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       【摘要】 
       目的观察槐耳配合体部伽马刀治疗对原发性肝癌患者免疫功能的影响。方法采取随机对照分组，将60例肝癌患者分为两组。治疗组(30例)为伽马刀治疗加口服槐耳颗粒;对照组(30例)为单纯行伽马刀治疗。用流式细胞仪检测T细胞免疫功能(CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+)、NK细胞阳性百分率，采用郭峰免疫粘附酵母花环法检测红细胞免疫功能(TER、RBC-C3bRR及RBC-ICR)，观察治疗前、后患者免疫参数：CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+，NK，TER，RBC-C3bRR及RBC-ICR的变化。结果治疗组用药后患者T细胞亚群、NK细胞、红细胞活性明显高于治疗前(P<0.05)，与对照组相比，1个月患者免疫功能变化不显著(P>0.05)，2个月患者免疫功能变化最显著(P<0.01)。结论槐耳配合体部伽玛刀治疗原发性肝癌能增强患者的免疫功能，且治疗1个月时给药最为适宜。
       【关键词】  原发性肝癌; 体部伽马刀; 槐耳; 治疗; 免疫功能
       Curative Effect of Huaier Combined with Whole Body γ-knife on the Immunological Function in the Patients with Primary Hepatic Cancer (PHC)
       YUAN Lin, YANG Jianqing，PAN Guangdong
       (The Fifth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University , Liuzhou 545006, China)
       Abstract：ObjectiveTo observe the curative effect of Huaier combined with whole body γ-knife on the patients with immune parameters in primary hepatic cancer (PHC). Methods60 patients with PHC were randomly divided into treatment group and control group, receiving Whole Body γ-knife plus Huaier or Whole Body γ-knife alone respectively. Their immune parameters such as CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+ and the activity of natural killer(NK) cell in peripheral blood were measured by flow cytometry before and after treatment. Their RBC immune parameters such as TER,RBC-C3bRR and RBC-ICR in peripheral blood were measured by immune fluorescent assay before and after treatment. The data of the two groups were analyzed. ResultsAfter treatment, the blood levels of T cell subgroups (CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+) and NK cell activity were significantly lighter than those before treatment (P<0.05); the blood levels of TER and RBC-C3bRR were significantly higher than those before treatment, but RBC-ICR was decreased (P<0.01). Compared with control group, there was no significant difference in a month(P>0.05), and the most significant change was observed in two months(P<0.01). ConclusionTreatment of Huaier combined with whole body γ-knife can enhance the cellular immune function in patients with PHC, and it is optimal to administer Huaier one month later.
       Key words：Primary hepatic cancer; Whole Body γ-knife; Huaier; Therapy ; Immunologic function
       患者免疫功能的下降与恶性肿瘤的发生、发展及预后有着密不可分的关系，随着病情进展，肿瘤体积的增大，免疫功能可进行性抑制。槐耳作为一种免疫增强剂，非特异性刺激T淋巴细胞的分化、增殖、成熟，可恢复NK细胞活性，促使T细胞分化成熟，激活CD4+，CD8+和NK细胞的产生，调节和增强人体免疫功能。而体部伽马刀立体定向三维适形放疗技术为大多数无手术指征的中、晚期肝癌患者的治疗提供了一种全新治疗方式。我们于2007-06 ～ 2009-02采用槐耳配合体部伽马刀治疗原发性肝癌30 例，配对抽取同期单纯行体部伽马刀治疗30例肝癌患者作为对照，比较两组细胞免疫功能变化，总结结果报道如。
       1 临床资料
       在我院接受体部伽马刀治疗的60例原发性肝癌患者，男性42例，女性18例， 年龄26 ～75 岁，平均年龄为58.3岁。Ⅰ期4 例，Ⅱ期16 例，ⅢA 期25 例，ⅢB 期6例，ⅣA 期7例，ⅣB 期2例。甲胎蛋白(AFP)> 20 μg/ml 51 例;肝区疼痛47 例，门脉癌栓9例，少量腹水21例。
       2 方法
       2.1 研究方法对60例肝癌患者行体部伽玛刀治疗，随机将治疗后的患者分为两组。治疗组30例，治疗结束1周后接受口服槐耳颗粒: 20 g/次,3次/d，连续2个月;对照组30例，单纯伽玛刀治疗，不加用其它生物制剂或中药。
       2.2 检测方法 伽玛刀治疗前1 d及治疗后1周，1月，2月，3月对两组患者分别采取清晨空腹外周静脉血3 ml一次，测定T细胞免疫功能(CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+)、NK细胞阳性百分率、红细胞免疫功能(TER、RBC-C3bRR及RBC-ICR)等免疫指标。T 细胞亚群、NK细胞阳性百分率用流式细胞仪检测。采用郭峰免疫粘附酵母花环法检测红细胞免疫功能，试剂由华中科技大学同济医学院附属同济医院中心实验室配制。
       2.3 统计方法 实验数据用SPSS11.0统计软件处理，采用t 检验。
       3 结果
       3.1 T细胞、NK细胞免疫功能变化 与行体部伽玛刀治疗前相比较，治疗后CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+，NK等在1周变化不明显(P>0.05)，1月时明显增强(P<0.01)并达到高峰，2月已明显下降，3月时接近治疗时水平。治疗组与治疗前比较，肝癌患者T细胞、NK细胞免疫功明显增强(P<0.05)。与对照组比较，1月时患者免疫功能变化不显著(P>0.05)，2月时患者免疫功能变化显著(P<0.01)。结果见表1～2。表1 体部伽马刀治疗前、治疗后细胞免疫指标的变化表2 治疗后两组细胞免疫指标的变与同组治疗前后比较，△P<0.01;组间治疗前后比较，﹡P>0.05，﹡﹡ P<0.01
       3.2 红细胞免疫功能变化 与行体部伽玛刀治疗前相比较，治疗后1周TER、RBC-C3bRR较治疗前明显升高，而RBC-ICR明显降低，红细胞的免疫功能增强(P<0.01)，1个月仍明显增强(P<0.01)并达到高峰，2个月明显下降，3个月接近治疗时水平。治疗组与治疗前比较，患者红细胞免疫功能明显增强(P<0.05)。与对照组比较，1个月患者免疫功能变化不显著(P>0.05)，2个月患者免疫功能变化最显著(P<0.01)。结果见表3～4。表3 体部伽马刀治疗前、治疗后红细胞功能的变化表4 治疗后两组红细胞功能的变化
       3.3 体部伽马刀治疗后临床疗效及并发症治疗后，52例患者有不同程度的发热和白细胞数增多，体温一般不高于39℃，经补液、抗炎后逐步恢复正常;术后GPT 一过性升高34例，1～2周后恢复到治疗前水平;食欲差、恶心、呕吐者11例，经对症处理后好转;出现少量反应性胸水3例，1周后逐渐吸收;治疗后8～12周行B超、CT等检查，比较治疗前后肿瘤的大小，42例治疗后肿瘤明显缩小，总有效率为70%;AFP均见不同程度的下降，≤20μg/ml 有39例。肝区疼痛47例患者中，症状完全消失23例，减轻11例;门脉癌栓9例患者中，有1例消失。
       4 讨论
       4.1 体部伽马刀治疗效果及其对机体免疫功能的影响 原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，目前治疗首选手术切除。但许多患者就诊时已是中晚期，手术切除只占全部病例的5%～10%，体部(全身)γ刀以Co源旋转的方法实现多野集束照射，利用局部很高的放射剂量来“损毁”病灶，使肿瘤周边的正常组织在治疗过程中仅受到“扫描式”照射，射线高剂量区与癌变靶区立体形状一致，能最大限度地利用射线杀死肿瘤细胞，且又较好地保护肿瘤周围的正常组织，可实现大剂量的单次治疗和较大剂量的分次治疗，以提高肿瘤的局控率[1]。机体的免疫功能与肿瘤发生和发展有密切相关。有资料表明，原发性肝癌患者的细胞免疫机能低下，表现为辅助性T 淋巴细胞CD+4减少、CD4+/CD8+比值降低，NK细胞降低[2]。测定CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值，能直接反映患者细胞免疫水平。NK细胞作为机体免疫监视功能的主要细胞，是抗肿瘤的第一道防线，能够调节骨髓干细胞、胸腺细胞和B细胞的分化，分泌多种细胞因子，形成免疫调节网络[3]。我们采用体部伽马刀治疗60例原发性肝癌，1～3月后复查，其总有效率70%，这一结果与王玉洲等[4]报道相近。本研究还发现，体部伽马刀治疗后，患者的细胞免疫参数CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+、NK 等在1周时无明显改变，1月时明显升高并达高峰，提示治疗后病人的细胞免疫功能逐渐增强。其机制可能是体部伽马刀一方面是利用射线直接杀死肿瘤细胞，使患者的免疫功能得到改善;另一方面，治疗后破坏的肿瘤异化组织被机体吸收可在一定程度上激活机体的免疫系统，使机体的免疫力提高。
       多年以来，人们一直认为在机体的免疫机制中，起作用的主要是白细胞，而对红细胞的免疫功能尚缺乏足够的认识[2，3]。自1981年美国学者Siegel等提出了红细胞免疫系统新概念以来，许多研究表明，红细胞对机体的免疫有很重要的作用。红细胞膜存在着CR1(C3b受体)，与免疫复合物(IC)上的C3b结合，并将其携带到肝脾固定吞噬系统，被吞噬清除，从而起到清除抗原和循环免疫复合物的作用。红细胞能增强粒细胞、巨噬细胞的吞噬功能，对自身T、B细胞及NK细胞功能均有显著调节作用。TER、RBC-C3bRR和RBC-ICR的检测能够反映红细胞免疫粘附功能的活性，从而间接地反映了机体的免疫状态。 本研究发现，行体部伽马刀治疗1周后，TER、RBC-C3bRR较治疗前明显升高，1月时仍明显增强(P<0.01)并达到高峰，而RBC-ICR明显降低(P<0.01)，说明治疗后患者红细胞的免疫功能增强。其可能机制为：①伽马刀利用射线直接杀死肿瘤细胞，使患者的免疫功能得到改善;②治疗后肿瘤组织缺血,坏死,分泌释放肿瘤因子减少,机体的其它免疫功能改善;同时由于其分泌的抗原物质大量减少,使血液中免疫复合物减少,从而提高了红细胞的免疫功能;③治疗后肝脏生理功能得到改善，加速了IC清除;④红细胞不仅可直接免疫粘附肿瘤细胞，还可释放NK细胞增强因子，增强NK细胞和淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。
       4.2 体部伽马刀联合槐耳治疗对机体免疫功能的影响槐耳颗粒是由槐耳菌质中提取的一种真菌类抗肿瘤药物，其主要抗癌活性成分为多糖蛋白(PS-T)，PS-T具有良好的抗癌活性和免疫增强调节作用。其免疫调节作用机制包括：①激活巨噬细胞活性;②激活NK细胞活性;③促使T淋巴细胞分裂、增殖、成熟及分化，且具有调节T细胞比例的作用; ④提高体液免疫[5];⑤通过产生某些细胞激活因子如NK细胞激活因子等，进一步激活有关的免疫细胞。本研究结果显示：伽玛刀治疗后给予槐耳干预，患者T细胞、NK细胞、红细胞免疫功能明显增强(P<0.05)，但1月时患者免疫功能变化不显著(P>0.05)，2月时患者免疫功能变化显著(P<0.01)。表明：槐耳具有良好的免疫增强调节作用，可明显提高机体免疫功能，同时患者行伽玛刀治疗1月时免疫功能明显增强并达高峰，以后逐渐下降，此时给予药物槐耳来提高肝癌患者的免疫功能最为适宜，能延缓用药时间，减轻患者经济负担，有很好的临床应用价值。
       【参考文献】
         [1] 胡佳乐, 许福熙, 吴伯文. 肝癌立体定向放射治疗进展[J]. 现代肿瘤医学，2004, 12(6): 594.
       
       [2] Mizukoshi E, Nakamoto Y, Marukawa, et al. Cytotoxic T cell responses to human telomerase reverse transcriptase in patients with hepatocellular carcinoma[J]. Hepatology, 2006,43(6):1284.
       
       [3] Armeanu S, Bitzer M, Lauer UM, et al. Natural killer cell-mediated lysis of hepatoma cells via specific induction of NKG2D ligands by the histone deacetylase inhibitor sodium valproate[J]. Cancer Res，2005,65(14):6321.
       
       [4] 王玉洲,丁广成,秦德华. 全身伽马刀治疗肝癌30例[J]. 现代医学，2003,31(3)：147.
       
       [5] 陆 鹏，陈 莉，陆正鑫. 实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响[J]. 现代中西医结合杂志，2004,13(15):1982.