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       【摘要】 
       目的考察超滤对补阳还五汤保护大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤作用的影响。方法以脑梗塞体积百分比和行为学评分为评价指标，通过补阳还五汤原提取液与超滤液的对比，考察超滤液的脑保护作用是否变化。结果补阳还五汤提取液与超滤液对脑梗塞体积和行为学评分的影响没有组间差异。结论超滤对补阳还五汤保护大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用没有明显影响，超滤技术可用于补阳还五汤提取液的纯化过程。
       【关键词】  补阳还五汤; 超滤; 脑缺血再灌注
       补阳还五汤出自《医林改错》，由黄芪、当归尾、赤芍、桃仁、红花、地龙、川芎等药组成，具有补气活血通络的功能，主治中风后遗症，临床用量较大。但目前该处方在临床上使用的剂型都存在杂质含量高、服用体积大、外观及稳定性差的缺点。本研究以局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗塞灶面积及行为学评分为评价指标，考察了补阳还五汤提取液超滤前后脑梗塞灶面积及行为学评分的变化情况，为将超滤技术应用于该经典名方的纯化提供基础研究资料。
       1 材料与仪器
       1.1 药物与试剂TTC染色剂(上海化学试剂公司产品，批号20050401);多聚甲醛(上海溶剂厂产品，批号990731);黄芪、当归尾、赤芍、桃仁、红花、地龙、川芎等药材(购于甘肃兰州黄河药市,经兰州大学赵如能教授鉴定均为药典品种)。
       1.2 动物Wistar大鼠，SPF级，体质量200～250 g，♀，由甘肃中医学院实验动物中心提供。动物合格证号为:SCXK(甘)2004-006。
       1.3 仪器病理图象分析系统(四川大学产品)，低速离心机(北京医用离心机厂产品)，超滤装置(海宁丰源科技有限公司产品)，聚砜超滤膜(海宁丰源科技有限公司产品)，BS124S型电子天平(美国塞多利斯公司)。
       2 方法及结果
       2.1 处方提取液的制备 按处方比例称取药材2.0 kg, 回流提取2次，每次加水10倍量,每次提取1.5 h, 提取液浓缩至16 L，3 000 r/min离心10 min，所得上清液取10 000 ml备用，其余浓缩成浓度为1.0 kg(生药)/L的浓缩液备用。
       2.2 超滤液的制备[1，2]取“2.1”项提取液10 L用0.45 μm的微孔滤膜过滤，再用分子截留量为10万的超滤膜，在40℃、0.10 Mpa压强下超滤，超滤液浓缩成浓度为1.0 kg(生药)/L的浓缩液备用。
       2.3 分组及给药Wistar大鼠48只，随机分为4组：假手术组(NS等容量)，模型组(NS等容量)，补阳还五汤离心液组(10.0 g/kg生药量)，补阳还五汤超滤液组(10.0 g/kg生药量)。ig给药3 d后造模，待手术结束苏醒后再给药1次，给药量10 g/kg。
       2.4 动物模型制备[3]采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注病理及空白模型。7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉，分离右侧颈总动脉(CCA)，经颈内动脉(ICA)，插入用7号血管吻合线制备好的线栓，遇阻力止，插入深度为(21±0.5)mm，阻断大脑中动脉(MCA)的血流，造成局灶性脑缺血。线栓尾部置于皮下，再灌注时，轻轻拔出线栓即可。术中维持大鼠肛温在37℃左右，可用白炽灯加温。假手术组线栓插入深度为(10±0.5)mm不足以阻塞MCA不能造成局灶性缺血。术后对不符合要求的大鼠剔去不用，每组取造模成功大鼠8只，缺血2 h后再灌注4 h。然后观察以下各项指标。
       2.5 脑梗塞体积测定[3]将冻至适当硬度的大脑从枕极到额极切成等厚的冠状脑片，厚1 mm，37℃ 2%TTC溶液避光染色15 min。染色后的脑片缺血区为苍白色，非缺血区为鲜红色，界限对比清楚。将染色后的脑片投入4%多聚甲醛溶液中固定24 h后，采用病理图象分析系统测出脑总面积和梗塞灶面积,根据梯形公式算出相应的体积及梗塞灶体积百分比。结果见表1。
       2.6 行为学评分[3]观察及评分标准：①提鼠尾离地一尺，左肩内旋，左前肢内收者4分，否则0分。②将大鼠置平滑地板，分别推左、右肩，左侧阻力下降者评1～3分，左前肢肌张力下降者，根据程度评1～3分，满分10分，得分越高，行为障碍越严重，评分采用单盲法，并对两指标分别进行t检验。结果见表1。表1 脑梗塞体积测定及行为学评分结果与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01;与补阳还五汤离心液组比较，△P>0.05;n=8
       3 讨论
       中药提取物的纯化是中药制备工艺过程中的关键环节，由于中药复方的临床疗效是多成分多靶点整体作用的结果，因此无论活性成分的含量还是它们之间的比例变化均会影响处方的疗效，但目前在中药复方纯化工艺的筛选时多选用某一种或一类化学成分为来评价工艺的优劣，由于评价指标代表性差使优选所得工艺不能保证疗效。本实验采用以药效学指标优选所得的超滤工艺来纯化补阳还五汤，通过超滤液与原提取液对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗塞灶体积影响的比较研究进一步考察较大孔径超滤膜用于该处方纯化工艺的可行性，以保证该处方的疗效。
       处方提取液3 000 r/min离心旨在除去不溶性杂质以便于超滤，处方中多糖等可溶性大分子成分在低速离心条件下不会沉降，不会影响提取液疗效。
       本研究中离心液组和超滤液组的梗塞灶面积百分比和行为学评分没有组间差异，但纯化前后的出膏率相差8.2%，可见超滤工艺在减小服用剂量的同时未对该处方的疗效造成显著影响，可用于补阳还五汤提取液的纯化过程。
       【参考文献】
         　[1] 华耀祖.超滤技术与应用[M].北京:化学工业出版社,2004:184.
       
       [2] 魏舒畅,余 琰,王志旺,等.补阳还五汤超滤工艺优选条件的评价与优化[J].中成药,2009,19(2)：104.
       
       [3] 魏舒畅,程体娟,张文斌,等.复方沙棘1号颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机理探讨[J].中药药理与临床，2003，19(2)：32.