, 2.0 Hz, H-6′), 6.90 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5′), 6.28 (1H, s, H-8), 6.07 (1H, s, H-6), 3.83 (3H, s, 3′-OCH3), 5.54 (1H, d, J=7.4 Hz, H-1"")。13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 156.6 (C-2), 132.7 (C-3), 177.1 (C-4), 161.0 (C-5), 98.5 (C-6), 164.0 (C-7), 93.4 (C-8), 156.1 (C-9), 103.7 (C-10), 119.5 (C-1′), 113.4 (C-2′), 149.3 (C-3′), 146.8 (C-4′), 115.1 (C-5′), 121.8 (C-6′), 55.6 (-OCH3), 101.0 (C-1′′), 74.3 (C-2′′), 76.4 (C-3′′), 69.8 (C-4′′), 77.3 (C-5′′), 60.6 (C-6′′)。以上数据与文献[6]报道的异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷的波谱数据一致，故鉴定化合物10为异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物11：黄色粉末，EI-MS m/z: 602[M+Na]+, 577[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.02 (2H, d, J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.89 (2H, d, J =8.8 Hz, H-3′,5′), 6.80 (1H, s, H-3), 1.26 (3H, d, J=5.2 Hz, rha CH3); 13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 164.1 (C-2), 102.4 (C-3), 182.2 (C-4), 157.2 (C-5), 107.1 (C-6), 161.2 (C-7), 105.0 (C-8), 155.1 (C-9), 103.2 (C-10), 121.6 (C-1′), 129.0 (C-2′, 6′), 115.9 (C-3′, 5′), 162.0 (C-4′), 73.3 (C-1′′), 70.8 (C-2′′), 78.7 (C-3′′), 70.6 (C-4′′), 81.9 (C-5′′), 61.4 (C-6′′), 74.5 (C-1′′′), 72.2 (C-2′′′), 74.1 (C-3′′′), 71.8 (C-4′′′), 77.3 (C-5′′′), 18.2 (C-6′′′)。以上数据与文献[6]报道的异佛莱心苷的波谱数据一致，故鉴定化合物11为异佛莱心苷。
化合物12：黄色粉末，mp 170～171℃，ESI-MS m/z: 289[M-H]-。1H-NMR (400 MHz，CD3OD) δ: 6.96 (1H, d, J=1.6 Hz, H-2′), 6.79 (1H, dd, J=8.2, 1.6 Hz, H-6′), 6.75 (1H, d, J=8.2 Hz, H-5′), 5.93 (1H, d, J =2.1 Hz, H-8), 5.91 (1H, d, J=2.2 Hz, H-6), 4.16 (1H, m, H-3), 4.56 (1H, d, J=7.3 Hz, H-2), 2.86 (1H, dd, J=16.8, 4.6 Hz, H-4a), 2.72 (1H, dd, J=16.8, 2.9 Hz, H-4b); 13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 80.0 (C-2), 67.5 (C-3), 29.2 (C-4), 157.6 (C-5), 96.0 (C-6), 157.4 (C-7), 95.4 (C-8), 158.0 (C-9), 100.1 (C-10), 132.2 (C-1′), 115.3 (C-2′), 145.9 (C-3′), 145.8 (C-4′), 115.9 (C-5′), 119.4 (C-6′)。以上数据与文献[16]报道的表儿茶素的波谱数据一致，故鉴定化合物12为表儿茶素。
化合物13 黄色粉末，ESI-MS m/z: 617[M+Na]+, 593[M-H]-。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ: 7.99 (2H, d, J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.86 (2H, d, J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.15 (1H, s, H-6), 6.39 (1H, s, H-8), 7.36 (1H, d, J=16.0 Hz, H-3′′′), 6.12 (1H, d, J=16.0 Hz, H-2′′′), 6.79 (2H, d, J=8.4 Hz, H-5′′′, 9′′′), 7.37 (2H, d, J=8.4 Hz, H-6′′′, 8′′′); 13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 156.3 (C-2), 133.0 (C-3), 177.4 (C-4), 161.1 (C-5), 98.7 (C-6), 164.2 (C-7), 93.6 (C-8), 156.4 (C-9), 103.8 (C-10), 120.7 (C-1′), 130.8 (C-2′, 6′), 115.0 (C-3′, 5′), 160.0 (C-4′), 101.0 (C-1′′), 76.2 (C-2′′), 74.2 (C-3′′), 69.6 (C-4′′), 74.1 (C-5′′), 62.9 (C-6′′), 166.1 (C-1′′′), 113.6 (C-2′′′), 144.5 (C-3′′′), 124.9 (C-4′′′), 130.1 (C-5′′′, 9′′′), 115.7 (C-6′′′, 8′′′), 160.0 (C-7′′′)。以上数据与文献[17]报道的山萘酚3-O-β-D-(6-O-反式对羟基桂皮酰)葡萄糖苷的波谱数据一致，故鉴定化合物13为山萘酚3-O-β-D-(6-O-反式对羟基桂皮酰)葡萄糖苷。
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