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       【摘要】 
       目的建立三棱饮片质量标准。方法测定三棱饮片的醇溶性浸出物及其有效成分总黄酮的含量，并进行性状、薄层鉴别等，在此基础上建立各指标的质量控制标准。结果三棱饮片薄层鉴别的条件为环己烷-醋酸乙酯（4∶2）为展开剂；各指标平均值，醇溶性浸出物为9.02%，总黄酮为0.94%。结论建立三棱饮片薄层鉴别、浸出物及总黄酮等质量控制标准。
       【关键词】  三棱； 总黄酮； 质量标准
       Study on Quality Standard of Sparganium stoleniferum
       ZHANG Xianhong,MAO Chunqin,LU Tulin*,DANG Xiaoping
       （Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing,Jiangsu,210046,China ）
       Abstract：ObjectiveTo build up the quality standard of Sparganium stoloniferum.MethodsTo determine the content of alcohol-soluble extract and total flavonoids in Sparganium stoloniferum and carry out the characteristics and TLC identification.On the basis of these examinations,the quality standard was built up. ResultsThe condition of TLC was cyclohexane- ethyl acetate(4:2).The average values of indices were alcohol-soluble extract 9.02%,total flavonoids 0.94%. ConclusionThe quality standard of sparganium stoleniferum is established in the aspects of the TLC identification ,alcohol extract and total flavonoids.
       Key words：Sparganium stoleniferum;   Total flavonoids;   Quality standard
       
       三棱片为黑三棱科黑三棱属植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.的干燥块茎经除杂，浸泡，润透，切薄片，干燥而得。黑三棱主要分布于我国东北、黄河、长江中下游流域，野生资源较为丰富；味苦、性平，入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛等功能；用于癥瘕痞块，瘀血经闭，食积胀痛［1］。三棱中含有的化学成分有黄酮类、挥发油类等。现代药理研究表明三棱总黄酮具有较强的抗血小板聚集、抗血栓和镇痛作用［2］。鉴于目前没有完善的质量标准用于控制三棱饮片的质量，本课题对其质量标准进行了研究，为三棱饮片的鉴别和质量控制提供了科学的方法，为中药科学规范化管理提供了依据，以保证药物制剂的安全有效。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器紫外分光光度计UV-2401PC(日本岛津工司)，752型紫外-可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，mettlerAG285型电子天平（瑞士梅特勒-托利多集团），超声波清洗机2200型（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。
       1.2  对照品芦丁（10080-200306）由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。
       1.3  药材从江苏省药材公司等共收集三棱饮片10批样品，经南京中医药大学中药鉴定教陈建伟教授研室鉴定为正品。
       2  方法与结果
       2.1  饮片性状本品呈类圆形薄片，切面灰白色或黄白色，粗糙，有多数明显的细筋脉点，周边灰棕色，有残留须根及疣状突起须根痕；质坚实；气微，味淡，嚼之微有麻辣感。
       2.2  薄层色谱鉴别［1］取三棱片粉末2 g，加乙醇30 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取三棱对照药材2 g，同时制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ  B）试验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层上，以展开系统1：石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（4∶1）及展开系统2：环己烷-醋酸乙酯（4∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。根据薄层色谱的分离情况，确定将环己烷-醋酸乙酯（4∶2）展开系统定为本品薄层的展开系统。
       2.3  浸出物按热浸法［2］测定，结果见表2。
       2.4  含量测定［2］
       2.4.1  测定波长的选择对照品溶液的制备：精密称取在120℃ 减压干燥至恒重的芦丁对照品25.05 mg，置50 ml 量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取25 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇置刻度，摇匀，作为贮备液，备用。
       
       供试品溶液的制备：取三棱片粗粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 ml，称定重量，水浴回流4 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液作为样品贮备液，备用。
       
       精密吸取对照品溶液5 ml、供试品溶液7.0 ml分别置25ml量瓶中，各加 5％亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置 6 min，加10％硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加70%乙醇至刻度，以相应试剂为空白，摇匀，放置15 min。经200～800 nm全波长扫描，扫描结果见图2。如图所示对照品及样品的紫外吸收非常相似，对比紫外吸收图谱发现，对照品及样品在480 nm处吸收平缓，且吸光度适中，适合含量测定，因此选择480 nm作为含量测定的波长。
       2.4.2  线性关系精密量取对照品溶液贮备液2，3，4，5，6，7 ml，分别置25 ml量瓶中，各加 5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置 6 min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10ml，再加70%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，照紫外－可见分光光度法［2］，在480 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程、相关系数以及线性范围分别为：Y=0.009 8X+0.023 8；相关系数r=0.999 6（n=6）；结果表明芦丁在20.04～70.14 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
       2.4.3  精密度实验取“2.4.2”项下对照品溶液，重复测定6次，三棱总黄酮紫外吸光度的RSD为0.24%。
       2.4.4  重复性实验取同一批号饮片（批号：080731）6份，按上述确定的供试品溶液制备方法制备样品，照标准曲线制备项下的方法，自“5％亚硝酸钠溶液1 ml”起依法测定吸收度，计算含量，结果样品平均含量为为0.67%， RSD为1.13%。
       2.4.5  稳定性实验取重复性试验的1号供试溶液，依次于不同时间测定紫外吸光度，在2 h内稳定（RSD为0.19%）。
       2.4.6  准确度实验精密称取三棱片粗粉(批号：080731)共9份，各0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入芦丁(1.623 6 mg/ml)对照品溶液0.8，1.0，1.2 ml，精密加入70%乙醇25 ml，称定重量，水浴回流4 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液7.5 ml，置25 ml量瓶中，照“2.4.2”项下的方法，自“5％亚硝酸钠溶液1 ml”起依法测定吸收度，计算芦丁平均回收率为97.71%，RSD=1.79%，符合要求。结果见表1。表1  芦丁的加样回收率实验结果（略）
       2.4.7  样品测定取10个批次的饮片按“2.4.1”项下供试品溶液制备制备供试品，照“2.4.2”项下的方法，自“5％亚硝酸钠溶液1 ml”起依法测定吸收度，计算总黄酮的含量。结果见表2。表2  三棱饮片各项质量指标测定结果（略）
       
       3  讨论
          
       根据三棱药材中各类成分的活性及理化性质，参照文献及2005版《中国药典》项下三棱薄层鉴别的方法及条件，对三棱片的薄层鉴别进行实验研究。以展开系统正丁醇-乙酸-水（3∶1∶1）对三棱中黄酮类成分进行薄层鉴别试验研究，结果显示各样品中共性特征斑点展开效果不理想，无法达到标准技术要求。对三棱片中低极性成分的研究参照2005版《中国药典》三棱项下内容，比较了展开系统1∶石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（4∶1）及展开系统2：环己烷-醋酸乙酯（4∶2），根据薄层色谱的分离情况，确定将环己烷-醋酸乙酯（4∶2）展开系统。
       
       张卫东等［3］曾报道在三棱中分离得到芒丙花素，课题组参照文献报道芒柄花素的含量测定方法进行实验研究，对芒柄花素测定方法条件进行反复调整改进，结果显示，芒柄花素只是在三棱片部分样品中微量存在，且含量达不到万分之二，在其它三棱片样品中无法检测其色谱峰，故芒柄花素不宜作为三棱饮片含量测定的指标成分。因此，建议在目前的状况下，不增订HPLC法的含量测定项。
       
       依次采用60%，70%，80%的乙醇为提取溶媒进行考察，结果发现70%的乙醇对总黄酮的提取效果最好。考察了超声、回流提取方式和不同的提取时间，发现回流对总黄酮的提取效果最好。最终确定供试品制备方法为：取三棱片粗粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 ml，称定重量，水浴回流4 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液作为样品贮备液，备用。
       
       含量测定结果表明，不同产地的三棱片总黄酮含量差异较大，其中浙江的含量最高，江苏的含量最低，两者含量相差有3倍之多。另外，即使同一地区的不同批次的三棱饮片中总黄酮的含量差异也较大。从总黄酮的含量来看，三棱饮片的质量不稳定，对三棱饮片建立含量测定是十分必要的。
       【参考文献】
         　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2005:11，22，附录XA，附录VA.
       
       ［2］陆兔林，叶定江，毛春芹，等.三棱总黄酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究［J］.中成药，1999，2l(10):511.
       
       ［3］张卫东，王永红.中药三棱黄酮类成分的研究［J］.中国中药杂志，1996，2l(9):550.