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       【摘要】 
       目的观察比较半夏泻心汤、四逆散、左金丸、半夏泻心汤合四逆散(半四合方)、半夏泻心汤合四逆散及左金丸(半四左合方)等5个胃肠复方对实验性胃溃疡和胃液分泌的影响。方法采用小鼠水浸应激型胃溃疡、大鼠盐酸乙醇型胃溃疡模型进行实脸，观察5个复方对胃溃疡的抑制作用，采用幽门结扎法观察5个方剂对大鼠胃液分泌的影响。结果5个复方中，四逆散仅可降低大鼠胃液游离酸度(P<0.05)，其余4个复方均可降低大鼠胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性(P<0.05，P<0.01)，但以半四方和半四左方降低尤为显著(P<0.01)。半四左合方并可增加胃壁结合粘液量(P<0.05)。5个复方对小鼠水浸应激溃疡和大鼠盐酸乙醇胃溃疡均有一定保护作用(P<0.05，P<0.01)，其中以半四左方作用最为显著(P<0.01)。结论合方组方在发挥中医治疗的整体作用方面具有明显优势，在对抗有害病理因素损害方面也呈现较强协同作用。合方配伍组方有其合理性和科学性，但其规律有待进一步探讨。
       【关键词】  方剂; 胃溃疡; 胃液分泌
       半夏泻心汤、四逆散、左金丸3方为中医治疗胃肠消化系统病证的传统名方。我们在临床实践中发现，用上述3方中的半夏泻心汤与四逆散组成合方(以下简称半四合方)或半夏泻心汤、四逆散、左金丸3方组成合方(以下简称半四左合方)辨证加减治疗消化性溃疡、慢性胃炎和功能性消化不良等证，疗效较佳，大大优于应用上述单个方剂治疗。其对胃肠运动影响的实验研究显示，半四合方和半四左合方减轻小鼠胃肠运动抑制效果较一方单用为好，半四左合方且对小鼠胃肠运动亢进呈现有意义的调整作用[1]，本实验则观察比较半夏泻心汤、四逆散、左金丸、半四合方、半四左合方5个方剂对实验性胃溃疡和胃液分泌的影响，探索它们作用的异同及特点，以研究验证合方组方方法的合理性并探索其规律，为研究以合方创制新方提供方法和思路。
       1 材料
       1.1 动物健康昆明种小鼠，SD大鼠，均购自南昌大学医学院实验动物中心。
       1.2 药物①半夏泻心汤和四逆散的药物组成和剂量按《伤寒论》拟定，其中半夏泻心汤中的人参以2倍量党参代替。半夏泻心汤： 制半夏9 g，黄芩6 g，干姜6 g，党参12 g，黄连3 g，甘草6 g，大枣10 g;四逆散： 甘草6 g，柴胡6 g，枳实6 g，白芍9 g。左金丸的药物组成和剂量按《丹溪心法》拟定，左金丸： 黄连6 g，吴茱萸1 g。半四合方和半四左合方的药物组成和剂量在上述几个方剂的基础上，根据临床实践经验进行整合调整。其中黄连与吴茱萸的比例改为3∶1，枳实改为枳壳。半四合方： 制半夏9 g，黄芩6 g，干姜6 g，党参12 g，黄连3 g，甘草6 g，柴胡6 g，枳壳6 g，白芍9 g，大枣10 g;半四左合方：制半夏9 g，黄芩6 g，干姜6 g，党参12 g，黄连3 g，甘草6 g，柴胡6 g，枳壳6 g，白芍9 g，吴茱萸1 g，大枣10 g。5个复方在本实验中均以汤剂形式应用，以水煎法煎取药汁，浓缩至每毫升含生药1 g浓度，冰箱保存备用。临用前以蒸馏水稀释，灌胃给药。②雷尼替丁胶囊，杭州塞诺菲.圣德拉堡.民生制药有限公司生产，批号：070912。
       1.3 试剂及仪器阿利斯蓝，美国chroma公司生产，上海化学试剂站分装。T6型紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限公司生产。
       2 方法
       2.1 5个复方对大鼠胃液分泌和胃壁结合粘液量的影响取SD大鼠56只，体质量220～250 g，随机分为空白对照组、雷尼替丁组、半夏泻心汤组、四逆散组、左金丸组、半四合方组、半四左合方组，每组8只。灌胃给药1次/d，连续3 d。末次给药后，将大鼠禁食不禁水24 h，在乙醚麻醉下，剖开腹腔，结扎幽门，同时经十二指肠给药1次，缝合切口。禁食禁水2 h后，拆线打开腹腔，结扎贲门，摘取全胃，沿胃大弯剪开胃，将胃液收集于刻度离心管，记录胃液量。然后将胃浸入20 ml的0.02%阿利斯蓝溶液中，25℃恒温孵育2 h，吸取7ml孵育液，3 000 r/min离心20 min后在T6型分光光度计上于615 nm处比色，根据所测光密度计算胃壁结合阿利斯蓝量，胃液经离心后，用二步滴定法[2]测定胃液游离酸和胃液总酸度，用麦氏法[3]测定胃蛋白酶活性。
       2.2 5个复方对小鼠水浸应激胃溃疡的影响健康昆明种小鼠70只，雄性，体质量25～28 g，随机分组同“2.1”项，每组10只。灌胃给药1次/d，连续给药3 d，对照组给等体积生理盐水。末次给药后1 h，将已禁食24 h的小鼠固定在钢丝架上，垂直浸入25℃的水中，水面浸至剑突部。浸入24 h后取出，颈椎脱臼处死小鼠。观察小鼠胃部的溃疡情况。计算溃疡指数和溃疡抑制率，在各组间进行统计分析比较。溃疡抑制率(%)=(对照组溃疡指数-实验组溃疡指数)/对照组溃疡指数×100%
       2.3 5个复方对大鼠盐酸乙醇胃溃疡的影响SD大鼠56只，体质量150～180 g，雌雄各半，随机分组同“2.1”项。大鼠禁食不禁水24 h，分别灌胃相应药物，空白对照组灌蒸馏水。灌胃体积均为10 ml/kg。1.5 h后每只大鼠灌1.5 ml盐酸乙醇(100 ml盐酸乙醇含盐酸1.7 ml和无水乙醇60 ml)。灌盐酸乙醇后1 h处死大鼠，开腹取胃，冲洗干净，观察胃粘膜损伤情况。以条索损伤的长度计算溃疡指数，1 mm计1分，不足1 mm计0.5分，每只大鼠计算溃疡指数总和。在各组间进行统计分析比较。
       2.4 统计学处理实验数据用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，数据结果±s表示，样本均数间的两两比较用q检验，多个实验组与一个模型组均数间的比较用Dunnett t检验。
       3 结果
       3.1 大鼠胃液分泌的测定结果见表1。表1 5个胃肠复方对大鼠胃液分泌的影响表1显示，5个复方中，四逆散组仅可降低大鼠胃液游离酸度(P<0.05)，其余4个复方均可降低大鼠胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性(P<0.05或P<0.01)，但以半四合方和半四左合方降低较为显著(P<0.01), 2个合方组与3个传统方组比较均有统计学意义(P<0.05)，说明两个合方降低幽门结扎溃疡大鼠胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性效果优于3个传统方。5个复方的降酸抑酶作用均不如雷尼替丁(P<0.05或P<0.01)。
       3.2 大鼠胃壁结合粘液量的测定结果见表2。表2 5个胃肠复方对大鼠胃壁结合粘液量的影响表2显示，5个复方中仅半四左合方可增加大鼠胃壁结合粘液量(P<0.01)，半四合方组大鼠组胃壁结合粘液量虽有所增加，但与对照组比较无显著性差异(P>0.05)，提示5个复方中半四左合方胃黏膜保护作用较强。
       3.3 小鼠水浸束缚应激胃溃疡的检测结果见表3。表3 5个胃肠复方对小鼠水浸束缚应激胃溃疡的影响表3显示，5个复方和阳性对照药对小鼠水浸应激胃溃疡均有拮抗作用。但5个复方中以半四合方和半四左合方降低溃疡指数效果较为显著(P<0.01)，其中半四左合方降低最为显著，与其它4个复方组比较均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，其降低溃疡指数效果超过阳性对照药雷尼替丁(P<0.05)。
       3.4 大鼠盐酸乙醇溃疡的的检测结果见表4。由表4结果可见，5个复方中以半四合方和半四左合方降低溃疡指数效果较为显著(P<0.01)，与其它3个复方组比较均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，半四左合方降低溃疡指数效果最为显著，其降低溃疡指数效果与阳性对照药雷尼替丁相当(P>0.05)。
       4 讨论
       方剂是中医临床用药的主要形式，也是辨证施治的重要环节，集中体现了中医药治疗疾病的特色。研究方剂的关键问题是配伍，方剂配伍方法主要有君臣佐使配伍法、药性配伍法、标本配伍法、药对配伍法、核心方剂加减配伍法、复方合方配伍法等，其中以两个以上经典小成方相互组合成方的复方合方配伍法组成了一些著名方剂。如清瘟败毒饮由白虎汤、黄连解毒汤、犀角地黄汤3方相合而成，血府逐瘀汤由桃红四物汤合四逆散加桔梗、牛膝组成。本课题研究的半四方和半四左方正是应用复方合方配伍方法组建的方剂，而实验结果也为这一组方思路和方法的正确性提供了佐证。表4 5个胃肠复方对大鼠盐酸乙醇溃疡的影响实验显示，除四逆散仅可降低大鼠胃液游离酸度外，其余4个复方均可降低大鼠胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性，但以半四合方和半四左合方降低较为显著(P<0.01), 两个合方组与3个传统方组比较均有统计学意义(P<0.05)，说明两个合方降低幽门结扎溃疡大鼠胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性效果优于3个传统方。但半四左合方的抑酸抑酶效果不如雷尼替丁(P<0.05)。说明其抗胃溃疡机制与雷尼替丁有所不同。
       水浸应激胃溃疡主要是由于中枢神经系统及植物神经系统紊乱导致胃肠运动与分泌功能失调引起的, 有实验报道,动物处于应激状态时,出现与人类消化性溃疡病变过程中相似的植物神经功能紊乱[4]。 实验表明,5个复方中以半四合方和半四左合方降低溃疡指数效果较为显著(P<0.01)，其中半四左合方降低最为显著，与其它4个复方比较均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，其降低溃疡指数效果超过阳性对照药雷尼替丁(P<0.05)。因此揭示复合方方剂有利于解除应激因素对胃肠道的影响,从而起到保护胃黏膜的作用方面具有优势,说明复合方剂对胃溃疡形成过程中的植物神经功能的调整作用较强。
       盐酸乙醇胃溃疡的发生是由于盐酸直接对胃组织的侵蚀, 损伤胃壁组织和局部血液循环障碍引起的。其发生机制与胃溃疡攻击因子如胃酸、胃蛋白酶阻滞于胃中侵蚀消化胃黏膜而形成溃疡有某些相似性。实验显示5个复方中以半四合方和半四左合方降低溃疡指数效果较为显著(P<0.01)，其中半四左合方降低最为显著，与其它4个复方比较均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，其降低溃疡指数效果与阳性对照药雷尼替丁相当(P>0.05)。从实验结果分析，削弱胃酸的侵蚀力可能是半四左合方抗胃溃疡的作用机制之一，但是该方对胃酸和胃蛋白酶的抑制作用不如雷尼替丁显著，而抗溃疡作用却并不逊于雷尼替丁，说明其作用机制与H2受体阻断药雷尼替丁不尽相同。其机制可能更多地与其增加胃壁结合粘液量、增强动物整体的抗胃溃疡能力有关。
       综上所述，本实验为合方组方的合理性和科学性提供了一定依据。合方组方在发挥中医治疗的整体作用方面具有明显优势，在对抗有害病理因素损害方面也呈现较强作用。合方配伍组方有其合理性和科学性，但其规律有待进一步探讨。
       【参考文献】
         　　[1] 陈建章,陈 文,朱荣林,等.五个胃肠复方对小鼠胃肠运动影响的比较研究[J].辽宁中医杂志,2009,36(5):830.
       
       [2] 陈 奇.中药药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：859.
       
       [3] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1982：849.
       
       [4] 陆卓珊,江文君,孙淑曼,等.大黄对应激性胃溃疡大鼠血浆内cAMP和cGMP的影响[J].中国中西医结合杂志,1984,4(10):622.