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       【摘要】 
       目的探讨黄精水提的最佳工艺。方法以浸膏得率和多糖含量为考察指标，采用正交实验优选黄精的提取工艺条件。结果影响黄精提取的因素的程度依次为固液比、提取次数、提取时间、浸泡时间。最适工艺条件为：加14倍量的水，浸泡30min，煎煮3次,30min/次。结论该工艺简便、可行。
       【关键词】  复方红景天口含片; 黄精; 提取工艺; 正交实验
       Water Extraction Technique of Polygonatum sibiricum in Compound Hongjingtian Buccal Tablets by Orthogonal Test
       ZHANG Ruitang1,2,SHI Xiaofeng2*,MA Quhuan1,2,ZHANG Fanghong2
       (1.Gansu College of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2.Gansu Academy of Medical Sciences,Lanzhou 730050,China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the optimum extraction technique of Polygonatum sibiricum in compound Hongjingtian buccal tablets.MethodsThe extraction ratio of whole solids and content of Polygonatum sibiricum polysaccharide were used as indexes,the optimum conditions of the extraction of Polygonatum sibiricum were studied by orthogonal design of L9(34).ResultsThe order of factors was A>D>B>C. The optimal extraction conditions were as follows:14 times of water ,soaking 30min, water decoction 30 minutes for three times. ConclusionThe best extraction technique is reasonable，practicable and convenient.
       Key words：Compound Hongjingtian buccal tablets; Polygonatum sibiricum Red; Extraction technique; Orthogonal test
       复方红景天口含片主要是用于预防治疗老年痴呆症，处方源自甘肃民间验方，由红景天、何首乌、黄精、甘草等药组成。其佐药黄精[1]为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.，黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎，按形状不同，习称“大黄精”“鸡头黄精”“姜形黄精”。始载于《名医别录》，具补肾益精、滋阴润燥之功。现代药理实验证明黄精具有调节免疫功能、抗衰老、抗菌抗病毒、抗肿瘤、降血糖、 降血脂的作用，其主要化学成分为皂苷、糖类、菸酸、醌类、氨基酸及微量元素[2]。黄精多糖由葡萄糖、甘露醇、半乳糖醛酸缩合而成，其糖链以2～6线形连接为主链[3]，因其具有抗缺血/缺氧诱导的神经细胞凋亡作用[4]，为重要的生物活性成分之一，因此，本文应用正交实验法重点对黄精多糖的水提工艺进行了系统研究，希冀为复方红景天口含片的制剂工艺研究提供参考。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器UV-240型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);800型离心沉淀器(上海手术器械厂);AE260型万分之一电子天平(瑞士Mettle公司); CP225D十万分之一电子分析天平(德国赛多利斯公司);R-200型旋转薄膜蒸发仪(瑞士BüCHI公司);SHZ-D型循环水式真空泵(河南巩义市予华仪器有限责任公司);SK3310LHC型KUDOS超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
       1.2 试药黄精药材购于兰州安泰堂中药饮片有限公司，由甘肃省医学科学研究院何福江研究员鉴定为Polygonatum sibiricum Red.。
       D-无水葡萄糖(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110833-200503)，蒽酮、硫酸、乙醇等均为分析纯，水为重蒸馏水。
       2 方法与结果
       2.1 多糖含量测定
       2.1.1 对照品溶液的制备精密称取P2O5减压干燥器中干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品4.06 mg，置25 ml棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，配成浓度为0.162 4 mg·ml-1的对照品溶液。
       2.1.2 样品的制备称取粉碎过筛(10目)的黄精粉末5 g ,分别按实验设计安排进行实验，合并提取液，滤过，滤液浓缩定容至100 ml,作为贮备液，备用。再精密吸取储备液2 ml，加入无水乙醇15 ml，静置使其沉淀，离心10 min，抽滤，多糖沉淀用无水乙醇洗涤3次，连同滤纸一起置烧杯中，加水适量，超声提取20 min，转移至100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，作为供试品溶液，备用。
       2.1.3 蒽酮试剂的配制称取蒽酮0.2 g，浓硫酸溶解定容于100 ml容量瓶，用时新鲜配制。
       2.1.4 波长的选择精密量取对照品溶液和供试品溶液各1ml于具塞试管中，蒸馏水补至2 ml，置冰浴中，缓慢加入新鲜配制的0.2%蒽酮试剂8 ml，摇匀，于沸水浴上加热10 min，迅速置冰浴中冷却，在波长 400～700 nm扫描，另取1 ml蒸馏水同法操作作参比。结果表明对照品和样品均在585 nm波长处有最大紫外吸收。
       2.1.5 标准曲线的绘制精密吸取D-无水葡萄糖对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml置试管中，蒸馏水补至2 ml，缓慢加入新鲜配制的0.2%蒽酮试剂8 ml，摇匀，于沸水浴上加热10 min，迅速置冰浴中冷却，以首管作空白，于585 nm波长处测定吸收度，分别为0，0.176，0.331，0.479，0.655，0.797，0.938，1.088。以吸收度(A)为纵坐标、D-无水葡萄糖浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=0.774C+0.0158 (R2=0.999 1)，表明在32.48～327.36 μg 范围内有良好的线性关系。
       2.1.6 精密度实验精密吸取对照品溶液1.0 ml，按标准曲线的绘制方法“2.1.4”依法操作，在585 nm波长处连续测定 6 次，吸光度分别为 0.797，0.798，0.797，0.797，0.797，0.797，吸光度的RSD为0.05%。
       2.1.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液1.0 ml，按标准曲线的绘制方法“蒸馏水补至2 ml起……”依法操作，在585 nm波长处，每间隔10 min测定一次吸收度，发现在2 h后吸光度有变化， 2 h内吸光度的RSD为0.16%，结果表明在120 min 内稳定性良好。样品从冰浴中取出30～120 min内测定最佳。
       2.1.8 重复性实验精密吸取供试品溶液1.0 ml 6份，按标准曲线的绘制方法“2.1.4”依法操作，在585 nm波长处，测定吸收度，结果吸收度的RSD为 1.00%，表明方法的重现性良好。
       2.1.9 加样回收率实验精密吸取含量为148.18 mg·g -1的供试品溶液0.50 ml，分别置具塞管中，并分别精密加入对照品溶液0.2，0.4，0.6 ml，按标准曲线的绘制方法“2.1.4”依法操作，在585 nm波长处测定吸收度，计算得到平均回收率为100.40 %，RSD为1.22%。结果见表1。表1 加样回收率实验
       2.2 浸膏得率的测定精密吸取储备液20.0 ml，水浴蒸干，105℃烘3 h，取出置干燥器内冷却30 min，迅速称重，计算。计算公式如下：浸膏得率(%)=干浸膏重量/ 药材质量 ×5×100%。
       2.3 正交实验根据预试验的结果，将影响水提工艺的主要因素固液比、提取时间、浸泡时间、提取次数为考察因素，以多糖得率和干浸膏得率的综和评分为考察指标，每个因素选择3个水平，按正交实验设计表，进行L9(34)优化实验，因素水平见表2，正交实验结果见表3，方差分析见表4。表2 因素水平表3 正交实验结果表4 方差分析
       根据综合评分的极差 R值可以看出，影响因素的排序为A>D>B>C，综合各因素的K值和直观比较，得出理论最佳工艺条件为A3D3B1C1 ;综合评分的方差分析表明A、D影响非常显著，P<0.01，B因素影响显著，P<0.05，故最终确定的最适佳提取工艺为：加14倍量的水，浸泡30 min，煎煮3次，30 min/次。
       2.4 最佳提取工艺验证称取粉碎过筛(10目)的黄精粉末5g 3份，按正交实验确定的最优条件提取黄精，依“样品的制备”项下方法，制得贮备液和供试品溶液，分别测定浸膏得率和多糖含量，结果浸膏的平均得率为53.52%，多糖的平均含量为15.27%，多糖的含量优于正交实验中的任何一组，浸膏的得率较高，表明最佳提取工艺可行。
       3 讨论
       黄精的提取工艺有水提[5]、超声提取[6]，我们在研究复方红景天口含片的制备工艺时，对黄精的水提工艺进行了系统研究，得到的最佳工艺经过验证其浸膏得率和黄精多糖含量都比较高。
       通过对比试验，我们选择了蒽醌试剂作为显色剂，其稳定性相对较好，但是需新鲜配制，时间过长，将影响显色;在沸水浴中反应时间应严格控制在10 min，过短或过长也将影响多糖的含量测定。
       多糖沉淀时乙醇浓度和沉淀次数是影响多糖提取率的重要因素，在今后的实验中应重点加以考虑。
       【参考文献】
         　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:215.
       
       [2] 庞玉新,赵 致,袁 瑗,等.黄精的化学成分及药理作用[J].山东农业生物学报,2003,22(6):547.
       
       [3] 张瑞林.中药黄精的研究和开发利用途径[J].渝州大学学报(自然科学版),2002,19(4):5.
       
       [4] 肖移生.缺血/缺氧性神经细胞凋亡与中药黄精药理作用研究进展[J].江西医学院学报,2005,45(2):103.
       
       [5] 霍泳宁,鞠建明.正交实验法优选黄精水提工艺[J].中医研究与信息,2005,7 (5):16.
       
       [6] 高红莉,曲晓兰,苏延友.泰山黄精多糖的超声提取及含量测定[J].泰山医学院学报,2006,27(2):151.