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       【摘要】 
       目的观察淫-鹑方对小鼠免疫功能的影响及其治疗变态反应性鼻炎的临床疗效。方法实验研究将小鼠随机分为3组，3组小鼠连续用药观察10 d后处死，取其脾制成脾细胞悬液，用流式细胞仪检测T细胞亚群。临床研究将临床上189例变态反应性鼻炎患者分为治疗组和对照组，分别应用淫-鹑方和开瑞坦进行治疗4～8周后，随访12～18个月评价其疗效。结果实验研究的治疗组与模型组相比，CD3+、CD4+T细胞亚群的比例和CD4+/CD8+的比值都有明显的升高,差异有显著性意义（P<0.01或P<0.05），CD8+T细胞亚群的比例降低，差异也有显著性意义(P<0.01)。临床研究发现治疗组的远期有效率比对照组的远期有效率明显要高（χ2=5.69,P<0.05），差异有统计学意义。结论淫-鹑方能够显著提高小鼠的免疫功能,改善其免疫系统紊乱的状况；淫-鹑方也能够调节人体免疫功能，改善过敏体质，增强抗病能力，是治疗变态反应性鼻炎的有效方剂。
       【关键词】  淫-鹑方； 变态反应鼻炎； 免疫功能
        变态反应性鼻炎是发生在鼻腔粘膜的变态反应性疾病，极易诱发上呼吸道感染［1］，近年来发病率呈明显上升趋势。在长期的临床工作中我们发现淫-鹑方（自拟）能够提高上呼吸道易感人群的抵抗力，因此我们于2001-05～2005-12采用淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎189例，效果良好，并同时进行了淫-鹑方对小鼠免疫功能影响的实验研究。现报道如下。
       1  材料
        昆明系雄性小鼠，清洁级,体质量（20±2）g,共30只，由三峡大学动物实验中心提供。药物：淫-鹑方粉末（用时用无菌生理盐水溶解）由湖北长阳县人民医院制备；环磷酰胺(Cy),白色结晶，200 mg/瓶配制，批号为030803，上海华联制药有限公司生产。试剂：T细胞亚群检测试剂盒，由Caltag Laboratories生产；PBS液、Hank"s液，由三峡大学医学院天然药物实验室提供。
       2  方法
       2.1  分组取昆明系雄性小鼠30只，随机分为3组，每组10只。第1组为空白对照组，实验进程中正常饲养不作任何处理；第2组为模型对照组，腹腔内注射环磷酰胺造模, 环磷酰胺用量为80 mg/kg,ip qd·1 ，同时灌服生理盐水25 ml/kg·d；第3组为药物治疗组,用Cy行腹腔注射，用量为80 mg/kg,ipqd·1并同时用淫-鹑方粉剂溶解液灌胃，小鼠的用药剂量为25 g/kg·d。三组均连续用药10 d。
       2.2  标本采集和检测用药10 d后,予末次灌胃给药1～2 h内处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank"s液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，用Hank"s液洗2次，每次离心10 min（1 000 r/min）。然后将细胞悬浮于1 ml的完全培养液中，调整细胞浓度为1×106个/mL，取上述细胞悬液到1～5号试管，标记管号为(1#Rat-IgG2a-PE，  2#  Hamster-IgG-FITC，3# Mouse-CD3-FITC，4#Mouse-CD4-PE，5#Mouse-CD8-PE)取相应荧光单抗与上述的试管的单细胞悬液充分混匀，避光室温孵育15 min，于countler-PREP破碎红细胞后，用流式细胞仪检测［2］。
       2.3  观察指标各组小鼠脾组织T细胞亚群的百分比以及CD4+/CD8+值的比较。
       2.4  统计学方法实验数据用±s表示，应用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，各组间比较采用t检验，P<0.05为差异有显著性意义。
       3  结果
       3.1  动物数量分析30只小鼠在实验过程中未死亡，全部进入结果分析。
       3.2  各组小鼠脾组织T淋巴细胞亚群流式结果分析模型组小鼠脾脏CD3+，CD4+ ，CD8+T细胞亚群的百分比与空白组相比较都有所降低（P<0.01或P<0.05），模型组小鼠CD4+/CD8+的比值与空白组相比较亦降低（P<0.01），差异有显著性意义。见表1；治疗组小鼠CD3+，CD4+T细胞亚群的百分比与模型组相比较都有所升高(P<0.01)，CD8+T细胞亚群的比例降低，差异也有显著性意义(P<0.01)，治疗组小鼠CD4+/CD8+的比值与模型组相比较也有所升高（P<0.01），差异有显著性意义。见表2。表1  空白组与模型组小鼠T细胞亚群的比较（略）表2  模型组与治疗组小鼠T细胞亚群的比较（略）
       4  临床研究
       4.1  一般资料在我院专科门诊中随机选择变态反应性鼻炎189例，其中男88例，女101例；年龄9～53岁，平均21岁；病史均在两年以上，最长达20年左右。患者主要表现为鼻痒、鼻塞、水样鼻涕、打喷嚏、头昏、头痛等。呈反复发作或治疗-好转-又发作的特征，一般一年内发作6～12次。常伴精神不振、易倦、记忆力减退等症状。检查鼻粘膜水肿、苍白、鼻腔有水样或粘液样分泌物，鼻甲肿大、重者呈紫色。189例中合并过敏性咽喉炎者35例、过敏性鼻窦炎的29例、慢性支气管炎13例、支气管哮喘8例。189例随机分为两组,治疗组152例，对照组37例。
       4.2  方法
       4.2.1  治疗方法
       淫-鹑方主要由淫羊藿、肉苁蓉、鹌鹑等天然药物组成，将上方按工艺流程加工、粉碎成末。治疗组口服淫-鹑方粉末，每次30 g，3次/d，温开水冲服，7 d为一疗程，每疗程复查一次，连续服用4～8疗程。对照组口服开瑞坦，每次10 mg，3次/d，连续服用4～6周，另加鼻丘冷冻，每周1次，冷冻4～6次后停止观察2周。
       4.2.2  观察指标 
       参照中华医学会耳鼻咽喉科学分会变态反应性鼻炎的诊断标准，用药4～8周复诊进行近期疗效评价 ，随访12～18个月进行远期疗效评价。以远期疗效作为评价本方的治疗结果，以痊愈例数计算治愈率，以痊愈、显效加好转例数计算有效率。痊愈：近期复诊症状、体征消失，随访期间无复发；显效：近期复诊症状、体征消失，随访期间复发1～2次，但持续时间短；好转：近期复诊症状、体征大部分消失，随访期间复发3～4次；无效：近期复诊症状、体征部分减轻，远期随访症状、体征均无明显改变。
       4.2.3  统计学方法
       所得数据经SPSS10.0软件包进行统计学分析，组间比较应用χ2检验。
       4.3  治疗结果
       本组189例，随访12～18个月，治疗组随访147例，失访5例；对照组随访36例，失访1例。共随访183例，随访率为96.82% 。治疗组147例中痊愈95例，显效23例，好转16例，无效13例。治疗组远期治愈率为64.63%，远期有效率为91.16% 。其中大部分患者自觉体质增强，感冒比过去明显减少。对照组36例中痊愈8例，显效12例，好转7例，无效9例。对照组远期治愈率为22.22%，远期有效率为75.00% 。详见表3 。治疗组的有效率比对照组的有效率明显要高（χ2=5.69，P<0.05），差异有统计学意义。表3  治疗组与对照组远期疗效比较（略）
       5  讨论
        变态反应性鼻炎是发生在鼻腔粘膜的变态反应性疾病，近年来发病率呈明显上升趋势。鼻腔粘膜的变态反应使鼻腔粘膜水肿和渗出，除了产生局部症状外，还使上呼吸道通气不畅，病人易倦、精神不振、头昏、头痛、记忆力减退。 鼻腔与鼻窦、咽腔相连，鼻腔粘膜的变态反应很易波及鼻窦、咽喉部、气管和支气管，并发病毒或细菌感染。对变态反应性鼻炎临床上一般采用抗过敏药物、冷冻、激光、射濒、微波、激素封闭等疗法。这些治疗方法虽然都有一定疗效，但易在短期内复发。应用中药组方治疗变态反应性鼻炎，调节其免疫功能，协调免疫反应，调整过敏性体质，增强抗病能力是一个值得探索的途径。在长期的临床工作中我们发现天然药物淫-鹑方能够提高上呼吸道易感人群的抵抗力，因此我们探索应用淫-鹑方来治疗变态反应性鼻炎，进行了为期四年多的临床观察，并同时进行了淫-鹑方对小鼠免疫功能影响的实验研究。
        实验研究显示，在对雄性小鼠用Cy进行注射造模后，与空白组相比，CD3+、CD4+ 、CD8+和CD4+/CD8+的比值明显下降（P<0.01或P<0.05）。CD4+、CD4+/CD8+明显降低，表明T细胞亚群异常。CD4+ T细胞的减少不仅可以导致产生多种淋巴因子的能力减弱，而且还可导致协助B细胞产生抗体及辅助其他细胞亚群等功能的减弱，影响细胞免疫反应及抗体形成，从而使机体免疫功能降低，说明小鼠在进行Cy注射后免疫功能低下。而CD8+水平异常降低，可能是由于小鼠在Cy刺激后，所产生短暂的应激反应，具体的机理还不是很清楚。应用淫-鹑胶囊后，与模型组相比，CD3+，CD4+和CD4+/CD8+的比值明显升高（P<0.01或P<0.05），CD8+水平明显降低 （P<0.01），提示应用淫-鹑胶囊后，小鼠的免疫力有了较大的提高。其机制可能与方中淫羊藿多糖、肉苁蓉多糖等成分刺激T细胞产生IL-2细胞因子，引起多种淋巴细胞(如T、B细胞及NK细胞等)的增殖,增强CTL、NK细胞和LAK细胞的杀伤活性，促进B细胞产生抗体，诱导IFN分泌等，从而达到提高和协调小鼠免疫功能的作用［3］。
        变态反应性鼻炎为一种变态反应性疾病,由IgE 和肥大细胞介导。机体被特异性变应原致敏后产生特异性IgE ,后者固定于肥大细胞表面,使机体致敏,已被致敏的机体再次暴露于特异性致敏物,即可在肥大细胞上产生抗原抗体反应,导致肥大细胞脱颗粒,并释放介质-组胺。组胺作用于细胞的H1 受体,可引起一系列反应。有研究发现，B 细胞前体集落增强因子( PBEF) 、CD83抗原基因表达的上调提示变应性鼻炎并发支气管哮喘患者体内B细胞存在着持续的活化,由此产生大量IgE抗体,介导了I型变态反应的发生［4］。淫-鹑方的主药之一的淫羊藿主要含有淫羊藿苷、去氧甲基淫羊藿苷、淫羊藿多糖、淫羊藿总黄酮等化学成分，淫羊藿多糖能够促进胸腺释放成熟细胞，增强机体细胞免疫功能，而且还能促进T细胞增殖，激活巨噬细胞，提高机体免疫力［5］。淫羊藿总黄酮不但能够改善血液透析患者的临床症状，还能够提高机体的T细胞免疫功能［6］。肉苁蓉主要成分肉苁蓉多糖能够促进小鼠胸腺淋巴细胞内钙释放,使胞内钙离子浓度升高，而促进了IL-2基因的表达,导致T细胞增殖［7］，而提高机体免疫力。因此淫-鹑方不但在临床上对变态反应性鼻炎有较好的疗效，同时还可以提高机体免疫力达到防御疾病的效果。
        目前临床上治疗变态反应性鼻炎的方法主要有微波、激光、中药、抗过敏药物等。有研究显示［8］，微波和激光治疗变态反应性鼻炎随访1～2年后，激光治疗组总有效率为92.2%，微波治疗组有效率为91.9%，两种方法比较差异无显著性意义。但两种方法对过敏性体质、有哮喘史和免疫功能低下的患者，治疗效果欠佳。本研究显示，淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎的远期治愈率为64.63%，远期有效率为91.16% ，与开瑞坦药物治疗相比远期有效率明显提高
       （χ2=5.69，P<0.05）且大部分患者自觉体质增强，感冒明显比过去减少。合并过敏性咽喉炎的35例和过敏性鼻窦炎的29例均明显好转或痊愈；合并慢性支气管炎的13例和支气管哮喘的8例发作次数明显减少。淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎的远期有效率高，复发率低，疗效可靠，未发现不良反应。而且本方对增强体质和预防上呼吸道感染也有明显效果。 临床疗效证实本方具有扶正固本、固表祛邪，改善过敏体质，增强机体抗病能力的作用。
        淫-鹑方能够显著提高小鼠的免疫功能,改善其免疫系统紊乱的状况；淫-鹑方也能够调节人体免疫功能，改善过敏体质，增强抗病能力，是治疗变态反应性鼻炎的有效方剂。
       【参考文献】
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       ［4］祝戎飞，刘光辉，黄爱霞，等.变应性鼻炎并发支气管哮喘患者免疫相关基因表达的研究［J］. 临床耳鼻咽喉科杂志，2006 ，20（9）：405.
       
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